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重组人肿瘤抑素分泌型真核表达载体的构建及其表达被引量：1: 2009年; 目的构建重组人肿瘤抑素分泌型真核表达载体并检测其在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达。方法以人胚肾293细胞为材料,提取总RNA,用RT-PCR方法合成人tumstatinc DNA,将该cDNA克隆到pGEM-T载体获得重组质粒pGEM-T/tumstatin。以pGEM-T/tumstatin为模板扩增含Ⅳ型胶原信号肽sig基因的sig-tumstatin基因片段,sig-tumstatin片段经酶切后,插入经同样酶切的pIRESneo3质粒,利用克隆PCR、限制性内切酶消化以及序列测定对获得的sig-tum-statin基因片段及重组载体进行验证。将重组sig-tumstatin真核表达载体转染到CHO-K1对其表达状况进行检测。结果所获得的sig-tumstatin片段(822bp)序列与报道的序列完全一致。酶切鉴定的结果表明含重组人肿瘤抑素的pIRESneo3/sig-tumstatin表达载体构建成功。转染重组pIRESneo3/sig-tumstatin的CHO-K1分泌表达了重组人tum-statin。另外,从生长曲线结果来看,转染了pIRESneo3/sig-tumstatin真核表达载体和空载体的CHO-K1比未转染的CHO-K1细胞的生长速度要慢一些。结论成功地构建了重组人tumstatin分泌型真核表达载体并获得能稳定表达tumstatin的CHO-K1,为开展下一步的实验奠定了基础。; 赵亮罗以勤孔建新聂江玲姚丽娟董行濮跃晨马筱玲; 关键词：真核细胞

Tumstatin-EGFP在CHO细胞中的表达和活性分析: 2008年; 目的分析融合蛋白tumstatin-EGFP在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的表达及生物学活性。方法经过酶切和测序正确的真核表达载体PIRESneo3/STL-EGFP、PIRES-neo3/sig-EGFP和空载体稳定转染CHO细胞后,用Western blot从细胞上清液中检测融合蛋白的表达、倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。通过生长曲线分析外源基因的导入对CHO细胞生长的影响,MTT法和管状形成抑制试验评估tumstatin-EGFP融合蛋白的tumstatin样活性,体外靶向试验验证tumstatin能否携带融合蛋白特异性结合内皮细胞。结果获得了稳定转染的CHO细胞系。生长曲线表明转染后的较未转染的CHO细胞生长缓慢,MTT试验和管状形成抑制试验分别证实了融合蛋白tumstatin-EGFP具有抑制内皮细胞增殖,明显抑制血管管状结构的形成的作用;体外靶向试验也验证了tumstatin-EGFP能够特异性结合内皮细胞。结论重组真核表达载体在CHO细胞获得稳定表达,融合蛋白tumstatin-EGFP的表达不影响tumstatin和EGFP各自的生物学活性,并且在体外tumstatin能特异性携带EGFP靶向内皮细胞,为进一步tumstatin及其融合蛋白的研究奠定基础。; 姚丽娟罗以勤孔建新赵亮濮跃晨马筱玲; 关键词：绿色荧光蛋白质类

用于检测胃蛋白酶原、胃泌素-17的血浆样本保存条件探讨被引量：4: 2015年; 目的探讨用于检测胃蛋白酶原(PG)、胃泌素-17(G-17)的血浆样本的保存条件。方法血浆样本180例份,采用ELISA双抗体夹心法定量检测血浆PG-Ⅰ、PG-Ⅱ、G-17,作为第1天结果(对照)。将剩余血浆样本随机分为1、2组,每组90份;每组又分为血浆未分离组(离心后未分离血浆)、血浆分离组(离心后取血浆)和稳定剂组(离心后取血浆,并加入稳定剂),每组各30份。将各组每个样本平均分装6管后分别置于室温、4℃和-20℃环境下保存,每天固定时间取1组样本检测PG-Ⅰ、PG-Ⅱ,取2组样本检测G-17,均连续检测7 d(包括第1天)。将室温、4℃、-20℃温度下保存不同时间点时血浆PG-Ⅰ、PG-Ⅱ、G-17浓度与其保存第1天时浓度比较,将P>0.05的天数作为稳定性维续时间。结果血浆未分离组室温下PG-Ⅰ稳定性维持2 d,PG-Ⅱ为6 d,G-17为1 d;4℃时分别为5、7、3 d;-20℃时分别为4、3、2 d。血浆分离组室温下PG-Ⅰ稳定性维持7 d,PG-Ⅱ为6 d,G-17为2 d;4℃时分别为5、7、5 d;-20℃时分别为5、7、6 d。稳定剂组室温下PG-Ⅰ稳定性维持7 d,PG-Ⅱ为7 d,G-17为7 d;4℃时分别为5、6、4 d;-20℃时分别为7、5、4 d。结论在临床标本7 d保存期内,PG和G-17检测样本推荐使用血浆分离后低温保存,如使用稳定剂,推荐血浆分离后室温保存。; 姚丽娟罗以勤孙安源卜国平王力; 关键词：血浆胃蛋白酶原胃泌素-17 室温稳定剂

荧光定量RT-PCR检测肺癌tumstatin表达方法的建立与应用: 目的利用Taqman技术,建立荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)技术,对肺癌患者肺癌组织中tumstatin mRNA表达进行定量检测及初步临床应用评价。方法在tumstatin基因设计一对引物和一条Taq...; 周明罗以勤姚丽娟赵亮; 文献传递

钙离子通道蛋白CatSper在吸烟小鼠模型中的表达被引量：2: 2014年; 目的:建立吸烟小鼠模型,检测小鼠精子特异性钙离子通道蛋白CatSper在RNA和蛋白水平表达的变化,分析与精子活力之间的关系,为吸烟导致雄性生殖损害的分子机制研究提供可靠的实验数据。方法:建立吸烟小鼠模型,运用非连续密度梯度离心分离精子并进行活力检测,RT-PCR检测小鼠精子mRNA表达的变化,免疫组织细胞化学技术观察小鼠CatSper蛋白的表达,免疫印迹进一步对CatSper蛋白表达的变化趋势进行统计学分析。结果:正常对照组,轻、中和重度吸烟组(a+b)级精子百分率[(87.6±16.2)%vs(72.9±13.0)%vs(68.1±16.0)%vs(44.6±15.0)%,P<0.05]、CatSper mRNA相对表达量(0.915±0.202 vs 0.712±0.121 vs 0.522±0.126 vs 0.258±0.177,P<0.05)、免疫印迹相对表达量(0.882±0.208 vs0.693±0.202 vs 0.471±0.251 vs 0.263±0.198,P<0.05)均依次降低,免疫组化结果显示吸烟使CatSper蛋白在睾丸组织中表达降低;相关性分析结果表明(a+b)级精子百分率与CatSper mRNA和蛋白呈正相关。结论:吸烟明显抑制小鼠钙离子通道蛋白CatSper的表达,精子活力与CatSper的表达呈正相关,提示CatSper表达降低可能是吸烟导致雄性精子活力损伤的分子机制之一。; 姚丽娟郑圣霞吴双正孙晓科周桂香周明; 关键词：吸烟精子活力

血清胃蛋白酶原与胃泌素检测在萎缩性胃炎诊断中的应用被引量：12: 2014年; 目的建立本实验室萎缩性胃炎胃蛋白酶原(PG)和胃泌素-17(G-17)的最佳诊断临界值,探讨与非萎缩性胃炎的关系以及胃幽门螺旋杆菌(HP)感染的影响。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测38例萎缩性胃炎,40例非萎缩性胃炎和35例正常对照者PG和G-17浓度和HP-IgG抗体定性检测,用受试者工作特征曲线(ROC)确立本实验室各指标筛查萎缩性胃炎的最佳诊断临界值。结果与正常对照组相比,萎缩性胃炎组血清PG-Ⅰ、PGR和G-17水平显著降低(P<0.01),非萎缩性胃炎组只有血清PG-Ⅰ水平显著降低(P<0.01);根据ROC曲线和约登指数得出PG-Ⅰ、PGR和G-17诊断萎缩性胃炎最佳诊断界值分别为:74μg/L(敏感度0.632,特异度0.857)、6.2(敏感度0.658,特异度0.943)和5.1 pmol/L(敏感度0.816,特异度0.676);当PG-Ⅱ<9.6μg/L,PG-Ⅰ<74μg/L的敏感性提高至0.803,而特异度降至0.826;正常对照组HP感染阳性者血清PG-Ⅰ和G-17水平明显高于阴性者,PGR明显低于阴性者(P<0.01),萎缩性和非萎缩性胃炎组HP感染阳性者胃黏膜各指标与阴性者无显著性差异(P>0.05)。结论提供本地区临床进行人群筛查和辅助诊断诊断萎缩性胃炎的血清PG-Ⅰ、PGR和G-17检测界值,初步进行了与非萎缩性胃炎各指标的比较,HP感染对正常对照组胃黏膜血清指标有一定的影响。; 姚丽娟罗以勤吴双正郑圣霞卜国平孙安源; 关键词：萎缩性胃炎胃蛋白酶原胃泌素

3.17血清内皮抑素、碱性成纤维细胞生长因子、抗环瓜氨酸肽抗体的联合检测与类风湿关节炎的早期诊断: 赵亮罗以勤孔建新马筱玲濮跃晨张宏姚丽娟董行

类风湿关节炎患者血清内皮抑素、碱性成纤维细胞生长因子、抗环瓜氨酸肽抗体的联合检测与应用被引量：7: 2010年; 目的检测类风湿关节炎(RA)患者血清中内皮抑素(endostatin)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和抗环瓜氨酸肽(anti-CCP)抗体水平,并探讨其在RA中的临床意义。方法选取RA患者30例,健康对照30例。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者血清中endostatin、bFGF和anti-CCP抗体水平。结果①RA患者血清中endostatin的水平(62.57±24.96)ng/ml,明显高于健康对照组(43.59±8.58)ng/ml(P<0.001),bFGF的水平(24.46±11.50)pg/ml明显高于健康对照组(16.07±4.12)pg/ml(P<0.002),RA患者血清中anti-CCP(17.44±4.35)RU/ml也明显高于健康对照组(2.32±0.97)RU/ml(P<0.001)。②相关性分析显示en-dostatin水平与bFGF呈高度正相关(r=0.934,P<0.01),endostatin水平与anti-CCP抗体呈高度正相关(r=0.836,P<0.01),bFGF与anti-CCP抗体(r=0.789,P<0.01)具有中度相关性。结论endostatin、bFGF及anti-CCP抗体对RA具有较好的敏感性和高度的特异性,联合检测endostatin、bF-GF、anti-CCP抗体可作为RA患者及RF阴性RA患者的诊断指标。; 赵亮罗以勤孔建新聂江玲马筱玲濮跃晨姚丽娟董行; 关键词：内皮抑素类成纤维细胞生长因子2

重组人肿瘤坏死因子α分泌型真核表达载体的构建及表达: 2009年; 目的构建人肿瘤坏死因子rhTNF-α分泌型真核表达载体,并检测其在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达。方法以pGEM-T/sig-tumstatin为模板,扩增与TNF带重叠区的型胶原信号肽sig基因片段,以PBV220-TNF为模板,扩增与sig带重叠区的TNF基因片段,以上述2个扩增产物片段为模板,重叠区扩增拼接法(SOEing)扩增得到sig-TNF。sig-TNF片段经酶切后,插入经同样酶切的pIRE Sneo3质粒,利用克隆PCR、限制性内切酶消化以及序列测定,对获得的sig-TNF基因片段及重组载体进行验证。将重组sig-TNF真核表达载体转染到CHO-K1,并对其表达状况进行检测。结果所获得的sig-TNF片段(558bp)序列与报道的序列完全一致,酶切鉴定结果表明含人肿瘤坏死因子的重组pIRE Sneo3/sig-TNF表达载体构建成功,转染重组pIRE Sneo3/sig-TNF的CHO-K1分泌表达了人肿瘤坏死因子rhTNF-α。转染了pIRE S-neo3/sig-TNF真核表达载体和空载体的CHO-K1和未转染CHO-K1细胞的生长速度没有差别。结论成功构建了重组人肿瘤坏死因子rhTNF-α分泌型真核表达载体,并获得能稳定表达rhTNF-α的CHO-K1,为开展下一步的实验奠定了基础。; 赵亮罗以勤姚丽娟孔建新濮跃晨孙安源张林杰; 关键词：肿瘤坏死因子Α 真核细胞中国仓鼠卵巢细胞

Tumstatin转基因巨核细胞在NOD/SCID鼠体内产生抗新生血管作用血小板被引量：1: 2016年; 目的了解tumstatin转基因巨核细胞在非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)鼠体内生成血小板情况及其抗新生血管作用。方法制备的tumstatin转基因巨核细胞注入NOD/SCID鼠体内,定期取血,通过流式细胞仪分析转基因血小板产生情况;激光共聚焦法检测血小板的tumstatin表达;内皮细胞管状结构形成试验检测血小板的抗血管生成作用;血小板聚集试验检测转基因血小板的聚集功能。结果 tumstatin转基因巨核细胞输注NOD/SCID鼠后的第3天,外周血可检测到人血小板;血小板表达tumstatin;这种转基因血小板可显著抑制内皮细胞管状结构形成并保持正常的聚集功能。结论 tumstatin转基因巨核细胞可在NOD/SCID鼠体内产生有抑制血管形成且保持正常聚集功能的血小板,为进一步抗肿瘤研究奠定基础。; 任荟蓉罗以勤李娟周明赵亮姚丽娟; 关键词：TUMSTATIN 巨核细胞血小板

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姚丽娟

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