徐志凯
- 作品数：436 被引量：1,157H指数：15
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划高等学校骨干教师资助计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 抗汉滩病毒中和性鼠／人嵌合抗体基因转化拟南芥的初步研究
- 2008年
- 目的:建立能表达抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的转基因植株,为汉坦病毒基因工程抗体的研究提供实验基础。方法:将构建的含抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的植物抗体表达质粒3G1MH-pCAMB IA2301,用TSS冻融法导入农杆菌GV3101,利用农杆菌介导的抽真空转基因技术转化野生型拟南芥,获得转基因植株。用PCR、Northernblot检测转基因植株。结果:经PCR分析表明,拟南芥的基因组中有抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因整合,并成功获得7株T0代转基因拟南芥。植株提取RNA,经Northernblot分析可见约1 500 bp及800 bp处的目的条带,为编码重、轻链的目的基因。结论:成功地构建了含抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的拟南芥植株,为进一步利用植物表达治疗性抗体奠定了基础。
- 周伟吴兴安罗雯胡刚张芳琳白文涛张亮于澜史梦远徐志凯
- 关键词：汉滩病毒嵌合抗体转基因植物植物抗体
- 融电子教案与传统教案于一体的新型电子教案的制作设计被引量：2
- 2008年
- 利用Powerpoint2000的“备注”栏功能，将纸质文件教案的注释和内容等写入备注栏；利用计算机设置功能，把win—dows桌面扩展到另一台监视器上。结果是教员使用的电脑显示器可以同时显示幻灯和备注内容，而学员观看的投影大屏幕上只显示幻灯内容，隐去备注内容，由此设计出集传统纸质教案与传统电子教案于一体的新型电子教案，极大的方便了教员上课，提高了教学效果，省时省力，具有推广使用前景。
- 尹文吕欣雷迎峰柏银兰杨敬徐志凯
- 关键词：教案电子教案
- 联合应用抗原递呈分子HSP70C基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒的构建及鉴定
- 2014年
- 目的构建含有抗原加工递呈分子基因HSP70C的HTNV嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒。方法通过PCR扩增获得HSP70C基因,分别克隆入本室已构建的重组腺病毒转移载体pShuttle-pCAG-GnS0.7及pShuttle-pCAGGcS0.7中,进而构建新的重组腺病毒转移载体pShuttle-pCAG-GnS0.7-HSP70C及pShuttle-pCAG-GcS0.7-HSP70C。进一步通过双酶切将转移载体中的目的嵌合基因再分别克隆入腺病毒载体,得到重组腺病毒载体rAd-pCAG-GnS0.7-HSP70C、rAd-pCAG-GcS0.7-HSP70C,使用Pac I线性化后转染HEK293细胞,包装后获得重组腺病毒,感染HEK293细胞后用免疫荧光法检测表达产物。结果经过酶切、PCR扩增和测序结果显示,各重组腺病毒转移载体及重组腺病毒载体构建正确。免疫荧光实验检测到各重组腺病毒中目的蛋白的表达。结论成功制备了含抗原递呈分子HSP70C基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒,为进一步研究构建的汉滩病毒重组腺病毒的免疫学特性奠定了实验基础。
- 张亮程林峰于澜刘梓谕李璞媛徐志凯张芳琳
- 关键词：汉滩病毒腺病毒热休克蛋白70
- PbTIP多克隆抗体对恶性疟原虫生长抑制作用的初步研究
- 2013年
- 首先构建了伯氏疟原虫TIP样蛋白(以下简称PbTIP)的原核表达载体pET32a/PbTIP,在大肠杆菌中成功诱导表达了带His标签的PbTIP融合蛋白。SDS-PAGE分析显示该融合蛋白主要以包涵体形式表达。Western-Blot鉴定虽然证明该融合蛋白表达正确,但即便在变性条件下该蛋白的亲和层析纯化效果也不佳。以PbTIP融合蛋白经过初次和三次加强免疫获得的小鼠PbTIP多克隆抗体滴度达到1∶105以上。进一步的研究表明,小鼠PbTIP抗血清对体外培养恶性疟原虫的生长具有一定的抑制作用,这显示PbTIP多克隆抗体对恶性疟原虫感染具有一定的交叉保护作用。以上实验结果为后续PbTIP在疟原虫免疫抑制中的功能及其机制研究奠定了一定的基础。
- 黄豫晓刘学武沈燕李英辉梁娇王军刘忠湘赵亚徐志凯
- 关键词：疟原虫免疫抑制
- 针对HIV-1进入细胞过程的抑制剂研究进展被引量：2
- 2001年
- 徐志凯姜世勃
- 关键词：HIV细胞过程抑制剂
- 人抗体κ轻链可变区基因的克隆及序列分析被引量：2
- 1997年
- 人抗体κ轻链可变区基因的克隆及序列分析阎岩徐志凯姜绍谆王海涛尹文薛小平赵茜白文涛（第四军医大学微生物学教研室，西安７１００３２）用噬菌体抗体库技术制备人ＭｃＡｂ可以克服用常规方法难以克服的困难，如融合率及阳性率低、杂交瘤不稳定和抗体产量低等。扩增人...
- 阎岩徐志凯姜绍谆王海涛尹文薛小平赵茜白文涛
- 关键词：克隆
- 新型结核疫苗的研究进展被引量：2
- 2011年
- 结核病是一种古老的疾病。据估计,全世界有1/3的人口感染结核分枝杆菌（mycobacterium tuber-culosis,MTB）,每年大约有200万结核病患者死亡,90%的感染者为潜伏感染,病原体以休眠的方式存在于机体内,约有10%的感染者为活动性结核患者。在一些发展中国家,对结核病的预防和治疗相当落后,结核病仍然阻碍社会经济的发展。
- 郝彦斐柏银兰徐志凯
- 关键词：结核疫苗结核病患者结核分枝杆菌活动性结核感染者机体内
- 辅受体突变导致HIV感染抑制的机理研究被引量：1
- 2002年
- 目的 研究抗HIV感染者淋巴细胞HIV 1辅受体突变的情况 ,阐明其感染抑制的分子机理。方法 设计特定的引物 ,用PCR方法检测健康人、HIV感染者和抗HIV感染者的基因组DNA中HIV辅受体 (CCR5 )是否突变。结果 抗HIV感染者发生CCR5△ 32纯合子突变 ,健康人及HIV感染者CCR5基因未发生突变。讨论 发现了我国本土人群存在CCR5△ 32纯合子突变 ,此突变可能为抗HIV感染保护机制 。
- 黎志东徐志凯陈峥
- 关键词：HIV分子机理艾滋病
- 抗汉坦病毒NP抗原细胞内抗体的瞬时表达及活性检测被引量：3
- 2004年
- 目的 :在真核细胞中表达抗汉坦病毒NP抗原鼠源性单克隆抗体 (mAb) 1A8的scFv ,并检测表达产物的活性。方法 :将真核表达载体 1A8 scFv Cκ/pCI neo用脂质体转染COS 7细胞 ,用间接免疫荧光和免疫共沉淀法检测瞬时表达产物的免疫学活性。结果 :间接免疫荧光的结果表明 ,约 1%细胞胞质中出现弥散荧光 ,在免疫共沉淀 /免疫印记中 ,表达的抗体片段可与汉坦病毒的NP抗原特异性结合。结论 :细胞内表达的1A8 scFv Cκ可与NP抗原特异性结合 。
- 白文涛徐志凯张芳琳罗雯刘勇吴兴安阎岩
- 关键词：细胞内免疫单链抗体汉坦病毒
- HIV-1囊膜糖蛋白gp41三聚体结构域基因的表达及其单克隆抗体的制备被引量：2
- 2004年
- 目的 :表达HIV 1囊膜糖蛋白gp4 1三聚体结构域基因N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,并制备针对该融合蛋白的单克隆抗体 (mAb) ,为筛选抗HIV多肽及分析gp4 1表位的免疫原提供抗体工具。方法 :在BL2 1(DE3)中诱导表达N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,经mAbNC 1鉴定后 ,采用小鼠腹股沟皮下NC膜免疫的方法免疫小鼠 ,并进行细胞融合、克隆化制备抗N5 1(L6 )C4 6mAb ,用ELISA法初步鉴定其特异性位点。结果 :获得了高表达的N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,并能与识别特异性空间构象的mAbNC 1反应。用该融合蛋白免疫小鼠后 ,获得了 6株抗N5 1(L6 )C4 6的mAb ,这 6株mAb均特异识别兔抗N36 (L6 )C34抗体捕获的融合蛋白 ,但不与N36或C34多肽片段反应。结论 :得到高效表达融合蛋白N5 1(L6 )C4 6 ,并呈现gp4 1核心结构空间构象。用此蛋白免疫小鼠得到 6株特异结合gp4
- 陈峥徐志凯黄庆生黎志东姜世勃
- 关键词：HIV-1GP41单克隆抗体
