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Luman-N端融合蛋白单克隆抗体的制备: 2013年; 【目的】制备小鼠抗Luman-N端融合蛋白单克隆抗体。【方法】将GST-Luman-N端载体转化大肠杆菌BL21,用IPTG进行诱导表达,并进行SDS-PAGE电泳,用电洗脱的方法纯化融合蛋白;以纯化的融合蛋白为抗原免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,利用间接ELISA方法筛选阳性孔,采用有限稀释法进行亚克隆,筛选具有抗体分泌活性的单克隆细胞株;应用Western Blot、间接ELISA等方法进行克隆株稳定性、抗体特性的鉴定。【结果】获得1株能稳定分泌抗Luman-N端融合蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2C8),其腹水ELISA单抗效价为1∶1×107。亚型鉴定和亲和力常数分析表明,2C8产生的单克隆抗体亚型为IgG2b型,其亲和力常数约为1×107。Western Blot分析证明,该株单抗能与原核表达的Luman-N端融合蛋白特异性结合,与GST-LRF-N端融合蛋白没有特异性结合。染色体分析结果表明,2C8细胞株染色体数目为(53±2)对。【结论】获得了抗Luman-N端融合蛋白的抗体,该抗体具有良好的特异性和结合活性,可用于对Luman-N端蛋白的进一步研究。; 兰向莉李晓马延森靳亚平; 关键词：间接ELISA 单克隆抗体

Luman在小鼠早期妊娠子宫中的表达与调节: Luman(CREB3,LZIP)属于碱性亮氨酸拉链家族蛋白质成员之一,是未折叠蛋白反应的重要调节物,是新近发现的一个与内质网应激相关的转录因子.内质网应激在哺乳动物卵泡发生、胚胎发育和胎盘形成等过程中发挥重要作用,然而...; 兰向莉陈风雷杨磊杨延周王爱华林鹏飞靳亚平李晓崔趁趁李倩宋玉洁; 关键词：胚胎着床蜕膜化小鼠; 文献传递

LRF在围植入期小鼠子宫中的表达:参与调节胚胎植入及蜕膜化: Luman募集因子(Luman Recruiting Factor,LRF)是近年来发现的一个新的与内质网应激相关的转录因子。但是,有关LRF在雌性小鼠生殖过程中的的生物学功能不清楚。因此,本研究应用实时荧光定量PCR和...; 杨延周王爱华林鹏飞靳亚平宋玉洁崔趁趁胡林勇李晓陈风雷李倩兰向莉杨磊; 关键词：胚胎植入子宫蜕膜化; 文献传递

LRF在围植入期小鼠子宫中的表达:参与调节胚胎植入及蜕膜化: Luman募集因子(Luman Recruiting Factor,LRF)是近年来发现的一个新的与内质网应激相关的转录因子。但是,有关LRF在雌性小鼠生殖过程中的的生物学功能不清楚。因此,本研究应用实时荧光定量PCR和...; 杨延周李倩兰向莉杨磊王爱华林鹏飞靳亚平宋玉洁崔趁趁胡林勇李晓陈风雷; 关键词：胚胎植入子宫蜕膜化; 文献传递

小鼠Zhangfei过表达和shRNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定: Zhangfei (CREBZF)属于CREB/ATF超蛋白家族成员之一,是一种碱性亮氨酸拉链转录调节因子,参与单纯胞疹病毒的潜伏、细胞凋亡以及内质网应激和未折叠蛋白反应.本研究通过构建小鼠Zhangfei基因过表达和s...; 陈风雷王爱华林鹏飞李晓孙晋靳亚平; 关键词：SHRNA 基因过表达慢病毒载体

Luman在小鼠早期妊娠子宫中的表达与调节: Luman(CREB3,LZIP)属于碱性亮氨酸拉链家族蛋白质成员之一,是未折叠蛋白反应的重要调节物,是新近发现的一个与内质网应激相关的转录因子。内质网应激在哺乳动物卵泡发生、胚胎发育和胎盘形成等过程中发挥重要作用,然而...; 兰向莉杨延周王爱华林鹏飞靳亚平李晓崔趁趁李倩宋玉洁陈风雷杨磊; 关键词：胚胎着床蜕膜化小鼠; 文献传递

抗果蝇组蛋白乙酰转移酶Atac2单克隆抗体的制备: 2013年; 【目的】制备抗果蝇组蛋白乙酰转移酶Atac2的单克隆抗体,为进一步研究Atac2基因的功能提供重要的试验工具。【方法】PCR扩增果蝇Atac2蛋白N端前26个氨基酸的编码基因,构建GST-Atac2融合蛋白表达载体pGEX-Atac2。转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),进行诱导表达,通过GST亲和层析法纯化GST-Atac2融合蛋白。以GST-Atac2为抗原免疫8周龄的Balb/c小鼠,取脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA法检测阳性孔,经有限稀释法亚克隆,筛选单克隆杂交瘤细胞株,检测抗体的特异性、效价和亚型,并检测其亲和常数。【结果】PCR扩增获得了目的片段。成功构建了GST-Atac2融合蛋白表达载体,于37℃下220r/min振摇5h,当IPTG终浓度为0.1mmol/L时,GST-Atac2在E.coli BL21(DE3)中高效表达,GST-Atac2融合蛋白大小约为30ku,与预期结果一致。获得1株稳定分泌抗Atac2抗体的杂交瘤细胞株,命名为1C7。单抗1C7能够特异地识别GST-Atac2蛋白,效价为1∶2×105;亚型鉴定表明其重链为IgG1,所得单克隆抗体的亲和常数为2×105。【结论】获得了1株特异性好、能够稳定分泌抗果蝇Atac2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株。; 马延森李晓陈志兰向丽武小椿靳亚平刘伟; 关键词：果蝇原核表达单克隆抗体

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李晓