杨天一
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国际原子能机构基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Tat蛋白与Plk1相互作用位点的鉴定
- 2011年
- 目的确定Tat蛋白与Plk1的相互作用及作用位点。方法构建tat和plk1基因的不同表达载体,通过GST-pull down、免疫共沉淀检测它们表达产物的相互作用位点,激光共聚焦确定其在细胞内的定位。结果 GST-pull down和免疫共沉淀实验发现Tat蛋白能结合在Plk1 N端的激酶区域,激光共聚焦发现Tat蛋白和Plk1在细胞核内有相同的亚细胞定位。结论 Tat蛋白能结合在Plk1 N端的激酶区域引起Plk1 T210的磷酸化水平提高,从而激活Plk1的活性,导致细胞周期的紊乱。
- 杨天一张士猛尚增甫刘晓丹周平坤
- 关键词：PLK1
- DNA-PKcs单链抗体DPK3-scFv的原核表达纯化及生物学作用研究
- 2012年
- 目的原核表达和纯化DNA依赖性蛋白激酶催化亚单位(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)单链抗体DPK3-scFv,观察其透入细胞及干扰辐射诱发DNA-PKcs磷酸化修饰的生物学作用。方法 PCR扩增DPK3-scFv基因,插入到带有His标签的原核表达载体pET28a,重组质粒转化工程菌BL21、优化表达。免疫荧光显微镜和蛋白免疫印迹观察DPK3-scFv透膜进入HeLa细胞及对电离辐射诱发靶分子DNA-PKcs的磷酸化修饰的影响。结果成功构建单链抗体表达载体pET28a-DPK3-scFv,在2xYT培养基(16 g胰蛋白胨、5 g酵母提取物和10 g NaCl溶于1 L双蒸水中,高压灭菌)、20℃温度、0.2 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropy1-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)条件下诱导可溶性表达,进一步获得了纯化单链抗体。DPK3-scFv能体外抑制DNA-PKcs激酶活性,纯化的DPK3-scFv可跨膜进入细胞内,并与DNA-PKcs共定位在细胞核。DPK3-scFv对γ射线照射HeLa细胞中DNA-PKcs及其S2056位点(pS2056)的自磷酸化具有显著抑制作用。结论通过优化条件获得了可溶性原核表达的DPK3-scFv单链抗体,具有抑制其靶分子DNA-PKcs的磷酸激酶活性。
- 邢小翠周丽君尚增甫杨天一李兵王豫刘晓丹郑红汪思应周平坤
- 关键词：单链抗体原核表达DNA-PKCS电离辐射磷酸化
- HIV-1Tat 蛋白对DNA-PKcs的影响
- 艾滋病(AIDS)病毒感染者从早期的HIV感染到艾滋病发病的过程中会发生一些列的病理改变和出现相应的临床表现,其中HIV编码蛋白与机体功能蛋白的相互作用在包括免疫缺陷、恶性肿瘤在内的疾病发生发展中起到非常重要的作用。卡波...
- 杨天一
- 关键词：TATDNA-PKCSDNA修复PLK1CHK2HIV
- 文献传递
- 转录反式激活因子对DNA—PKcs启动子的调控作用
- 2012年
- 目的检测人类免疫缺陷病毒转录反式激活因子（TAT）对DNA依赖蛋白激酶催化亚单位（DNA—PKcs）基因启动子活性的影响。方法用PCR方法克隆DNA—PKcs基因启动子的系列截短体，通过DNA重组构建pGL3-basic—DNA—PKcs启动子报告质粒载体，通过双荧光素酶报告基因检测DNA—PKcs基因的启动子活性，采用基于乳糖抑制子和乳糖操纵子并结合绿色荧光蛋白分子荧光的大规模染色质松弛报告系统观察染色质的重构活性，并研究了电离辐射对TAT参与染色体重构的影响。结果构建了DNA—PKcs启动子（全长区域为-939hp--1bp）的系列截短体的报告质粒载体，鉴定出其核心区域为-64hp--1bp。TAT能够抑制DNA—PKcs基因启动子的转录活性。TAT具有大规模的染色体松弛活性，电离辐射能抑制TAT参与染色体重构的作用。结论TAT能抑制DNA修复基因DNA—PKcs的肩动子活性，电离辐射能抑制TAT参与染色体重构的作用。
- 杨天一张士猛秦夏李兵刘晓丹周平坤
- 关键词：反式激活
