何俊杰
- 作品数：9 被引量：19H指数：3
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 提高医学微生物学教学效果的几点体会被引量：3
- 2009年
- 在医学微生物学教学中教师通过多媒体课件的认真制作、最新前沿知识的介绍、多种教学方法的综合使用，以及实验课教学等方面的加强和改进，有效提高了学生的学习兴趣和主动性，开拓了思维能力，取得了良好的教学效果。
- 王丽梅姜泓柏银兰康健张薇何俊杰徐志凯
- 关键词：微生物学课堂教学实验教学
- 结核分枝杆菌esat6-rpfD融合基因的原核表达及产物纯化
- 2009年
- 目的:构建结核分枝杆菌融合基因esat6-rpfD的原核表达载体,表达和纯化ESAT6-RpfD融合蛋白。方法:从结核分枝杆菌H37Rv株基因组中经PCR分别扩增esat6和rpfD基因,克隆入pMD19-T载体,测序后克隆入原核表达载体pProExHTB,酶切重组质粒,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达融合蛋白,亲和层析纯化融合蛋白。结果:PCR扩增的esat6、rpfD基因序列与GenBank报道一致;诱导表达后,经SDS-PAGE和Western blot分析,在相对分子质量约30000处有目的条带,融合蛋白以包涵体形式表达。结论:构建了esat6-rpfD融合基因原核表达载体,并在大肠杆菌中表达并纯化得到ESAT6-RpfD融合蛋白。
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- 关键词：结核分枝杆菌原核表达纯化
- 结核分支杆菌ESAT6-MPT64融合蛋白的构建及应用性初步研究被引量：3
- 2009年
- 目的:构建表达结核分支杆菌ESAT6和MPT64融合蛋白,并评价其在血清学诊断中的价值。方法:PCR法扩增esat6和mpt64基因,构建原核表达载体pProEX HTb-EM,表达、纯化ESAT6-MPT64融合蛋白,Western-blot分析其抗原性。用该重组蛋白ELISA法检测结核病患者血清。结果:原核表达的ESAT6-MPT64融合蛋白约40 000,Western-blot证实重组蛋白与ESAT6和MPT64多克隆抗体特异结合。重组蛋白用于检测结核病患者血清,敏感性为67.7%,特异性为82%。结论:重组的ESAT6-MPT64融合蛋白有可能用于结核病免疫诊断试剂的制备。
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- 关键词：结核分支杆菌ESAT-6MPT64
- 结核分枝杆菌Rv2031c基因的表达、纯化和鉴定
- 目的：克隆结核分枝杆菌Rv2031c基因，构建其原核表达载体，并进行表达、纯化及鉴定。采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Rv2031c基因片段。克隆入pMD18-T载体，序列测定正确后亚...
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- 关键词：结核分枝杆菌原核表达蛋白纯化
- 文献传递
- 结核分枝杆菌mpt64基因稳定表达细胞系的建立
- 2009年
- 为建立稳定表达结核分枝杆菌分泌蛋白MTP64的P815细胞系,将mpt64基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-),构建mpt64真核表达载体。重组质粒酶切鉴定正确后,以Lipofectamine2000转染P815细胞,通过G418筛选后,得到阳性克隆,分别以RT-PCR方法检测mRNA表达,间接免疫荧光和Western-blot检测目的蛋白的表达。表达结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64的真核表达载体转染细胞后,RT-PCR可扩增出目的基因片段,转染细胞间接免疫荧光检测阳性,Western-blot检测在约26 kDa处有特异显色条带,证实转染细胞表达目的基因。成功地建立mpt64稳定表达细胞系,为进一步结核疫苗评价奠定一定基础。
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- 关键词：结核分枝杆菌MPT64细胞
- 结核分枝杆菌Rv2626c基因的表达、纯化和鉴定被引量：3
- 2009年
- 克隆结核分枝杆菌Rv2626c基因,构建其原核表达载体,并进行表达、纯化及鉴定。采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Rv2626c基因片段,克隆入pMD18-T载体,序列测定正确后亚克隆入原核表达载体pPro-EXHTb,转化入E.ColiDH5α,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析后与抗His单抗进行Western-blot,以Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白。PCR扩增获得的目的基因为432bp,与预期大小一致,测序与Genebank公布的基因序列完全一致。成功构建原核表达载体pPro-EXHTb-2626c,转化E.ColiDH5α后能特异性表达目的蛋白,大小约16KD,与理论值相一致。蛋白可溶性分析表明该蛋白主要以可溶性方式存在,纯化蛋白经Western-blot鉴定有特异性反应条带。成功构建结核分枝杆菌Rv2626c原核表达载体pPro-EXHTb-2626c,并获得纯化的目的蛋白,为研究新型结核疫苗的靶抗原奠定了基础。
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- 关键词：结核分枝杆菌抗原原核表达纯化
- 结核分枝杆菌MPT64抗原DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答被引量：8
- 2009年
- 目的研究结核分枝杆菌MPT64抗原DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答。方法用表达MPT64的真核表达质粒pcDNA-M免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的特异性抗体滴度和抗体亚类。分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,检测淋巴细胞增殖、IFN-γ和IL-12产生水平、流式细胞仪计CD4+细胞和CD8+细胞数、脾淋巴细胞特异性CTL杀伤效应。结果MPT64基因免疫可诱导小鼠高水平的体液免疫应答,免疫小鼠脾淋巴增殖显著,IFN-γ和IL-12含量增加,CD4+细胞和CD8+细胞百分比明显增加,CTL杀伤效应明显。结论MPT64 DNA疫苗可诱导小鼠有效的体液和细胞免疫应答,有可能作为新型TB疫苗的组分。
- 柏银兰薛莹王丽梅樊爱琳张薇康健何俊杰徐志凯
- 关键词：结核分枝杆菌MPT64DNA免疫应答
- 结核分枝杆菌MPT64重组母牛分枝杆菌免疫学特性被引量：1
- 2009年
- 目的:研究结核分枝杆菌MPT64重组母牛分枝杆菌疫苗免疫学特性。方法:用分泌表达MPT64的重组母牛分枝杆菌疫苗免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的特异性抗体滴度和抗体亚类。分离免疫小鼠脾淋巴细胞,检测淋巴细胞增殖、IFN-γ和IL-12产生水平、CD4+细胞和CD8+细胞数、脾淋巴细胞特异性CTL杀伤效应。毒株攻击后对脾脏细菌负荷计数。结果:MPT64重组母牛分枝杆菌疫苗免疫可诱导小鼠高水平的体液免疫应答,免疫小鼠脾淋巴增殖明显,IFN-γ和IL-12含量增加,CD4+和CD8+细胞百分比明显增加,CTL杀伤效应明显,对MTBH37Rv攻击后有一定的保护作用。结论:MPT64重组母牛分枝杆菌疫苗可诱导小鼠有效的体液和细胞免疫应答,有可能作为新型TB疫苗候选。
- 柏银兰薛莹王丽梅樊爱琳张薇何俊杰康健徐志凯
- 关键词：结核分枝杆菌母牛分枝杆菌疫苗MPT64
- 高校护理专业学员基础课学习状况的调查与研究被引量：1
- 2008年
- 目的了解护理专业学员的基础课学习状况。方法采用文献资料法、问卷调查法、教师访谈法进行调查。结果大多数学员学习目的明确，但学习方法有待改进。教师在教学过程中影响较大。教学课程设置应针对专业特点更趋合理。教学效果考评方式应以闭卷和开卷考试结合的方式进行。结论此调查研究对护理专业的教学有一定的指导意义。
- 柏银兰柴春雨王丽梅尹文康健张薇何俊杰
- 关键词：护理
