法萍萍
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划浙江省自然科学基金浙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- mIL-4-SA双功能融合蛋白的制备和活性测定被引量：2
- 2010年
- 目的制备链亲和素标记的鼠白介素4(mIL-4-SA)融合蛋白,并研究其生物学功能。方法通过RT-PCR克隆mIL-4基因,构建mIL-4-SA-pET21表达质粒,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,对表达的融合蛋白采用镍金属螯合(Ni-NTA)色谱柱纯化、透析复性。MTT法检测融合蛋白对C57小鼠胸腺细胞的增殖作用,流式细胞仪分析融合蛋白对生物素化的B16F10细胞锚定修饰率。结果成功构建了mIL4-SA-pET21质粒,并在大肠杆菌中实现高效表达,表达量达菌体总蛋白质的35%,纯化后的mIL-4-SA融合蛋白纯度达95%,并具有双重活性,即mIL-4对C57小鼠胸腺细胞具有增殖作用和SA介导的高效结合至已生物素化的B16F10肿瘤细胞表面的功能(表面锚定修饰效率96.69%)。结论研制的mIL-4-SA融合蛋白具有双重活性,可为研制表面修饰的新型肿瘤细胞疫苗提供基础。
- 张振法萍萍李金龙胡志明高基民
- 关键词：链亲和素融合蛋白
- mIL21-SA双功能融合蛋白锚定治疗膀胱癌实验研究
- 2012年
- 目的:制备链亲合素标记的鼠白细胞介素21融合蛋白(mIL21-SA),治疗小鼠表浅膀胱癌。方法:构建mIL21-SA-pET21质粒,BL21表达,Ni-NTA纯化,透析复性,Western blot鉴定,MTT法检测其对小鼠胸腺细胞的增殖作用,流式检测其对生物素化的MB49锚定修饰率。建立小鼠MB49表浅膀胱癌模型,将mIL21-SA锚定在小鼠膀胱表面进行治疗并观察小鼠存活时间。60d后对mIL21-SA治疗后存活小鼠进行二次攻击。结果:mIL21-SA可以促进T细胞增殖,且具有SA介导的高效结合已生物素化的MB49表面的功能(修饰率98.74%)。膀胱灌注60d后,mIL21-SA组有10只(10/25)存活,二次攻击后,仍有6只(6/10)存活。与对照组比较均有统计学意义(P<0.05)。结论:该实验研制了具有双重活性的mIL21-SA,mIL21-SA锚定修饰治疗表浅膀胱癌是一种有效的免疫治疗方法。
- 王菲胡志明法萍萍白莉石小军罗满生李金龙高基民
- 关键词：白细胞介素21表浅膀胱癌
- SA-hIL2双功能融合蛋白的研制及其生物学鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的:制备链亲和素标记的人白细胞介素-2(SA-hIL2)融合蛋白,并研究其生物学功能。方法:构建SA-L-IL2-pET24重组表达质粒,在大肠杆菌中表达SA-hIL2融合蛋白,对表达的SA-hIL2融合蛋白采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化,透析复性。CCK-8法检测SA-hIL2融合蛋白对PHA刺激的人外周血淋巴细胞的增值活性,流式细胞仪分析SA-hIL2融合蛋白对生物素化的B16.F10肿瘤细胞表面锚定修饰效率。结果:SA-hIL2在大肠杆菌中实现了高效表达,约占菌体总蛋白的20%,制备的SA-hIL2融合蛋白纯度达到95%,并具有双重活性,即hIL-2促进PHA刺激的人外周血淋巴细胞的增值活性和SA介导的高效结合至已生物素化的B16.F10肿瘤细胞表面的功能(表面锚定修饰效率约95%)。结论:研制的SA-hIL2融合蛋白具有双重活性,可为研制表面修饰的新型肿瘤细胞疫苗提供基础。
- 张琳胡志明法萍萍梁中锟高基民
- 关键词：白细胞介素2链亲和素融合蛋白
- SA/hIL21双功能融合蛋白的表达、纯化及生物学活性检测被引量：3
- 2010年
- 目的制备链亲和素(SA)标记的人白细胞介素21融合蛋白(SA-hIL-21),检测其生物学活性。方法构建hIL21-SA-pET21及pET24a-SA-hIL21质粒,利用大肠杆菌BL21(DE3)表达两种双功能融合蛋白,并利用镍金属螯合层析柱(Ni-NTA)纯化,之后透析复性,Western blotting进行鉴定,最后利用MTT法检测hIL21-SA及SA-hIL21融合蛋白与抗CD3单克隆抗体(anti-CD3)共刺激人外周血淋巴细胞的增殖活性,流式细胞仪分析两种融合蛋白对生物素化的MB49肿瘤细胞的锚定修饰效率。结果 hIL21-SA及SA-hIL21重组融合蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达,约占菌体蛋白的30%,经复性后hIL21-SA及SA-hIL21具有了双重活性,即不仅可以与抗CD3单抗共刺激淋巴细胞的增殖,而且具有了SA介导的高效结合已生物素化的MB49肿瘤细胞表面的功能(表面修饰效率95.18%,96.91%)。结论本实验成功研制了具有双重活性的hIL21-SA及SA-hIL21融合蛋白,两种融合蛋白的双功能活性无显著性差异,该项研究为SA/hIL21双功能融合蛋白应用于肿瘤疫苗以及肿瘤局部治疗奠定了基础。
- 法萍萍张振李金龙胡志明高基民
- 关键词：白细胞介素21链亲和素融合蛋白
