李兵
- 作品数：9 被引量：12H指数：2
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- TAB182对电离辐射诱发细胞周期G_2/M阻滞的调节作用被引量：1
- 2012年
- TAB182是一个端锚聚合酶1(tankyrase 1)结合蛋白,它在体外能够被tankyrase 1发生二磷酸腺苷核糖基化(PAR)修饰,其生物学功能目前尚不明确.本研究发现,TAB182蛋白水平受电离辐射诱导表达,HeLa细胞经过4 Gy照射处理时,TAB182在2 h表达含量最高;经过不同剂量照射处理,2 h后2 Gy、4 Gy照射剂量组HeLa细胞中TAB182的表达有明显增加.通过shRNA沉默HeLa细胞中TAB182基因表达,导致其对4 Gy及以下剂量γ辐射的敏感性增加,但对8 Gy大剂量照射的敏感性没有明显变化.与对照组相比,4 Gy照射诱发TAB182基因沉默细胞的G2/M期阻滞时间显著延长.抑制TAB182表达导致细胞中DNA损伤反应蛋白DNA-PKcs、ATM、Chk2的表达水平显著降低.实验结果提示,TAB182蛋白参与放射DNA损伤信号反应和调控细胞周期G2/M进程.
- 邹联洪徐勤枝刘晓丹王豫李兵钟才高周平坤
- 关键词：DNA损伤修复电离辐射G2/M期阻滞
- 转录反式激活因子对DNA—PKcs启动子的调控作用
- 2012年
- 目的检测人类免疫缺陷病毒转录反式激活因子（TAT）对DNA依赖蛋白激酶催化亚单位（DNA—PKcs）基因启动子活性的影响。方法用PCR方法克隆DNA—PKcs基因启动子的系列截短体，通过DNA重组构建pGL3-basic—DNA—PKcs启动子报告质粒载体，通过双荧光素酶报告基因检测DNA—PKcs基因的启动子活性，采用基于乳糖抑制子和乳糖操纵子并结合绿色荧光蛋白分子荧光的大规模染色质松弛报告系统观察染色质的重构活性，并研究了电离辐射对TAT参与染色体重构的影响。结果构建了DNA—PKcs启动子（全长区域为-939hp--1bp）的系列截短体的报告质粒载体，鉴定出其核心区域为-64hp--1bp。TAT能够抑制DNA—PKcs基因启动子的转录活性。TAT具有大规模的染色体松弛活性，电离辐射能抑制TAT参与染色体重构的作用。结论TAT能抑制DNA修复基因DNA—PKcs的肩动子活性，电离辐射能抑制TAT参与染色体重构的作用。
- 杨天一张士猛秦夏李兵刘晓丹周平坤
- 关键词：反式激活
- 60Co γ射线诱导正常人淋巴母细胞PIG3基因mRNA表达的剂量相关性研究被引量：2
- 2011年
- 目的 探讨正常人淋巴母细胞AHH1电离辐射作用后PIG3基因mRNA表达变化的剂量-效应规律,建立一种基于基因表达变化的新型辐射生物剂量计的可能性.方法 激光共聚焦检测DNA双链断裂分子标记γ-H2AX集簇点,1、2、4、6、8和10 Gy 60Coγ射线照射AHHI细胞后4、10和24h收集细胞,应用实时荧光定量PCR技术对PIG3基因mRNA表达水平进行相对定量检测.结果 γ射线照射后30 min检测发现PIG3蛋白与γ-H2AX在细胞核内有部分共定位,形成集簇点(foci),表明其参与电离辐射致DNA双链断裂损伤信号识别反应.γ射线诱导PIG3基因mRNA表达水平随时间推移不断提高,持续时间可达24 h.PIG3基因mRNA表达水平具有显著的剂量依赖性,其表达丰度变化的剂量依赖范围在照射后4h为0～6Gy、照射后10和24 h均为0～10 Gy.结论 PIG3基因参与DNA双链断裂损伤信号识别反应,其mRNA的辐射诱导表达具有良好的剂量-效应关系,具有发展成为新的放射生物剂量计的价值.
- 刘晓丹张士猛李兵尚增甫徐勤枝周平坤
- 关键词：生物剂量计DNA损伤实时定量PCR
- p53诱导蛋白PIG3通过调控DNA-PKcs参与DNA损伤反应
- 李兵秦夏尚增甫张士猛尹姣姣刘晓丹王豫周平坤
- 文献传递
- DNA-PKcs单链抗体DPK3-scFv的原核表达纯化及生物学作用研究
- 2012年
- 目的原核表达和纯化DNA依赖性蛋白激酶催化亚单位(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)单链抗体DPK3-scFv,观察其透入细胞及干扰辐射诱发DNA-PKcs磷酸化修饰的生物学作用。方法 PCR扩增DPK3-scFv基因,插入到带有His标签的原核表达载体pET28a,重组质粒转化工程菌BL21、优化表达。免疫荧光显微镜和蛋白免疫印迹观察DPK3-scFv透膜进入HeLa细胞及对电离辐射诱发靶分子DNA-PKcs的磷酸化修饰的影响。结果成功构建单链抗体表达载体pET28a-DPK3-scFv,在2xYT培养基(16 g胰蛋白胨、5 g酵母提取物和10 g NaCl溶于1 L双蒸水中,高压灭菌)、20℃温度、0.2 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropy1-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)条件下诱导可溶性表达,进一步获得了纯化单链抗体。DPK3-scFv能体外抑制DNA-PKcs激酶活性,纯化的DPK3-scFv可跨膜进入细胞内,并与DNA-PKcs共定位在细胞核。DPK3-scFv对γ射线照射HeLa细胞中DNA-PKcs及其S2056位点(pS2056)的自磷酸化具有显著抑制作用。结论通过优化条件获得了可溶性原核表达的DPK3-scFv单链抗体,具有抑制其靶分子DNA-PKcs的磷酸激酶活性。
- 邢小翠周丽君尚增甫杨天一李兵王豫刘晓丹郑红汪思应周平坤
- 关键词：单链抗体原核表达DNA-PKCS电离辐射磷酸化
- PIG3影响DNA损伤反应中ATM对底物的磷酸化
- p53诱导的基因3(p53-inducible gene 3,PIG3)是p53下游靶基因之一,具有一定的醌氧化酶活性,通过产生活性氧的形式参与p53介导细胞凋亡.目前发现PIG3能够参与DNA损伤早期反应,但其具体机制...
- 李兵周平坤
- 与细胞周期G_2/M期进程相关的H2AX磷酸化被引量：7
- 2012年
- γH2AX焦点(foci)被普遍当做DNA双链断裂(DSB)损伤的分子标志物.为探讨细胞周期进程相关的H2AX磷酸化规律特征,采用胸腺嘧啶双阻滞结合噻氨酯哒唑(nocodazole)的后续处理,将HeLa细胞同步于有丝分裂的前中期.然后,用流式细胞仪检测细胞周期、Western印迹和免疫荧光法,观察γH2AX表达和γH2AX焦点的形成.结果显示,细胞进入G2/M期和有丝分裂过程中,γH2AX水平显著增加;在无DNA DSB发生的情况下,部分M期细胞中也存在大量的γH2AX焦点.随着细胞完成有丝分裂从M期退出再进入G1期,γH2AX的表达水平逐渐降低.这种γH2AX表达变化特征与G2/M期密切关联的PLK1和Cyclin B1的表达规律相类似.在4 Gy大剂量照射下,HeLa细胞于照后8到12 h出现明显的G2/M期阻滞.γH2AX焦点数在照后1 h达高峰,随后降低,照后8 h又上升,出现了第2个峰值.与之不同的是,在1 Gy低剂量照射下,细胞的G2/M期阻滞微弱,γH2AX焦点数在照后0.5 h最高,随后下降,且无反弹,符合DNA DSB的修复动力学特征.因此,将γH2AX当做DNA DSB分子标志物时,还需要考虑细胞周期变化的影响.γH2AX适合作为1 Gy以下照射的DNA双链断裂损伤的分子标志.
- 涂文志尚增甫李兵刘晓丹王豫徐勤枝让蔚清周平坤
- 关键词：细胞周期DNA双链断裂分子标志物
- p53诱导基因PIG3调控DNA-PKcs参与DNA放射损伤反应及机制研究
- p53诱导基因3（p53-inducible gene3, PIG3），是p53蛋白在细胞凋亡初始时所诱导表达的基因之一。PIG3与植物氧化还原酶TED2以及哺乳动物醌氧化还原酶γ-Crystallin具有一定的同源性，...
- 李兵
- 关键词：DNA修复DNA-PKCS细胞周期
- 文献传递
- ^(60)Coγ射线诱导正常人淋巴母细胞XPCmRNA表达的剂量相关性研究被引量：2
- 2011年
- 目的:研究正常人淋巴母细胞AHH-1电离辐射作用后XPC mRNA表达的剂量效应关系,探索建立一种基于基因表达变化的新型辐射生物剂量分子标志物的可能性。方法:剂量为1、2、4、6、8和10Gy的^(60)Coγ射线照射AHH-1细胞后4、10、24 h收集细胞,应用实时荧光定量PCR技术对XPC mRNA表达水平进行相对定量检测。结果:在0～10 Gy的γ射线照射后4 h,AHH-1细胞中XPC mRNA表达水平就显著增加,并达到第1个高峰,维持至10 h左右或有所降低,随后继续上升,持续时间可达24 h。在0～8 Gy剂量范围内辐射诱导XPC mRNA表达丰度随照射剂量的升高而上调,具有显著的剂量依赖性。结论:正常人淋巴母细胞XPC mRNA表达水平与电离辐射之间具有良好的剂量效应和时间效应关系,有成为新的辐射生物剂量计的潜力。
- 刘晓丹张士猛李兵樊嵘陈英周平坤
- 关键词：生物剂量计XPC实时定量PCR
