代蕾
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
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- PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞钙信号的影响及其机理初探
- 猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease, PCVD)主要是由猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2, PCV2)引起的猪传染性疾病。由于PCV2能致感染仔猪的免疫抑制,给全世...
- 代蕾
- 关键词：淋巴细胞细胞内钙离子浓度
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型对仔猪淋巴细胞内cAMP和cGMP的影响
- 2011年
- 为探讨猪圆环病毒2型(PCV2)作用下淋巴细胞的免疫活性,本研究通过体外培养仔猪脾脏淋巴细胞及巨噬细胞(Mφ),分别以PCV2和PCV2+Mφ与淋巴细胞相互作用,同时设Mφ和空白对照组。培养0h、6h、12h、24h后收取各组淋巴细胞,放射免疫法检测胞内cAMP和cGMP浓度。另外,选取15头PCV2阴性仔猪,每头滴鼻PCV2病毒悬液,分别于14d、21d、35d迫杀,每次5头,并设立阴性对照组4头。放射免疫法检测脾脏cAMP和cGMP浓度,并计算cAMP/cGMP比值。体外检测结果显示:PCV2对体外培养淋巴细胞内cAMP和cGMP浓度影响不大;而在Mφ存在时PCV2在6h时能显著降低cAMP和cGMP浓度和cAMP/cGMP比例(p<0.05);12h时cGMP浓度下降(p<0.05),cAMP和cGMP比例上升(p<0.05);24h时cGMP浓度上升(p<0.05),但cAMP/cGMP比例降低(p<0.05)。体内检测结果表明,PCV2能显著降低仔猪脾脏细胞内cAMP浓度(p<0.05)及cAMP/cGMP比值(p<0.05)。该研究结果表明,在巨噬细胞存在时PCV2能够降低淋巴细胞内cAMP/cGMP的比值,从而影响淋巴细胞的功能。
- 华利忠张书霞陈耿孙运代蕾吕春子
- 关键词：猪圆环病毒2型免疫抑制淋巴细胞CAMP/CGMP
- 猪圆环病毒2型对体外培养仔猪淋巴细胞NF-κB信号的动态影响被引量：2
- 2013年
- 检测猪圆环病毒2型(PCV2)对体外培养仔猪淋巴细胞核因子-κB(NF-κB)信号的动态影响,探讨PCV2调控仔猪淋巴细胞炎性细胞因子产生与变化的机制。选取5头PCV2和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体和抗原阴性的普通断奶仔猪,无菌采集脾脏,分离脾脏细胞制成单个细胞悬液进行体外培养。分为对照组和试验组,试验组每毫升细胞悬液加PCV2病毒(病毒滴度为5×105 TCID50.mL-1)悬液200μL;对照组加等量1640细胞培养液,并分别于培养后0、6、12、24h收取悬浮的淋巴细胞。激光共聚焦显微镜检测NF-κB核易位,WesternBlot检测核蛋白中NF-κB/P65、胞质蛋白中磷酸化抑制性κBα(p-IκBα)含量,电泳迁移率(EMSA)法检测NF-κB与DNA的结合率。结果如下:淋巴细胞中NF-κB/P65蛋白核易位随着PCV2作用时间的延长而增加;淋巴细胞核中NF-κB/P65蛋白随PCV2作用时间增加逐渐升高,6h后均显著高于同时间对照组(P<0.05);NF-κB与DNA的结合率也随PCV2作用时间增加逐渐升高,PCV2作用6h后均显著高于对照组(P<0.05);淋巴细胞胞质中的p-IκBα蛋白水平在PCV2作用24h时达到峰值,并且培养6、12和24h均极显著高于同时间对照组(P<0.01)。研究表明PCV2可通过IκB的磷酸化降解途径显著激活仔猪淋巴细胞中NF-κB信号,使其发生核易位并与DNA发生结合,从而调控相关炎性细胞因子的表达。
- 吕春子代蕾郭华张书霞
- 关键词：猪圆环病毒2型淋巴细胞核因子ΚB
- PCV2感染通过胞内Ca^(2+)超载诱导仔猪腹股沟淋巴结及脾脏淋巴细胞凋亡被引量：3
- 2012年
- 为探讨猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)感染仔猪的淋巴结和脾脏淋巴细胞内钙信号变化在细胞凋亡中的作用,选取19头PCV2抗原和抗体均为阴性的5周龄健康断奶仔猪,随机分成对照组(4头)和试验组(15头),试验组仔猪通过滴鼻接种PCV2,并于接种后14、21和35 d分别扑杀5头,对照组仔猪滴鼻同量PBS后当天扑杀。所有仔猪扑杀时均取腹股沟淋巴结及脾脏,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光分光光度法检测细胞内Ca2+浓度,孔雀绿比色测定法检测Ca2+-ATP酶的活性,荧光定量RT-PCR检测钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA转录水平。结果表明:所有接种病毒仔猪腹股沟淋巴结及脾脏细胞凋亡率均极显著高于对照组(P<0.01),Ca2+浓度均极显著高于对照组(P<0.01);接种病毒仔猪腹股沟淋巴结Ca2+-ATP酶活性在21 d时显著下降(P<0.05),脾脏中Ca2+-ATP酶活性在21 d和35 d时显著下降(P<0.05);腹股沟淋巴结CaMKⅡmRNA转录在整个试验过程中无明显变化,但脾脏中CaMKⅡmRNA在PCV2接种后21 d和35 d比对照组显著上调(P<0.05)。结论:细胞内Ca2+超载是PCV2感染引起仔猪淋巴结及脾脏淋巴细胞凋亡的重要机制。
- 华利忠张书霞孙运代蕾陈耿吕春子
- 关键词：淋巴细胞胞内钙离子仔猪
