徐颖华
- 作品数：27 被引量：84H指数：7
- 供职机构：军事医学科学院更多>>
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- 抗百日咳毒素单克隆抗体的纯化及应用研究被引量：14
- 2005年
- 目的纯化抗百日咳毒素(PT)的单克隆抗体(M cAb),并建立特异、准确的PT定量检测方法。方法采用辛酸-硫酸铵沉淀法和A蛋白亲和层析法纯化杂交瘤细胞腹水,并经阻断抑制试验筛选识别不同表位的M cAb,用于建立定量检测PT的ELISA方法。结果经SDS-PAGE分析,纯化M cAb的纯度均在90%以上,选择二株识别不同抗原位点M cAbs,应用于检测PT的双抗夹心ELISA方法,灵敏度为2.14μg/L,批内变异系数5.85%,批间变异系数9.27%,平均回收率为108.12%,应用该法测定了国内几大生产厂家送检的无细胞百日咳疫苗原液中PT含量。结论获得了纯度高的抗PT M cAb,建立了一种特异、准确的定量检测PT的ELISA方法,并用于无细胞百日咳疫苗原液中PT含量的检测,为无细胞百日咳疫苗的质量控制提供了有力的手段。
- 徐颖华张庶民侯启明雷殿良
- 关键词：单克隆抗体纯化SDS-PAGE分析无细胞百日咳疫苗抗原位点
- 抗百日咳毒素单克隆抗体的制备及其特性鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的制备抗百日咳毒素(PT)的单克隆抗体(mAb)。方法按常规细胞融合技术制备抗PT的mAb,并对其特异性、相对亲和力及中和活性等进行了鉴定。结果获得7株分泌抗PT的mAb的杂交瘤细胞。7株mAb的Ig亚类(型)均为IgG1(κ),并能特异性识别PT,与百日咳丝状血凝素及C型肠毒素无交叉反应。其中2株mAb1D4和3E4有中和抑制PT聚集CHO细胞的活性。Western blot的结果表明,2D7、5F9、5F8、1D4和2C25株mAb,均能识别PT抗原的S1亚单位蛋白,mAb1B8可识别S2亚单位蛋白,mAb3E4可识别S3亚单位蛋白。结论成功地制备抗PT的mAb,经鉴定具有良好的特异性,为研制定量检测PT的ELISA试剂盒提供了制剂。
- 徐颖华孟淑芳张庶民侯启明雷殿良
- 关键词：百日咳毒素MABELISA
- 我国新近分离百日咳鲍特菌的抗原基因分析
- 目的 了解我国新近分离百日咳鲍特菌4种抗原基因百日咳毒素S1、外膜蛋白(Prn)、凝集素2(Fi m2)和凝集素3(Fi m3)的基因特征。方法 收集4株新近分离百日咳鲍特菌，进行S1、Pm、Fim2、Fi m3主要抗原...
- 赵建宏张柳李继红王鑫时东彦宋文杰魏红莲徐颖华张庶民
- 百日咳杆菌荧光定量PCR检测方法的建立和应用被引量：2
- 2008年
- 目的建立快速、准确、特异的定量检测百日咳杆菌的方法，并进行临床应用研究。方法根据百日咳杆菌IS481基因序列，设计并合成引物和荧光探针，建立百日咳杆菌荧光定量PCR检测方法，并对方法的特异度、重复性和灵敏度进行评价，检测百日咳疑似患者咽拭子225份和健康者咽拭子30份。结果该方法的标准曲线显示模板浓度在10^2-10^8拷贝／μl线性范围与其循环阈值（Ct）具有较好的线性关系，相关系数（r）为0．998，最小检出量为10^2拷贝。特异度较好，灵敏度较高，重复性实验结果显示在同一时间检测高低浓度阳性克隆质粒（2×10^7与3×10^3拷贝／μ1）10次，连续检测5次，变异系数（CV）为5．78％-16．7％。在不同时间检测高低浓度阳性克隆质粒（2×10^7与3×10^3拷贝／μl），连续7次，CV为8．25％～14．9％。经检测，疑似患者的咽拭子有41份样本为阳性，30份健康人咽拭子均为阴性。结论由于本实验建立的荧光定量PCR方法快速、灵敏度高、特异度好，适合临床实验室进行临床标本的百日咳杆菌的定量检测，有较大的应用前景。
- 徐颖华徐运强张庶民王丽婵侯启明雷殿良
- 关键词：百日咳百日咳聚合酶链反应
- 四株临床分离百日咳鲍特菌主要抗原基因序列分析被引量：3
- 2010年
- 目的 了解石家庄地区分离的百日咳鲍特菌4种抗原基因百日咳毒素S1亚单位（ptxS1）、外膜蛋白（Prn）、凝集素2（Fim2）和凝集素3（Fim3）的基因特征.方法 收集4株临床分离的百日咳鲍特菌,这4株菌于2002年分离自河北石家庄地区.分别对这4株菌的ptxS1、Prn、Fim2、Fim3主要抗原基因进行PCR扩增和测序,并与我国的百日咳鲍特菌疫苗生产株抗原基因序列以及GenBank中收录的百日咳基因序列进行比较、分析.结果 序列分析显示,新近分离的4株菌的S1基因亚型与我国疫苗生产菌株不同,均为A亚型,发现3种Prn基因亚型和3种Fim3基因亚型,核苷酸和氨基酸序列与我国疫苗生产菌株同源性均在99%以上.基因进化树显示与其他菌株的同源性也较高.结论 我国的临床分离菌株与疫苗生产菌株的主要抗原基因序列存在一定变异,为百日咳的流行病学研究和疫苗的研制积累理论依据.
- 赵建宏张柳孙素菊徐颖华李继红时东彦刘晓雷宋文杰王鑫魏红莲张庶民
- 关键词：百日咳细菌外膜蛋白质类毒力因子
- 百日咳PT、FHA和Prn血清抗体检测方法的建立及验证
- 目的建立定量检测抗PT、FHA和Prn抗体的ELISA方法。方法分别应用纯化的百日咳毒素(PT)、丝状血凝素(FHA)和百日咳粘附素(Prn)作为包被抗原,百日咳血清抗体国际参考品为标准品,建立定量检测抗PT、FHA和P...
- 徐颖华骆鹏王丽婵卫辰侯启明张庶民
- 关键词：百日咳酶联免疫吸附实验无细胞百日咳疫苗
- 百日咳实验室诊断的研究进展被引量：10
- 2005年
- 百日咳是一种严重的急性呼吸道传染病,每年全世界百日咳感染人数达3500万之多,并且感染者当中症状表现不典型和成人化的人数逐渐增多,因此建立准确、快速的实验室诊断方法显得尤为重要。本文就目前国内外百日咳实验室诊断的研究进展做一综述。
- 徐颖华张庶民
- 关键词：急性呼吸道传染病症状表现
- 中国百日咳鲍特菌血清型及其相关基因分析被引量：4
- 2010年
- 目的了解我国1955-2005年临床分离百日咳鲍特菌及疫苗株的血清型及其相关基因特征。方法应用抗菌毛蛋白2（fim2）和3（fim3）单克隆抗体凝集反应分析我国不同时期分离的80株百日咳鲍特菌株和3株疫苗株的血清型，并与相应的多克隆抗体方法进行比较分析；同时应用PCR方法扩增这些菌株fim2和fim3基因，并对这些PCR产物进行DNA测序分析。结果研究表明，与多克隆抗体分析结果相比较，单克隆抗体玻片凝集方法和微量凝集反应除一株临床分离株的血清型分析结果不同，其余菌株的结果均一致。研究菌株的血清型分析结果显示17株临床分离菌株和CS与P3S10疫苗株的血清型为fim2＆3型、48株菌为fim2型、15株分离菌株与18530疫苗株为fim3型。在我国扩大免疫规划前分离菌株的血清型以fim2型和fim2＆3型为主，随着大范围的百日咳疫苗接种，l临床分离菌株中fim3型血清型细菌所占的比例逐渐增多。分析菌株中fim2和fim3的基因型以fim2-1（92．5％）和fim3-A（95．0％）亚型为主；18530疫苗株基因型为fim2-2和fim3-A，而其他两株疫苗株的基因型均为fim2—1和fim3-A。在2000年以后，分离出现含有fim3-B和fim3-D亚型菌株，这些结果表明随着我国大范围百日咳疫苗免疫接种，百日咳分离菌株表达的血清型及其基因序列也出现适应性变异。结论本研究证实了抗fim2和fim3单克隆抗体在百日咳血清型分析的特异性和实用性。对我国不同时期分离菌株和疫苗株的血清型分析，为我国百日咳疫苗株的检定、流行病学和细菌进化的研究奠定了基础。
- 徐颖华张柳王丽婵骆鹏卫辰侯启明张庶民
- 关键词：百日咳鲍特菌血清型单克隆抗体基因型
- 百日咳鲍特氏菌分子鉴定、基因组多态性与微进化的研究
- 百日咳是由百日咳鲍特氏菌引起的一种急性呼吸道传染病,传染性较强,人群普遍易感,其中尤以婴幼儿多见。尽管现在世界上绝大多数国家实施百日咳疫苗的免疫接种多年,但百日咳仍是目前疫苗可预防之疾病中死亡病例的主要原因之一。即便是在...
- 徐颖华
- 关键词：实时PCRMLVAMLST
- 文献传递
- 百日咳杆菌腺苷酸环化酶毒素的研究进展
- 2008年
- 鲍特百日咳杆菌分泌腺苷酸环化酶毒素,该毒素能够将其催化基团转运到真核细胞中,并由真核细胞的钙调蛋白激活,产生大量的cAMP。因此,腺苷酸环化酶毒素既可作为表位运输的工具,又有助于研究细菌毒素蛋白进入真核细胞的机制。本文就百日咳杆菌腺苷酸环化酶毒素的研究进展作一综述。
- 吴丽洁徐颖华张庶民
- 关键词：百日咳杆菌腺苷酸环化酶毒素钙调蛋白真核细胞
