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SPIO-shRNA双功能分子探针药动学及活体MR成像研究被引量：5: 2015年; 本研究探讨SPIO-sh RNA双功能分子探针在活体内的药代动力学特征及磁共振(magnetic resonance,MR)成像无创评估其主要脏器分布。将18只新西兰大白兔随机分为3组,分别注射不同剂量的分子探针,于注射前30 min及注射后不同时间点采血,测量铁含量以分析探针药代动力学。24只昆明(KM)小鼠随机分为4组,以每只小鼠尾静脉注射200μL生理盐水为对照组,另3组分别注射不同剂量的分子探针,于注射后24 h行MRI扫描,扫描结束后立即取肝、脾、肾、脑及肌肉,制作切片行普鲁士蓝染色,观察探针在体内主要脏器组织的分布情况。结果显示,本探针的药代动力学符合二室模型,半衰期超过3 h;MRI显示探针在正常小鼠体内主要分布于肝脏与脾脏,肝脾MRI信号随着探针剂量的增加而降低(均P<0.05),组织切片普鲁士蓝染色证实了MRI检查结果,同时显示探针绝大部分能够逃避单核吞噬细胞系统的吞噬。本研究明确了SPIO-sh RNA分子探针在动物体内的药代动力学及主要脏器分布,为进一步的肿瘤活体成像时间及剂量的选择提供了重要参考价值。; 邓小林葛晓东吴晓凤李妹玲廖蕤堃曾丹妮文明; 关键词：分子探针超顺磁性氧化铁

SPIO-PLL-pshRNA分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞及MR成像研究被引量：9: 2014年; 目的:利用多聚赖氨酸修饰的超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide modified with Poly-L-lysine,SPIO-PLL)及质粒pGenesil1-shRNA构建SPIO-PLL-pshRNA分子探针,并初步评价其体外转染卵巢癌细胞SKOV3及MR成像的可行性。方法:利用静电吸附法连接SPIO-PLL和质粒pGenesil1-shRNA,微量分光光度计检测复合物离心后上清液中质粒DNA浓度,评测SPIO-PLL与质粒的结合能力;凝胶阻滞实验及zeta电位测定验证两者结合;通过普鲁士蓝染色法观察铁的入胞情况及荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达来检测复合物的细胞转染能力;MR扫描观察细胞转染后信号改变。结果:DNA结合实验、凝胶阻滞实验结果显示当SPIO-PLL和质粒质量比达6∶1时,二者可有效结合;激光粒度仪测定SPIO、SPIO-PLL、SPIOPLL-pshRNA 3组样品的zeta电位分别为(-14.8±0.35)、(15.2±0.55)、(3.6±0.35)mV,3组结果差异有统计学意义(F=6323.782,P=0.000;LSD-t:均P=0.000);所制备的SPIO-PLL-pshRNA分子探针体外转染细胞后,用普鲁士蓝染色法可检测到细胞内有铁颗粒分布,荧光显微镜观察到绿色荧光蛋白表达,MR扫描结果示无探针转染组及10、20、40μg/ml 3种浓度探针转染组的T2*信号强度值分别为(558±19)、(427±16)、(283±19)、(191±8),琼脂糖组及蒸馏水组分别为(600±36)、(670±16),随着探针浓度升高,信号强度降低,各组结果差异有统计学意义(F=279.667,P=0.000;SNK-q:均P<0.05)。结论:SPIO-PLL纳米粒可有效结合质粒pGenesil1-shRNA,制得SPIO-PLL-pshRNA分子探针,该探针于体外成功转染卵巢癌SKOV3细胞,并于MR扫描下T2*WI信号强度降低。; 文曦琳李易葛晓东李妹玲邓小林吴晓凤文明; 关键词：超顺磁性氧化铁多聚赖氨酸分子探针

外加磁场对SPIO-shRNA分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞的影响被引量：2: 2015年; 目的探讨外加磁场对SPIO-shRNA分子探针转染人卵巢癌SKOV3细胞的影响。方法设定质量浓度为45 mg/L的SPIO-shRNA分子探针转染人卵巢癌SKOV3细胞,并将SKOV3细胞分为3组:未转染的细胞组(空白对照组),SPIO-shRNA分子探针转染的细胞组(阴性对照组),培养皿底部外加磁场的SPIO-shRNA分子探针转染的细胞组(实验组)。采用流式细胞术检测细胞转染率,CCK-8法检测细胞增殖及活性,Western blot法检测细胞表皮生长因子受体(EGFR)蛋白水平,荧光定量PCR检测EGFR mRNA水平,磁共振(MR)扫描检测细胞内信号强度变化。结果与阴性对照组比较,实验组的细胞转染率[(79.20±3.31)%]显著增加(P=0.001);实验组的细胞活性(P=0.011)、EGFR蛋白及mRNA表达量均明显降低(P均<0.05);实验组的MR图像信号强度明显降低(P=0.0004)。结论外加磁场可以诱导SPIO-shRNA分子探针进入卵巢癌SKOV3细胞,从而提高细胞的转染率。; 葛晓东李妹玲邓小林吴晓凤曾丹妮廖蕤堃文明李少林; 关键词：分子探针 SKOV3细胞转染

MR成像活体示踪SPIO-shRNA分子探针的生物分布被引量：1: 2016年; 目的探讨磁共振成像(MR成像)能否示踪超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide,SPIO)-shRNA分子探针在活体动物主要脏器的生物分布。方法 6只新西兰大白兔,注射SPIO-shRNA分子探针(含铁量为9.6mg/kg),原子吸收光谱法(atomic absorption spectrometry,AAS)测量注射前30 min及注射后1 min、3min、5min、10min、15min、30min、1h、2h、3h、6h、12h、24h的血浆铁质量浓度以分析其药代动力学。6只昆明(KM)小鼠于尾静脉注射含铁量为4.8mg/kg的SPIO-shRNA分子探针,MR成像活体示踪探针在小鼠体内主要脏器的生物分布。96只KM小鼠于未给药及给药后1d、3d、5d、7d、9d、11d、14d,取肝、脾、肾、脑及肌肉组织,AAS测定各脏器组织探针铁含量,同时行普鲁士蓝染色并与MR结果对照分析。结果本探针的药代动力学符合二室模型,半衰期为(3.692±0.196)h。MR显示探针在正常小鼠体内主要分布于肝脏与脾脏,代谢缓慢,于2周左右完全从肝、脾代谢清除;AAS对脏器探针铁含量的测定与普鲁士蓝染色证实了MR成像结果。结论本研究明确了MR成像可用于活体示踪SPIO-shRNA分子探针在动物体内主要脏器的生物分布,为进一步利用MR无创监测探针在动物体内的治疗作用提供了依据。; 邓小林吴晓凤廖蕤堃曾丹妮文明李少林; 关键词：分子探针超顺磁性氧化铁生物分布

超顺磁性氧化铁-短发夹RNA双功能分子探针体外转染卵巢癌细胞的最佳浓度被引量：3: 2015年; 目的：采用不同质量浓度的超顺磁性氧化铁-短发夹RNA（superparamagnetic iron oxide-short hairpin RNA,SPIO-ShRNA）分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞,观察细胞形态,检测细胞的生物学行为,寻找最佳的转染浓度。方法：将铁浓度分别为5、15、30、45、75、100 mg/L的探针转染SKOV3细胞后,采用荧光倒置显微镜观察探针进入细胞情况,普鲁士蓝染色及透射电镜观察细胞形态及细胞内铁颗粒,原子吸收光谱仪法测定细胞内铁含量,cell counting kit-8（CCK-8）检测细胞活性,流式细胞术观察细胞凋亡,Western blot检测细胞内表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）蛋白的表达,磁共振成像（magnetic resonance imaging,MRI）检测细胞内信号强度变化。结果：在5∽30 mg/L铁浓度范围内,细胞摄取量随探针铁质量浓度增加而增大,当探针铁浓度为45 mg/L时,进入细胞达到饱和,标记率接近100%;细胞活性随探针质量浓度的增加而降低,各实验组细胞活性分别为94.626%±1.050%、93.373%±1.180%、91.700%±3.122%、75.100%±4.362%、72.983%±3.233%、71.010%±2.910%,5、15、30 mg/L组细胞活性未见明显下降,差异无统计学意义（P=0.475,P=0.226,P=0.068）;≥45 mg/L细胞活性明显下降（P〈0.001）;探针浓度≥45 mg/L时,探针对SKOV3细胞EGFR蛋白表达抑制率明显增加,45 mg/L组蛋白表达率为68.905%±3.510%,与5、15、30 mg/L组相比差异具有统计学意义（P〈0.001,P=0.001,P=0.003,P均〈0.01）;MRI显示随着探针质量浓度增加,细胞信号强度逐渐降低,45 mg/L组细胞信号强度为165.55±4.92,信号强度明显降低,45 mg/L组与空白组（相同体积的磷酸盐缓冲液）、正常细胞组（未标记的卵巢癌SKOV3细胞）、5、15、30 mg/L各组信号强度相比,差异均有统计学意义（P均〈0.001）。结论：当SPIO-ShRNA分子探针铁浓度为45 mg/L时,可有效转染并特异性抑制卵巢癌SKOV3细胞的表达,能被MRI所检测,初步证�; 葛晓东李妹玲文曦琳李易邓小林吴晓凤文明李少林; 关键词：分子探针 SKOV3细胞

SPIO-shRNA分子探针注射不同时间点荷瘤裸鼠肿瘤区域组织信号变化及MRI最佳扫描时间被引量：1: 2016年; 目的:探讨注射SPIO-shRNA分子探针不同时间点的荷瘤裸鼠肿瘤区域组织信号强度变化情况,阐明分子探针活体磁共振成像(MRI)机制和最佳扫描时间。方法:探针注射剂量为18 mg·kg^(-1);将30只BALB/c荷瘤裸鼠随机分为6组,每组5只,分别于探针注射前和注射后12、24、27、30和36h等6个时间点行MRI检查,并测量裸鼠肿瘤组织及对侧肌肉组织在各时间点的信号强度变化;每次检查完成后立即处死裸鼠,取出肿瘤组织及肌肉组织行HE及普鲁士蓝染色,并在光学显微镜下观察裸鼠肿瘤组织的形态表现。结果:与注射前比较,探针注射后12、24和27h裸鼠肿瘤组织T1WI信号强度均升高(P<0.05),12、24、27、30和36h肿瘤组织T2WI和T2*GRE信号强度均降低(P<0.05或P<0.01);探针注射后27h肿瘤组织T1WI信号强度最高;探针注射后27h肿瘤组织T2WI和T2*GRE信号强度低于注射后12、24、30和36h(P<0.01)。与注射前比较,注射后24h时裸鼠对侧肌肉组织信号强度降低(P<0.05)。HE染色,裸鼠肿瘤组织结构紊乱,细胞核异型性较多;普鲁士蓝染色,在注射后各时间点上均存在蓝染的Fe颗粒,注射后27h时蓝染Fe颗粒最多。结论:SPIO-shRNA分子探针能成功靶向裸鼠肿瘤组织,且MRI最佳的扫描时间为探针注射后27h。; 廖蕤堃邓小林曾丹妮吴晓凤文明; 关键词：超顺磁性氧化铁分子探针

从转染细胞活性Meta分析SPIO用于分子影像学研究的最佳浓度区间被引量：2: 2017年; 目的:通过检测转染细胞的活性,Meta分析超顺磁性氧化铁纳米(superparamagnetic iron oxide,SPIO)在分子影像学实验中用于转染细胞的最佳浓度区间。方法:系统检索国外(Pub Med、Embase、Cochrane Library)及国内主要数据库(万方、维普、中国知网及中国生物医学数据库)建库至2016年3月间关于SPIO转染细胞的最佳浓度区间的相关文献,结合Cochrane协作网的推荐,制定纳入研究文献的标准,对纳入文献进行质量评估并提取研究数据。采用STATA 12.0进行统计学分析:偏倚性检验(Begg’s检验)、异质性检验(I2、P值、Q值检验法),在异质性较大时行亚组分析,讨论各组异质性(I2、P值、Q值检验法),计算各组死细胞比率均差值在各浓度上的合并效应量及95%可信区间,并画出SPIO浓度对细胞活性影响的剂量反应曲线,获取最佳浓度区间。结果:共14篇国内外研究论著符合纳入标准,文献异质性检验I2=60.61%;P=2.675×10-9;Q=139.62,提示数据组间存在显著的异质性,故进一步行亚组分析,按SPIO修饰或标记材料不同分为4组[A组:SPIO-聚乙烯酰胺(PEI)组;B组:SPIO-多聚赖氨酸(PLL)组;C组:SPIO-葡聚糖组;D组:SPIO-探针组],各组数据无明显异质性;拟合各组各浓度节点死细胞比率均差值及95%可信区间,画出剂量反应曲线(三次样条插值拟合曲线),分别得到A至D组较适宜的浓度区间值:4~6、10~50、10~50、5~25μg/m L。Deeks漏斗图呈较对称漏斗形,P=0.23>0.1,表明数据无明显发表偏倚。结论:在分子影像学研究中,当SPIO由聚乙烯酰胺(PEI)、葡聚糖、葡聚糖-多聚赖氨酸(PLL)包裹或制备为探针时,以SPIO对细胞的毒性影响为主要衡量指标,标记细胞的适宜浓度区间分别为:4~6、10~50、10~50、5~25μg/m L。; 曾丹妮廖蕤堃吴晓凤邓小林张竹张力强文明; 关键词：超顺磁性氧化铁细胞标记分子影像学

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邓小林

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