黄德海
- 作品数：8 被引量：27H指数：5
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- 噬菌体PF23生物学特性及其对小鼠肺炎克雷伯菌全身感染疗效观察被引量：2
- 2016年
- 目的了解肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体PF23的生物学特性,观察其对小鼠全身感染的疗效。方法电镜观察噬菌体PF23的形态,一步生长曲线以及对温度和pH的敏感性;提取噬菌体基因组,酶切法鉴定其核酸类型,并初步估算其基因组大小;建立小鼠全身感染模型,观察PF23的治疗效果。结果 PF23的噬菌斑为有晕清晰透明圆斑,直径约2mm;电镜观察PF23具有尾噬菌体目,长尾病毒科病毒的形态特征;其在〈50℃的温度下及pH 4～9范围内稳定性好。一步生长曲线显示其潜伏期约为11min,裂解量约为41PFU/细胞。其基因组核酸不能被双链DNA限制性内切酶KpnI、EcoRI和HindIII切开,但能被BamHI切开,且酶片段大小合计〉27kb。用PF23治疗由其宿主菌所致全身感染小鼠,小鼠的生存期均〉2d,7d存活率为37.5%;未治疗对照组小鼠1d内均死亡。结论肺炎克雷伯菌的噬菌体PF23潜伏期短,有较好的热稳定性和酸碱稳定性,治疗小鼠肺炎克雷伯菌全身感染效果显著,值得进一步研究。
- 王书伟黄德海靳静王山梅陈松建李振江张改李亚辉王小亭王中全
- 关键词：肺炎克雷伯菌噬菌体生物学特性全身感染
- 19株新分离噬菌体可裂解肺炎克雷伯菌临床株的ERIC-PCR指纹图谱分析被引量：4
- 2015年
- 目的测定19株新分离噬菌体对30株肺炎克雷伯菌临床株的噬菌谱;对噬菌体可感染菌株进行同源性分析以进一步评价其噬菌谱。方法利用滴斑法测定19株新分离噬菌体的噬菌谱;采用肠杆菌基因间重复一致序列为引物的聚合酶链反应(ERIC-PCR)对噬菌体感染的菌株进行同源性分析。结果 19株新分离噬菌体的噬菌谱可覆盖67%的被调查菌株(20/30)。其中以噬菌体P13感染的菌株最多,占33%(10/30),但这些菌株的ERIC-PCR分型仅归属于2种类型:Ⅰ型和Ⅵ型;噬菌体P27感染20%(6/30)的菌株,这些菌株的ERIC-PCR分型归属于4种类型:Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅴ型和Ⅷ型。结论根据肺炎克雷伯菌的ERIC-PCR指纹图谱分型信息,以噬菌体P27的噬菌谱较宽,可感染4种类型亲缘关系较远的肺炎克雷伯菌临床株。
- 靳静黄德海王小亭苏胜兵徐旭凌周思翔王中全
- 关键词：肺炎克雷伯菌噬菌体ERIC-PCR
- 粘质沙雷菌毒性噬菌体PS4的生物学特性及其在小鼠血清中的杀菌作用研究被引量：9
- 2015年
- 目的研究粘质沙雷菌毒性噬菌体PS4的生物学特性及其在小鼠血清中的抗菌活性。方法观察PS4的噬菌斑及电镜下形态;测定PS4的噬菌谱、生长曲线及其理化稳定性,PS4在营养肉汤培养基、新鲜小鼠血清和灭活小鼠血清中的杀菌作用,以及小鼠血清中影响PS4杀菌能力影响因素。结果 PS4为长尾型噬菌体,在以粘质沙雷菌临床株S4为指示菌时,PS4可形成直径为1-1.5mm完全透明噬菌斑,其感染S4的潜伏期为10min,暴发量约为100PFU/cell,且S4对PS4的抗性突变率仅为10-7。PS4在pH 5-10的环境中具有较好的稳定性,在50℃的环境中仍能长时间保持活力。PS4在新鲜未灭活血清中对S4不具杀菌能力,但在56℃热灭活30min的鼠血清中以及在营养肉汤中的杀菌率均达99.99%,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 PS4具有一定的酸碱稳定性和热稳定性,有望用于医院环境＂消毒＂,以减少多重耐药粘质沙雷菌所致的院内感染的发生。但因其杀菌作用受血清中不耐热成分的严重干扰,故不能用于治疗由S4引起的小鼠全身感染。
- 靳静张改李振江王书伟陈松建黄德海李亚辉王小亭王中全
- 关键词：粘质沙雷氏菌噬菌体生物学特性抗菌活性
- 肺炎克雷伯菌噬菌体LH-02的生物学特性及基因组初步研究被引量：12
- 2016年
- 目的研究肺炎克雷伯菌噬菌体LH-02的生物学特性及基因组性质。方法观察LH-02的噬菌斑形态和电镜下形态;调查LH-02的噬菌谱,并观察其一步生长曲线以及理化稳定性;提取噬菌体基因组进行酶切鉴定。结果LH-02在宿主菌KF29菌苔上形成直径2~3mm的透明噬菌斑,外周有宽2~3mm的半透明晕环;电镜观察确定其为有尾噬菌体目,短尾噬菌体科;一步生长曲线显示LH-02感染KF29的潜伏期短（约15min）,裂解量大（约217PFU/细胞）;LH-02在一个较宽的pH范围内（5~10）和较高的温度（50℃）范围内活性稳定;LH-02的核酸可被KpnⅠ,EcoRⅠ,HindⅢ降解,但不能被BamHⅠ降解。结论 LH-02为裂解性噬菌体,基因组为双链DNA,其潜伏期短,裂解量大,稳定性好,有望成为生物抗菌剂。
- 张改黄德海靳静李振江王书伟陈松建李亚辉王小亭王进王中全
- 关键词：肺炎克雷伯菌噬菌体生物学特性基因组
- 阴沟肠杆菌裂解性噬菌体Pyg1生物学特性及补体对其杀菌作用的研究被引量：11
- 2015年
- 目的明确阴沟肠杆菌噬菌体Pyg1的生物学特性及补体对其杀菌作用的影响。方法电镜观察Pyg1形态,分析Pyg1噬菌谱、生长曲线及理化稳定性;比较Pyg1在不同补体活性血清中与阴沟肠杆菌临床分离株YG7作用1h后存活的细菌数。结果 Pyg1为肌尾型噬菌体,其感染YG7的潜伏期为20min,爆发量为100PFU/cell。Pyg1在pH5～9的环境中具有较好的稳定性,在50℃的环境中活性也无明显变化。Pyg1在56℃、30min热灭活的鼠血清中和在营养肉汤中均具较强的杀菌能力（P〉0.05）,存活细菌数〈100CFU/ml。但在新鲜未灭活鼠血清和补体活性为25U/ml的液体中对YG7的杀菌能力减弱,存活细菌数〉105 CFU/ml。当补体活性超过50 U/ml时,Pyg1完全失去对YG7的抗菌活性,存活细菌数与无噬菌体对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,均达107 CFU/ml以上。结论Pyg1是一株裂解性噬菌体,在自然条件下其杀菌作用强且稳定,故在减少医院环境中对其敏感的多重耐药阴沟肠杆菌方面有潜在的应用前景。但因Pyg1对YG7的杀菌作用受血清中不耐热物质补体的干扰,因此不适于治疗YG7引起的全身感染。
- 靳静王书伟黄德海张改李振江陈松建李亚辉王中全
- 关键词：阴沟肠杆菌噬菌体生物学特性补体系统
- 肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体PhF168的生物学特性及其对重症败血症小鼠疗效的初步研究被引量：5
- 2016年
- 目的明确肺炎克雷伯菌噬菌体PhF168的生物学特性及其对小鼠重症败血症的疗效。方法电镜观察PhF168的形态,调查其噬菌谱并研究其一步生长曲线、温度和酸碱稳定性等生物学特性;提取PhF168的基因组,酶切鉴定其核酸类型,并初步估算其基因组的大小;建立小鼠重症败血症感染模型,观察PhF168治疗效果。结果 PhF168可在宿主菌F168上形成直径3～5mm、完全透明并带有较宽晕环的噬菌斑,为裂解性噬菌体。电镜下其颗粒呈有尾噬菌体目长尾噬菌体科的形态特征。PhF168的基因组为dsDNA,〉40kb,含有EcoRⅠ和BamHⅠ限制性内切酶切位点。PhF168在宿主菌F168中的潜伏期为15min,裂解量为（64±5）PFU/细胞,在pH 4～9和〈50℃下具良好稳定性。用PhF168治疗由其宿主菌F168感染所致的重症败血症小鼠,所有小鼠的生存期均在3d以上,7d存活率达40%。未治疗对照组小鼠1d内全部死亡。结论 PhF168杀菌作用高效,具有较好的热稳定性和酸碱稳定性,治疗宿主菌引起的小鼠重症败血症疗效显著,可作为治疗细菌感染的噬菌体候选株。
- 李振江黄德海靳静王山梅王书伟张改陈松建王进
- 关键词：噬菌体肺炎克雷伯菌生物学特性败血症
- 噬菌体LH-01治疗不同宿主菌所致小鼠致死性败血症影响因素研究被引量：9
- 2015年
- 目的观察肺炎克雷伯菌噬菌体LH-01治疗不同宿主菌所致小鼠败血症的效果,分析影响疗效因素,探索评价噬菌体疗效的方法。方法通过比较噬菌斑和成斑率,从9株LH-01宿主菌中选择对其敏感性较强的菌株。尾静脉注射绝对致死量的不同敏感菌致小鼠败血症,2h后通过尾静脉注射LH-01治疗并观察其疗效。比较LH-01在小鼠新鲜血清、补体热灭活血清,以及在标准补体溶血活性由低至高的溶液中对敏感菌的杀灭能力,明确引起LH-01对不同敏感菌感染组小鼠疗效差异的因素。结果 9株宿主菌中KP6、KP13、KP16和KP22在营养肉汤中对LH-01最为敏感。当小鼠全身感染致死量的这4种细菌后,LH-01的治疗可使KP6感染组小鼠生存率达90%(9/10),KP13组为30%(3/10),而KP16组和KP22组小鼠全部死亡。体外试验显示,除LH-01对KP6的作用不受补体影响外,LH-01对其余3株菌的杀灭作用均受补体影响,其中25U/ml的补体活性即可完全抑制LH-01对KP16和KP22的杀灭作用,而完全抑制对KP13的杀灭作用所需的补体活性≥50U/ml。结论补体是影响LH-01治疗小鼠肺炎克雷伯菌感染疗效的最主要原因。血清中噬菌体对致病菌的杀菌力和补体干扰杀菌的程度有助于预测噬菌体疗效,指导细菌感染的噬菌体治疗。
- 靳静李振江黄德海张改陈松建王书伟李亚辉王小亭王中全
- 关键词：肺炎克雷伯菌全身感染补体系统
- 噬菌体PF18的生物学特性及其对肺炎克雷伯菌所致小鼠全身感染疗效的初步研究
- 2016年
- 目的研究新分离噬菌体PF18的生物学特性及其对肺炎克雷伯菌所致小鼠全身感染的疗效。方法调查PF18的噬菌谱,观察其感染肺炎克雷伯菌临床株F18的噬菌斑形态。电镜下明确其形态分类。提取噬菌体PF18的基因组并进行酶切鉴定。观察PF18尾静脉注射治疗全身感染小鼠的生存状态变化。结果 PF18在F18上可形成直径约为5mm完全透明且周围有晕环的噬菌斑,电镜显示其属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科。PF18感染F18的潜伏期为17min,爆发量约为200PFU/细胞。PF18的基因组可被EcoRI、BamHI两种限制性内切酶降解,但不能被HindⅢ,kpnI降解。PF18治疗组小鼠1d内生存率为100%,1周内生存率可达30%,而无治疗对照组小鼠1d能全部死亡,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 PF18潜伏期短,爆发量大,且治疗肺炎克雷伯菌所致小鼠的全身感染有一定疗效,有望作为对抗多重耐药肺炎克雷伯菌感染的生物抗菌剂,应对PF18进行深入研究。
- 张改陈松建靳静李振江王书伟黄德海李亚辉王小亭王山梅王中全
- 关键词：肺炎克雷伯菌噬菌体生物学特性全身感染
