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中国人MBL基因编码区的克隆与原核表达被引量：1: 2005年; 目的克隆中国人MBL基因编码区序列,并在原核细胞中表达。方法提取肝总RNA,RT-PCR扩增MBL编码区序列,并克隆到pGEM-T-easy载体上,再亚克隆到pET-30(a)上。诱导表达重组MBL,并通过SDS-PAGE检测表达情况,表达蛋白经初步纯化后,用ELISA及点杂交试验检测其免疫原性。结果克隆得到长747bp的MBL编码区序列,与GenBank中的MBL序列同源性在99%以上。重组MBL相对分子质量约为36000,以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白量的20%左右,表达蛋白经初步纯化,纯度可达95%以上。ELISA检测显示重组MBLA490值与阴性对照差异有显著意义(10倍以上),点杂交检测结果为阳性。结论已成功克隆中国人MBL基因的编码区序列,并在大肠杆菌中表达,表达产物与天然MBL具有相似的免疫原性。; 吴志聪张庶民王一飞骆鹏贾天军; 关键词：中国人 MBL基因原核表达甘露糖结合凝集素

pQE-hbFGF表达系统的构建及其蛋白质的表达和纯化: 2005年; 目的　构建pQE hishbFGF表达载体 ,通过一步纯化得到 6×HishbFGF蛋白质。方法　用PCR扩增目的基因hbFGF ,连接到pQE4 0载体上 ,转化到Top10菌株筛选重组子 ,经测序后将质粒转化到表达菌M15上 ,经IPTG诱导表达 ,超声波破菌后通过镍离子螯合层析一步纯化得 6×HishbFGF蛋白质 ,ELISA鉴定产物 ,用MTT法检测产物促细胞增殖的生物活性。结果　hbFGF基因插入pQE载体中 ,在M15中 6×HishbFGF的表达量达到 2 0 % ,且为可溶性表达。经一步纯化后得到N端带 6个组氨酸的hbFGF蛋白 ,纯度为 96 % ,6×HishbFGF具有免疫原性及促进NIH3T3细胞增殖的活性。结论　 6×HishbFGF蛋白质在M15中可溶性地高效表达 ,并经一步亲和层析得到纯度高活性高的产物 ,降低了生产成本。; 刘秋英王一飞熊盛胡红梅钱垂文张美英冉延超袁茵吴志聪; 关键词：人碱性成纤维细胞生长因子可溶性表达

nm23-H1基因对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用被引量：9: 2006年; 目的:研究转染nm23-H1基因对体外培养A549细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机理。方法:构建nm23-H1基因的真核表达载体,转染到体外培养的人肺腺癌细胞A549中,通过G418筛选出稳定表达克隆,RT-PCR及免疫组化检测nm23-H1在细胞内的表达情况。绘制细胞生长曲线检测nm23-H1基因对细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞周期,原子力显微镜观察细胞膜表面伪足的超微结构。结果:转染后的肿瘤细胞能稳定表达nm23-H1基因,抑制了肿瘤细胞的增殖。nm23-H1基因没有诱导细胞凋亡但使G1期细胞增加而S期细胞减少,停滞于G0期。转染nm23-H1基因后细胞边缘的伪足减少。结论:nm23-H1基因能抑制体外培养的A549肿瘤细胞的增殖,可能通过改变细胞表面结构减弱细胞的侵袭能力。; 刘秋英吴志聪胡红梅熊盛张美英袁茵刘美莉王一飞; 关键词：肿瘤侵袭肺肿瘤 A549细胞

nm23-H1基因与人早幼粒白血病细胞HL-60增殖的相关性分析被引量：3: 2004年; 目的 :探讨nm2 3-H1基因的表达与白血病细胞HL - 6 0增殖之间的关系。方法 :以 2 5ng/mL阿糖胞苷处理HL - 6 0细胞 ,MTT法测定细胞生长抑制率 ,NBT还原比色法判断细胞分化状况 ,RT -PCR检测nm2 3-H1基因表达的变化 ;构建nm2 3-H1基因的真核表达质粒pEGFP -N1-nm2 3-H1,转染HL - 6 0细胞 ,通过细胞生长曲线和血清依赖性实验检测nm2 3-H1基因的过表达对HL - 6 0细胞生长的影响。结果 :小剂量Ara -C对HL - 6 0细胞的生长呈时间依赖性抑制 ,作用4d后细胞NBT还原能力增强且nm2 3-H1基因的表达下调 ;转染nm2 3-H1基因的HL - 6 0细胞生长加快、血清依赖性下降。结论 :Ara -C对HL - 6 0细胞增殖的抑制作用与下调nm2 3-H1基因的表达有一定关系 ;nm2 3-H1基因在HL - 6 0细胞中的过表达有促细胞增殖的作用 ,即增高了HL -6; 袁茵王一飞张美英熊盛李久香胡红梅刘秋英吴志聪; 关键词：NM23-H1基因 HL-60细胞细胞增殖

酵母双杂交系统被引量：6: 2003年; 就酵母双杂交系统的基本原理、主要进展和在蛋白质组研究中的应用作一综述。; 吴志聪王一飞; 关键词：酵母双杂交系统蛋白质组

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吴志聪