唐吉思
- 作品数：4 被引量：26H指数：3
- 供职机构：内蒙古民族大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区高等学校科学研究项目中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 奶牛乳腺炎无乳链球菌pgk基因的克隆与序列分析被引量：9
- 2011年
- 目的获得牛乳腺炎无乳链球菌分离菌株pgk基因序列,分析其基因与氨基酸的同源性。方法参考Gen-Bank上公布的牛源无乳链球菌pgk基因序列设计合成1对引物,通过PCR扩增获得其序列并进行克隆与测序分析。结果所扩增的pgk基因序列的大小为1 197 bp,负责编码399个氨基酸残基。对比扩增的分离菌株pgk基因序列与GenBank上公布的B群无乳链球菌pgk基因(AE009948)相似性达到99.83%,编码的氨基酸序列相似性达到99.74%。结论该基因序列具有高度的保守性,为进一步对分离菌株的pgk基因进行高效表达及其产物的抗原性研究奠定了基础。
- 张海宝布日额王学理吴金花孙立杰唐吉思锡林高娃刘燕
- 关键词：无乳链球菌克隆
- 牛乳腺炎无乳链球菌Pgk基因抗原优势区原核表达产物的抗原性分析被引量：1
- 2011年
- 为了探索牛乳腺炎无乳链球菌磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase,Pgk)基因编码蛋白的抗原性,根据GenBank公布的牛源无乳链球菌Pgk基因序列,设计并合成一对引物,通过PCR扩增出Pgk蛋白抗原优势区的编码序列,并对其进行克隆、测序、转化、诱导表达及抗原性鉴定。结果显示克隆的Pgk基因序列含有984 bp,编码328个氨基酸残基。临床分离株与GenBank上公布的B群无乳链球菌菌株Pgk基因(AE009948)核苷酸序列同源性为99.09%,氨基酸序列同源性为99.69%。将扩增的Pgk基因片段克隆至原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达载体Pgk-pET30a(+),再将筛选的阳性重组质粒转化至BL21工程菌,经IPTG诱导获得部分可溶性表达Pgk重组蛋白。经Ni2+亲和层析柱纯化得到纯度在90%以上的蛋白,经Western blot分析结果表明,重组蛋白具有良好的抗原性,为进一步探索其对奶牛的免疫原性研究奠定了良好的实验基础。
- 张海宝布日额吴金花王学理孙立杰唐吉思锡林高娃刘燕张忠祥
- 关键词：无乳链球菌原核表达抗原性
- 牛乳腺炎金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的克隆及序列分析被引量：4
- 2011年
- 根据GenBank上公布的金黄色葡萄球菌肠毒素A(staphylococcus enterotoxin A,SEA)基因的全序列,设计一对特异性引物扩增内蒙古分离株的SEA基因序列。经基因克隆和序列测定,表明扩增的基因片段长度为582 bp,与标准菌株ATCC13565的SEA基因片段序列相似性为100%,与GenBank上公布的金黄色葡萄球菌菌株(EF520720.1)SEA基因相似性达到99.14%。本研究结果为进一步研究建立牛乳中SEA分子检测技术奠定了实验基础。
- 唐吉思吴金花布日额张海宝薛晓阳刘洋张忠祥
- 关键词：金黄色葡萄球菌克隆
- 荧光定量PCR检测牛乳中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因方法的建立被引量：13
- 2012年
- 为建立检测牛乳中金黄色葡萄球菌(S.aureus)肠毒素A基因(SEA)定性定量的检测方法,本研究针对S.aureus SEA基因片段设计1对引物,将构建的重组质粒作为阳性对照,建立了S.aureus SEA DNA的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法。结果显示,特异性产物Tm值为78.2℃～78.5℃,最低可检测到49.5 fg/μL(16.5拷贝)的阳性质粒。标准曲线的相关系数为0.99。与其他常见的产SEB的S.aureus、产SEC的S.aureus、无乳链球菌、大肠杆菌、嗜热链球菌、伤寒沙门氏菌、大肠杆菌DH5α及JM109均无交叉反应。该检测方法具有较好的特异性和敏感性,为牛乳中S.aureus的快速检测提供了新的技术手段。
- 唐吉思布日额吴金花孙立杰薛晓阳刘洋丁铲
- 关键词：牛乳金黄色葡萄球菌肠毒素A荧光定量PCR
