何金萍
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：辽宁大学生命科学院更多>>
- 发文基金：辽宁省教育厅科技项目辽宁省科学技术基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 天然氮末端重组cC可溶性分泌表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建具有天然氮末端的重组鸡半胱氨酸蛋白酶抑制剂(chicken cystatin,cC)在毕赤酵母中高效分泌表达。方法通过设计独特的引物,利用DNA重组技术将cC的cDNA片段插入分泌型酵母表达载体pPICZαA中,构建相应的重组酵母表达质粒pPICZαA-cC,并在巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株X-33中甲醇诱导表达。结果经十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、底物活性SDS-PAGE和Native-PAGE分析,随着不同剂量的β-巯基乙醇和盐酸胍组合处理重组cC,二硫键被破坏的程度加深,5 mol/L盐酸胍与10%β-巯基乙醇的组合几乎完全打开了分子内的二硫键。结论92.9%的重组cC具有二硫键并与天然cC具有相似的木瓜蛋白酶抑制活性。
- 张慧丽杨松何金萍胡冰洁曲方宋有涛
- 关键词：毕赤酵母二硫键
- 鸡cystatin在巴氏毕赤酵母中的表达及其类淀粉样特性的研究
- 鸡半胱氨酸蛋白酶抑制剂 (chicken cystatin，cc) 是一种能与半胱氨酸蛋白酶可逆结合的竞争性抑制剂，具有两个二硫键，与人的 cystatin c (hcc) 具有高度同源性。研究表明，cystatin c...
- 何金萍
- 关键词：脑淀粉样血管病巴氏毕赤酵母二硫键定点突变
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- 重组鸡半胱氨酸蛋白酶抑制剂类淀粉样沉淀分析被引量：1
- 2011年
- 目的利用具有天然N-末端的重组鸡半胱氨酸蛋白酶抑制剂(chicken cystatin,cC)在毕赤酵母中高效分泌表达,研究淀粉样沉淀倾向。方法通过在巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株X-33中甲醇诱导表达cC能与刚果红特异性结合特性和硫磺素T荧光分析聚积方法研究聚集的特性。结果重组cC形成的类淀粉样蛋白的聚集量有明显增加,30 d时,紫外分光光度检测,重组cC为1.21μmol/L,重组cC荧光强度由1.08增至18.05,即聚集程度增加。结论野生型cystatin C也有形成淀粉样沉淀倾向。
- 高建梅杨松陈冬松贾丽娇何金萍张慧丽
- 关键词：毕赤酵母二硫键
