王豫
- 作品数：49 被引量：76H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- Tip60过表达对细胞DNA辐射损伤修复及细胞周期的影响被引量：2
- 2012年
- 为了探讨Tip60对细胞DNA损伤修复及细胞周期的影响及其相关机制,通过在U2OS细胞中稳定转染外源Tip60基因,分析了细胞增殖能力及DNA双链断裂修复能力,以及辐射后引起的细胞周期阻滞和细胞周期相关蛋白表达变化。结果发现Tip60在U2OS细胞中的稳定表达降低了细胞增殖能力却提高了细胞DNA损伤修复能力,并通过引起电离辐射诱发CyclinB/CDC2复合物表达水平下降,导致细胞G2/M期阻滞延长。
- 樊嵘刘晓丹王豫徐勤枝周平坤
- 关键词：DNA双链断裂DNA修复
- 香兰素衍生物BVAN08对人脑胶质瘤细胞的放射增敏作用及机制研究
- 2010年
- 目的 研究香兰素衍生物6-溴异香兰素（BVAN08）对人脑胶质瘤细胞的增殖影响、放射增敏作用和相关机制,为开发新的放射增敏抗癌药物提供实验依据.方法 采用MTT法、克隆形成率法检测BVAN08对U-251细胞增殖活性和60Co γ射线敏感性的影响（照射剂量率为2.3 Gy/min）;光学显微镜观察BVAN08作用后细胞形态学变化;透射电镜检测细胞自吞噬死亡;流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化;Western blot检测DNA修复蛋白DNA-PKcs的表达变化.结果 6-溴异香兰素BVAN08对U-251细胞增殖有显著抑制作用（t=1.83～3.07,P＜0.05）,在10～100 μmol/L浓度范围内呈剂量和作用时间依赖性,药物作用48和72 h的IC50分别为55.3和52.7 μmol/L.60 μmol/L BVAN08作用4 h后,U-251细胞产生明显的G2/M期阻滞,12 h达到峰值,G2/M阻滞达到63.3%,并开始同时出现细胞凋亡和自吞噬死亡.BVAN08对U-251细胞有明显的放射增敏作用,而且在照射前12 h给药的增敏效果最好,20 μmol/L浓度对2 Gy照射杀伤U-251细胞的增强比为3.14.Western blot检测表明BVAN08能显著抑制DNA-PKcs的表达.结论 香兰素衍生物BVAN08具有明显抑制人脑胶质瘤U-251细胞增殖和辐射增敏作用、并同时诱发凋亡和自吞噬死亡.BVAN08对U-251细胞的辐射增敏作用可能与G2/M期阻滞和DNA双链断裂修复关键蛋白DNA-PKcs表达的抑制敏感性有关.
- 王树彬张博孙伟建王豫刘晓丹徐勤枝周平坤
- 关键词：人脑胶质瘤细胞DNA-PKCSG2/M期阻滞放射增敏
- 重离子所致DNA双链断裂损伤修复的γH2AX焦点响应被引量：2
- 2017年
- DNA双链断裂(DSB)是电离辐射所致基因组DNA的主要和最严重的损伤类型,磷酸化组蛋白γH2AX能比较特异地在DSB处形成焦点,是DSB的分子标志物之一。比较了重离子~7Li、^(12)C与γ射线辐照小鼠MEF细胞诱发γH2AX焦点的规律特征。结果显示,诱发形成的平均每个细胞的γH2AX焦点数目与照后时间相关,表达峰值出现在照后2 h,但不同类型辐射高表达的持续时间不同。在相同剂量下,致焦点形成率与辐射的LET值相关,LET值越高,形成率越大。γ射线诱发的γH2AX焦点尺寸随照后时间无明显变化,高LET重离子诱发的γH2AX焦点尺寸随时间变化先增加后减小;与低LET的γ射线相比,高LET辐射诱发的焦点平均尺寸明显变大,LET越高焦点尺寸越大且保持时间越长。
- 隋丽王豫关华孔福全周平坤
- 关键词：基因组稳定性DNA双链断裂DNA修复重离子
- DNA-PKcs在ATM缺陷细胞中调节DNA损伤周期检查点反应机制的研究
- DNA-PKcs与ATM同属于磷脂酰肌醇3-激酶相关蛋白激酶(Phosphatidylinositol-3 kinase-related protein kinase, PIKK)超家族成员,具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性,...
- 黄波尚增甫徐勤枝张士猛刘晓丹王豫周平坤
- TAB182对电离辐射诱发细胞周期G2/M期阻滞的调节作用
- 邹联洪徐勤枝刘晓丹王豫周平坤
- 文献传递
- 6-溴异香兰素BVAN08诱发肝癌细胞HepG2纺锤体损伤和有丝分裂灾变死亡被引量：3
- 2008年
- 研究香兰素衍生物中的6-溴异香兰素(BVAN08)对细胞纺锤体结构的影响及诱发灾变死亡的相关机制,为开发该化合物为新的抗癌药物提供理论依据。通过光学显微镜观察BVAN08作用后细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞周期,纺锤体功能检测点实验和原位免疫荧光杂交实验分析细胞有丝分裂进程和纺锤体结构,Western印记检测BVAN08作用后相关蛋白质的变化。结果表明20～60μmol/LBVAN08作用后,HepG2细胞变圆不再贴壁生长、随后脱落死亡,具有浓度依赖性量效关系;明显诱导细胞G2/M期阻滞、导致细胞有丝分裂指数升高,并出现大量的非二倍体和多倍体细胞;破坏细胞纺锤体的结构,多中心体细胞显著增加;该化合物促使细胞周期转录调节因子FoxM1及其下游靶分子细胞周期蛋白B1和Cdk1的降解、阻止有丝分裂过程而导致有丝分裂灾变死亡。研究揭示BVAN08通过破坏纺锤体结构、诱发M期阻滞,导致细胞有丝分裂灾变死亡,FoxM1失活可能参与其作用机制。
- 张博王林王豫徐勤枝张士猛周平坤
- 关键词：FOXM1
- c-Myc蛋白与DNA-PKcs作用位点的鉴定
- DNA-PKcs是属于P13K家族成员的DNA依赖蛋白激酶催化亚基,与其它两个亚单位Ku70和Ku80共同构成DNA-PK复合物,参与DNA双链断裂的非同源末端连接修复过程。近年来有越来越多的研究报道,DNA-PKcs在...
- 尚增甫徐勤枝安静王豫周平坤
- 文献传递
- Tip60基因沉默对细胞DNA双链断裂修复和辐射敏感性的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨Tip60对细胞辐射敏感性的影响及相关机制。方法采用siRNA和Tip60乙酰转移酶抑制剂漆树酸，抑制U20S细胞中Tip60的表达或乙酰转移酶活性；用克隆形成率分析细胞对^60Coγ射线的敏感性；采用7-H2AX原位免疫荧光集簇点法，检测DNA双链断裂损伤修复；用免疫共沉淀检测蛋白质的相互作用。结果siRNA沉默Tip60表达明显提高了U20S细胞对1、2Gy中、低剂量1射线的敏感性（t=3．364、3．979，P〈0．05），但对4Gy大剂量照射的细胞存活率无明显影响。γ-H2AX集簇点检测结果表明，照射后1、4和8h，Tip60失活导致细胞DNA双链断裂修复能力降低（t=3．875、3．183和3．175，P〈0．05）。细胞在受到电离辐射损伤后，Tip60与DNA修复蛋白DNA-PKcs发生相互作用，漆树酸能抑制DNA-PKcs的T2609位点的磷酸化。结论Tip60通过与DNA—PKcs相互作用，调控细胞DNA双链断裂修复机制，对细胞辐射敏感性产生影响。
- 樊嵘张士猛刘晓丹王豫徐勤枝周平坤
- 关键词：DNA双链断裂DNA修复
- 放射损伤细胞中高尔基体弥散现象及香兰素衍生物的防护作用被引量：1
- 2016年
- 目的通过观察辐射对高尔基体形态的影响,确定香兰素衍生物VND3207对受照细胞高尔基体的防护作用。方法采用免疫荧光技术检测放射损伤细胞中高尔基体弥散现象并统计弥散面积,检测细胞周期变化,分析细胞存活率,同时对高尔基体蛋白的表达水平进行检测。结果免疫荧光检测结果显示,照射后高尔基体的弥散面积增加,具有一定的剂量效应和时间效应;VND3207能减轻γ射线对高尔基体的损伤,其表现为与未加药组相比,在抑制不同剂量照射后可使高尔基体弥散面积增加;细胞周期测定结果显示,4 Gyγ线照射后G2/M期阻滞峰值约出现在12 h后;免疫印迹结果显示DNA损伤引起的G2/M期阻滞也在12 h后解除;而高尔基体弥散在细胞周期阻滞解除后12和24 h仍然存在;平板克隆结果显示,VND3207促进了受照细胞的存活。结论放射损伤能引起剂量依赖性高尔基体弥散效应,且这种弥散与DNA损伤诱导的周期阻滞无关,VND3207对放射损伤引起的高尔基体弥散有一定的抑制作用,可能与受照细胞受到保护有关。
- 闫述东关华王豫刘晓丹周平坤
- 关键词：辐射防护Γ射线DNA损伤
- 人SIK2重组质粒的构建和真核细胞转染
- 2013年
- 目的构建人SIK2基因真核表达载体。方法利用PCR扩增目的基因SIK2,PCR产物经纯化后与pC-MV-Tag-2B线性质粒进行连接,连接产物转化大肠杆菌DH5α,涂卡那抗性琼脂糖平板;菌落PCR、酶切及测序鉴定阳性克隆后,抽提质粒,利用Lipofectamnie 2000TM试剂瞬转293T细胞,24 h后,Western Blot方法检测其在真核细胞内的表达。结果成功构建pCMV-Tag-2B-SIK2重组质粒,并在真核细胞内成功表达。结论 SIK2外源表达载体的构建成功,为进一步研究其功能奠定了实验基础。
- 谭伟王豫刘晓丹黄波顾永清周平坤让蔚清
- 关键词：重组质粒蛋白表达
