石科
- 作品数：8 被引量：3H指数：1
- 供职机构：郑州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目河南省医学科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 杜氏盐藻鞭毛相关蛋白cDNA片段的克隆及在鞭毛重吸收过程中的表达
- 2011年
- 目的:克隆杜氏盐藻鞭毛相关蛋白(FAP)的cDNA片段并探讨其功能。方法:分析莱茵衣藻等生物的FAP同源蛋白的氨基酸序列保守区域,设计简并引物。提取盐藻总RNA进行RT-PCR。根据得到的序列设计3’RACE引物,巢式PCR扩增该cDNA的3’端序列。秋水仙碱处理对数生长期的盐藻细胞,使细胞停留在分裂中期,并诱导鞭毛缩短,半定量PCR检测FAP基因的表达情况。结果:RT-PCR和3’RACE分别得到长1535bp和782bp的cDNA片段,拼接后总长2141bp,编码541个氨基酸。序列比对发现与莱茵衣藻的FAP(88%)、团藻CDC48(89%)氨基酸序列均有较高的同源性。秋水仙碱处理后盐藻细胞FAPmRNA表达量高于未处理对照组(F组间=43.192,P<0.001;F时间=2.659,P=0.043;F交互=594.419,P<0.001)。结论:成功获得杜氏盐藻FAP的cDNA片段,该基因在秋水仙碱诱导的鞭毛重吸收过程中表达量增高。
- 李靓石科李俊平柴丹丹薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻秋水仙碱
- 杜氏盐藻FKBP cDNA的克隆及其在鞭毛解组装中的功能被引量：1
- 2011年
- 目的:克隆杜氏盐藻FK506结合蛋白(FKBP)的cDNA片段并探讨其与鞭毛微管解组装的联系。方法:提取杜氏盐藻总RNA,根据已知盐藻FKBPcDNA3’端序列,用5’RACE方法扩增该cDNA的5’端序列,拼接得到全长并对其序列进行分析。秋水仙碱处理对数生长期杜氏盐藻,处理0、20、40、60、80、100、120、140和160min后采用实时荧光定量PCR检测FKBPmRNA的表达情况。结果:经5’RACE得到681bp的FKBPcDNA片段,拼接后得到的cDNA全长1075bp,序列分析显示其开放阅读框为762bp,编码253个氨基酸;经BLAST比对,其氨基酸序列具有FKBP家族特有的功能结构域,与莱茵衣藻、团藻、小球藻、大麦及水稻的同源性分别为61%、54%、47%、48%和51%。杜氏盐藻细胞FKBPmRNA表达量在秋水仙碱处理后20～40min明显升高,而在40～100min时逐渐下降,但仍高于对照组(F组间=32.580,P<0.001;F时间=5.543,P=0.001;F交互=237.306,P<0.001)。结论:得到了杜氏盐藻的FKBPcDNA全长序列;FKBP参与了杜氏盐藻微管解组装过程,可能参与了细胞通过鞭毛对外界应激反应的应答。
- 许芳石科李靓张楠楠薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻鞭毛
- 杜氏盐藻FLA8基因全长的克隆及鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:获得FLA8基因cDNA序列。方法:根据衣藻、小球藻等驱动蛋白-2亚基的氨基酸高度保守序列GYNGTIF、NEDPKDA设计一对简并引物,采用RT-PCR及3’RACE和5’RACE的方法扩增杜氏盐藻FLA8基因的全长。结果:克隆得到的杜氏盐藻FLA8基因cDNA全长序列为2612bp,序列分析显示其包括90bp的5’UTR、167bp的3’UTR以及2355bp的开放阅读框,其编码784个氨基酸残基,蛋白质的理论等电点为6.65,相对分子质量为85097。氨基酸序列同源性分析显示其与其他物种有较高的同源性:团藻(98%)、衣藻(99%)、小球藻(92%)。结论:得到杜氏盐藻驱动蛋白-2亚基FLA8的基因全长。
- 李俊平刘岷毛丽红石科李靓许尧薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻
- 杜氏盐藻类驱动蛋白钙调素结合蛋白马达区的表达与纯化
- 2011年
- 目的:构建杜氏盐藻类驱动蛋白钙调素结合蛋白马达区(KMD)基因原核表达载体并表达纯化KMD。方法:通过软件和在线工具预测KMD的理化性质。构建KMD的原核表达载体pET28a-KMD,而后在大肠杆菌BL21(DE3)内16℃过夜诱导表达KMD,通过超声破碎菌体和高速离心,将上清液进行亲和层析,获得粗纯目的蛋白,再利用离子交换层析和凝胶过滤层析进一步纯化。SDS-PAGE检测层析各阶段蛋白样品。将纯化后的KMD均分3份分别放置在-80℃、4℃和18℃环境中,1周后SDS-PAGE检测目的蛋白是否降解。结果:KMD相对分子质量为37480,预测pI为7.99。基因中含有的稀有密码子不会明显影响其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。多步层析后可以获得2个独立的目的蛋白洗脱峰,均为KMD且纯度可满足结晶条件搜索。纯化后的KMD在4℃和18℃下放置1周后无降解。结论:获得大量高纯度、均一性良好的KMD蛋白,能够满足培养蛋白晶体所需。
- 徐朋奇李杰张红梅石科韩康李梅薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻纯化
- 蛋白酶体亚基PSMD7在纤毛/鞭毛解聚及食管癌发生发展中的作用
- 泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasomesystem，UPS)参与真核生物的细胞周期、凋亡和信号传导等多个生物过程的调节，肿瘤细胞尤其依赖UPS来清除细胞内由于快速增殖而产生的有害的不成熟和不规则蛋白...
- 石科
- 关键词：食管癌
- 杜氏盐藻鞭毛内运输蛋白88在鞭毛组装过程中的功能分析及其原核表达
- 2013年
- 目的:克隆杜氏盐藻鞭毛内运输蛋白(IFT)88的cDNA全长并分析其部分功能。方法:根据盐藻转录组测序片段,分别设计其3'端内、外侧引物及5'端内、外侧引物,PCR扩增其全长。提取盐藻再生过程中不同时间段的总RNA,逆转录后进行实时荧光定量PCR,检测IFT88 mRNA的表达情况。随后利用ORF finder预测并扩增其开放阅读框,连接到pET28a载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),并在1mmol/LIPTG、37℃的条件下诱导4h,提取总蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测IFT88蛋白表达情况。结果:克隆拼接后共得到开放阅读框2400bp,编码799个氨基酸。BLAST显示该氨基酸序列与多个物种的IFT88有较高同源性。SDS-PAGE结果显示,与未诱导组相比,诱导组在90000左右有一条明显的条带。在鞭毛再生过程中,杜氏盐藻IFT88 mRNA的表达量在去鞭毛后30min左右时最高,随后快速下降。结论:扩增得到杜氏盐藻IFT88 cDNA序列且IFT88可能参与盐藻鞭毛组装。
- 韩康石科毛丽红李庆华龚方华蒋海丽薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻
- 蛋白酶体激活因子PA28α对Eca109和EC9706细胞细胞周期和凋亡的影响
- 2014年
- 目的:探讨蛋白酶体激活因子PA28α对食管鳞癌细胞周期和凋亡的影响。方法:扩增PA28α的cDNA全长序列并连接到pCMV-Myc上,构建真核表达载体pCMV-Myc-PA28α,脂质体法转染食管鳞癌细胞系Eca109和EC9706,荧光显微镜观察PA28α蛋白在细胞中的定位;Western blot法鉴定重组载体的表达;流式细胞仪检测PA28α在食管鳞癌EC9706细胞中过表达对其细胞周期和凋亡的影响。结果:转染了重组载体pCMV-Myc-PA28α的食管鳞癌Eca109和EC9706细胞中PA28α蛋白主要存在于细胞质。与空载体转染组(0.342±0.007)相比,pCMV-Myc-PA28α转染组(1.073±0.040)EC9706细胞中有较高的PA28α蛋白表达(F=984.411,P<0.001)。与空载体转染组(37.642±1.000)相比,pCMV-Myc-PA28α转染组(39.258±0.154)EC9706细胞处于S期细胞比例明显增高(F=24.592,P<0.001)。pCMV-Myc-PA28α转染组EC9706细胞的凋亡率(14.463%±0.634%)明显低于空载体转染组(43.893%±0.473%),差异有统计学意义(F=1 448.569,P<0.001)。结论:PA28α与食管鳞癌的凋亡有密切关系,可能成为治疗食管鳞癌的一个有效靶点。
- 蒋海丽张彦婷石科韩康王瑞莉龚方华王静薛乐勋关方霞
- 关键词：食管鳞癌细胞细胞周期细胞凋亡
- PSMD7基因在人食管鳞癌组织中的表达及影响癌细胞增殖、凋亡的机制研究被引量：1
- 2018年
- 背景与目的:26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基7(26S proteasome non-ATPase regulatory subunit 7,PSMD7)作为组成19S蛋白酶体盖子结构的核心成员是否参与肿瘤的发生、发展,以及具体的分子机制尚不清楚。本实验将研究PSMD7基因在人食管鳞癌组织中的表达,以及对癌细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测食管鳞癌及其癌旁正常组织标本中PSMD7的mRNA及蛋白表达情况。在人食管鳞癌细胞系TE-1中,用慢病毒介导的RNA干扰技术下调PSMD7的表达,观察细胞增殖及凋亡的变化,检测线粒体膜电位的变化、细胞质中Cyt C的表达以及凋亡相关因子的表达。结果:PSMD7基因的mRNA和蛋白在食管鳞癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织(P<0.05),PSMD7蛋白的高表达与淋巴结转移阳性呈正相关(P<0.05)。抑制PSMD7蛋白的表达可使细胞的增殖能力降低(P<0.05),并促进细胞的凋亡(P<0.05),同时线粒体膜电位降低,促进Cyt C释放进入细胞质,激活caspase级联反应,说明抑制PSMD7的表达诱导细胞凋亡是通过线粒体信号通路进行的。结论:PSMD7在食管鳞癌中呈高表达,并通过线粒体依赖的方式促进TE-1细胞凋亡。
- 张进忠石科石科杨亮闫秀明
- 关键词：食管鳞癌增殖凋亡线粒体
