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超顺磁性氧化铁-短发夹RNA双功能分子探针体外转染卵巢癌细胞的最佳浓度被引量：3: 2015年; 目的：采用不同质量浓度的超顺磁性氧化铁-短发夹RNA（superparamagnetic iron oxide-short hairpin RNA,SPIO-ShRNA）分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞,观察细胞形态,检测细胞的生物学行为,寻找最佳的转染浓度。方法：将铁浓度分别为5、15、30、45、75、100 mg/L的探针转染SKOV3细胞后,采用荧光倒置显微镜观察探针进入细胞情况,普鲁士蓝染色及透射电镜观察细胞形态及细胞内铁颗粒,原子吸收光谱仪法测定细胞内铁含量,cell counting kit-8（CCK-8）检测细胞活性,流式细胞术观察细胞凋亡,Western blot检测细胞内表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）蛋白的表达,磁共振成像（magnetic resonance imaging,MRI）检测细胞内信号强度变化。结果：在5∽30 mg/L铁浓度范围内,细胞摄取量随探针铁质量浓度增加而增大,当探针铁浓度为45 mg/L时,进入细胞达到饱和,标记率接近100%;细胞活性随探针质量浓度的增加而降低,各实验组细胞活性分别为94.626%±1.050%、93.373%±1.180%、91.700%±3.122%、75.100%±4.362%、72.983%±3.233%、71.010%±2.910%,5、15、30 mg/L组细胞活性未见明显下降,差异无统计学意义（P=0.475,P=0.226,P=0.068）;≥45 mg/L细胞活性明显下降（P〈0.001）;探针浓度≥45 mg/L时,探针对SKOV3细胞EGFR蛋白表达抑制率明显增加,45 mg/L组蛋白表达率为68.905%±3.510%,与5、15、30 mg/L组相比差异具有统计学意义（P〈0.001,P=0.001,P=0.003,P均〈0.01）;MRI显示随着探针质量浓度增加,细胞信号强度逐渐降低,45 mg/L组细胞信号强度为165.55±4.92,信号强度明显降低,45 mg/L组与空白组（相同体积的磷酸盐缓冲液）、正常细胞组（未标记的卵巢癌SKOV3细胞）、5、15、30 mg/L各组信号强度相比,差异均有统计学意义（P均〈0.001）。结论：当SPIO-ShRNA分子探针铁浓度为45 mg/L时,可有效转染并特异性抑制卵巢癌SKOV3细胞的表达,能被MRI所检测,初步证�; 葛晓东李妹玲文曦琳李易邓小林吴晓凤文明李少林; 关键词：分子探针 SKOV3细胞

SPIO-shRNA双功能分子探针药动学及活体MR成像研究被引量：5: 2015年; 本研究探讨SPIO-sh RNA双功能分子探针在活体内的药代动力学特征及磁共振(magnetic resonance,MR)成像无创评估其主要脏器分布。将18只新西兰大白兔随机分为3组,分别注射不同剂量的分子探针,于注射前30 min及注射后不同时间点采血,测量铁含量以分析探针药代动力学。24只昆明(KM)小鼠随机分为4组,以每只小鼠尾静脉注射200μL生理盐水为对照组,另3组分别注射不同剂量的分子探针,于注射后24 h行MRI扫描,扫描结束后立即取肝、脾、肾、脑及肌肉,制作切片行普鲁士蓝染色,观察探针在体内主要脏器组织的分布情况。结果显示,本探针的药代动力学符合二室模型,半衰期超过3 h;MRI显示探针在正常小鼠体内主要分布于肝脏与脾脏,肝脾MRI信号随着探针剂量的增加而降低(均P<0.05),组织切片普鲁士蓝染色证实了MRI检查结果,同时显示探针绝大部分能够逃避单核吞噬细胞系统的吞噬。本研究明确了SPIO-sh RNA分子探针在动物体内的药代动力学及主要脏器分布,为进一步的肿瘤活体成像时间及剂量的选择提供了重要参考价值。; 邓小林葛晓东吴晓凤李妹玲廖蕤堃曾丹妮文明; 关键词：分子探针超顺磁性氧化铁

SPIO-PLL-pshRNA分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞及MR成像研究被引量：9: 2014年; 目的:利用多聚赖氨酸修饰的超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide modified with Poly-L-lysine,SPIO-PLL)及质粒pGenesil1-shRNA构建SPIO-PLL-pshRNA分子探针,并初步评价其体外转染卵巢癌细胞SKOV3及MR成像的可行性。方法:利用静电吸附法连接SPIO-PLL和质粒pGenesil1-shRNA,微量分光光度计检测复合物离心后上清液中质粒DNA浓度,评测SPIO-PLL与质粒的结合能力;凝胶阻滞实验及zeta电位测定验证两者结合;通过普鲁士蓝染色法观察铁的入胞情况及荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达来检测复合物的细胞转染能力;MR扫描观察细胞转染后信号改变。结果:DNA结合实验、凝胶阻滞实验结果显示当SPIO-PLL和质粒质量比达6∶1时,二者可有效结合;激光粒度仪测定SPIO、SPIO-PLL、SPIOPLL-pshRNA 3组样品的zeta电位分别为(-14.8±0.35)、(15.2±0.55)、(3.6±0.35)mV,3组结果差异有统计学意义(F=6323.782,P=0.000;LSD-t:均P=0.000);所制备的SPIO-PLL-pshRNA分子探针体外转染细胞后,用普鲁士蓝染色法可检测到细胞内有铁颗粒分布,荧光显微镜观察到绿色荧光蛋白表达,MR扫描结果示无探针转染组及10、20、40μg/ml 3种浓度探针转染组的T2*信号强度值分别为(558±19)、(427±16)、(283±19)、(191±8),琼脂糖组及蒸馏水组分别为(600±36)、(670±16),随着探针浓度升高,信号强度降低,各组结果差异有统计学意义(F=279.667,P=0.000;SNK-q:均P<0.05)。结论:SPIO-PLL纳米粒可有效结合质粒pGenesil1-shRNA,制得SPIO-PLL-pshRNA分子探针,该探针于体外成功转染卵巢癌SKOV3细胞,并于MR扫描下T2*WI信号强度降低。; 文曦琳李易葛晓东李妹玲邓小林吴晓凤文明; 关键词：超顺磁性氧化铁多聚赖氨酸分子探针

外加磁场对SPIO-shRNA分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞的影响被引量：2: 2015年; 目的探讨外加磁场对SPIO-shRNA分子探针转染人卵巢癌SKOV3细胞的影响。方法设定质量浓度为45 mg/L的SPIO-shRNA分子探针转染人卵巢癌SKOV3细胞,并将SKOV3细胞分为3组:未转染的细胞组(空白对照组),SPIO-shRNA分子探针转染的细胞组(阴性对照组),培养皿底部外加磁场的SPIO-shRNA分子探针转染的细胞组(实验组)。采用流式细胞术检测细胞转染率,CCK-8法检测细胞增殖及活性,Western blot法检测细胞表皮生长因子受体(EGFR)蛋白水平,荧光定量PCR检测EGFR mRNA水平,磁共振(MR)扫描检测细胞内信号强度变化。结果与阴性对照组比较,实验组的细胞转染率[(79.20±3.31)%]显著增加(P=0.001);实验组的细胞活性(P=0.011)、EGFR蛋白及mRNA表达量均明显降低(P均<0.05);实验组的MR图像信号强度明显降低(P=0.0004)。结论外加磁场可以诱导SPIO-shRNA分子探针进入卵巢癌SKOV3细胞,从而提高细胞的转染率。; 葛晓东李妹玲邓小林吴晓凤曾丹妮廖蕤堃文明李少林; 关键词：分子探针 SKOV3细胞转染

卵巢癌特异性MR分子探针的制备被引量：3: 2014年; 目的制备针对卵巢癌的特异性磁共振(magnetic resonance,MR)分子探针,并评价其体外转染SKOV3细胞的可行性。方法琼脂糖凝胶阻滞实验确定探针中的多聚赖氨酸修饰的超顺磁性氧化铁(SPIO-PLL)及质粒p Genesil1-shRNA的最佳质量比,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达以检测探针是否进入细胞;透射电子显微镜观察探针中铁在细胞中的部位;CCK-8法检测探针的细胞毒性;MR扫描检测探针转染后细胞的T2*信号强度改变。结果当SPIO-PLL和质粒的质量比达6∶1时,二者有效结合;探针体外转染细胞后,可观察到绿色荧光蛋白表达,检测到铁颗粒存在于胞质内;在探针浓度低于50 mg/L的范围内,细胞存活率高于80%;探针转染后细胞的T2*信号强度明显降低(P<0.01)。结论成功制备卵巢癌特异分子探针,在体外成功转染卵巢癌SKOV3细胞,对细胞毒性小,可被MR扫描敏感检测。; 文曦琳李易葛晓东李妹玲文明李少林; 关键词：卵巢癌超顺磁性氧化铁分子探针

ADC比值鉴别诊断儿童后颅窝肿瘤被引量：7: 2015年; 目的探讨肿瘤与正常脑组织表观扩散系数(ADC)比值诊断儿童后颅窝肿瘤的价值。方法回顾性分析60例经手术病理证实的儿童后颅窝肿瘤,其中毛细胞型星形细胞瘤(PA)30例,髓母细胞瘤(MB)18例,室管膜瘤12例。术前均接受MR检查,包括DWI。测定肿瘤实性部分、正常脑组织ADC值,计算肿瘤与正常脑组织ADC比值。利用ROC曲线确定ADC比值对肿瘤鉴别诊断的最佳阈值。结果肿瘤与正常脑组织ADC比值PA为2.33±0.39,MB为0.96±0.19,室管膜瘤为1.52±0.26,差异有统计学意义(P均<0.05)。ROC曲线分析显示区分室管膜瘤与PA的肿瘤与正常脑组织ADC比值最佳阈值为1.87,其敏感度为91.7%,特异度为86.7%;区分MB与室管膜瘤的肿瘤与正常脑组织ADC比值最佳阈值为1.19,其敏感度为88.9%,特异度为91.7%。结论肿瘤与正常脑组织ADC比值对常见儿童后颅窝肿瘤具有较高的鉴别诊断价值。; 邓小林文明吴晓凤葛晓东李妹玲; 关键词：表观扩散系数扩散加权成像毛细胞型星形细胞瘤髓母细胞瘤室管膜瘤

超顺磁性氧化铁(SPIO)与多聚赖氨酸(PLL)纳米粒的制备、结构验证及其空间结构表征被引量：6: 2014年; 目的探讨葡聚糖修饰的超顺磁性氧化铁（super-paramagnetic iron oxide,SPIO）与多聚赖氨酸（polylysine,PLL）纳米粒的制备及其结构验证和空间结构表征。方法在共沉淀法制备葡聚糖修饰的SPIO基础上,加入PLL制备出一种新的SPIO-PLL纳米粒,利用粒度电位分析仪、透射电镜（transmission electron microscopy,TEM）对SPIO-PLL的粒径、电位、形貌学进行检测;高效液相凝胶色谱法（gel permeation chromatography,GPC）、红外光谱（fourier transform infrared spectroscopy,FTIR）及核磁共振氢谱法（1HNMR）对SPIOPLL连接成功与否进行验证;高精度的原子力显微镜（atomic force microscope,AFM）对SPIO-PLL的结构、形态及连接状态进行空间结构表征。结果粒度电位分析和TEM结果显示SPIO-PLL的平均粒径为7.37 nm,平均电位为13.6 mV;GPC、FTIR及1HNMR结果显示SPIO及PLL之间已经成功连接;高精度AFM清楚显示出SPIO与PLL之间以亚胺键形式稳定相连。结论成功制备出一种性质稳定、粒径较小的新型SPIO-PLL纳米粒,这将对随后的肿瘤特异性探针制备奠定一定的基础。; 李易文曦琳孙红武葛晓东李妹玲文明; 关键词：纳米粒

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葛晓东

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