高基民
- 作品数：180 被引量：333H指数：10
- 供职机构：温州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- 表达人冠状病毒NL63棘突蛋白不同片段的重组痘苗病毒的制备与表达分析被引量：1
- 2011年
- HCoV-NL63是新近发现的人冠状病毒,对其外膜糖蛋白-棘突蛋白的表达及功能的研究仍有待深入。本研究利用天坛株痘苗病毒载体,克隆构建可表达HCoV-NL63棘突蛋白四个片段(N端棘突蛋白:S1;C端棘突蛋白:S2;受体结合区大片段:RL;受体结合区小片段:RS)的重组痘苗病毒(vJSC1175-S1;vJSC1175-S2;vJSC1175-RL;vJSC1175-RS),酶切测序证实表达载体构建正确,免疫荧光分析(IFA)各重组痘苗病毒中棘突蛋白不同片段的表达与定位,Western-Blot分析表明各种重组蛋白表达正确。分析结果显示:4种重组蛋白均能有效表达,S1、RL及RS蛋白的荧光主要分布在细胞膜上,而S2蛋白的荧光则主要分布于细胞浆,各个片段的分子量大小与文献报道相同,并可进行正确的翻译修饰(糖基化)。本研究首次采用痘苗病毒天坛株载体构建制备了表达HCoV-NL63棘突蛋白不同片段的重组痘苗病毒,为进一步分析人冠状病毒HCoV-NL63棘突蛋白的结构功能及探索其抗原性和免疫原性奠定了基础。
- 赵国霞周为民陆柔剑王惠娟赵敏张庭瑛邓瑶高基民谭文杰
- 一种新型人白细胞介素-11
- 本发明研制出了一种N端缺失8个氨基酸残基(即：Pro Gly Pro Pro Pro Gly Pro Pro)的新型人白细胞介素-11；该重组蛋白能在大肠杆菌中单独高效稳定表达，其生物活性与野生型人IL-11相当(比活性...
- 高基民唐佳许晓玲
- 文献传递
- 一株分泌抗2型猪链球菌表面蛋白Lmb单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其制备方法
- 本发明属于病原微生物免疫学检测技术领域，涉及一株分泌抗2型猪链球菌表面蛋白Lmb单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其制备方法。本发明分泌抗2型猪链球菌表面蛋白Lmb鼠源单克隆抗体细胞株是以纯化的2型猪链球菌05ZYH33的表面蛋...
- 潘秀珍高基民孙卫平王长军李先富
- 文献传递
- 绿脓杆菌外毒素A的研究进展被引量：3
- 1993年
- 绿脓杆菌外毒素A是通过受体介导的内化作用进入细胞内,并在内吞小泡内裂解成37和28KDa两片段,然后37KDa片段转位至胞浆内,最终通过对eEF-2(延伸因子-2)的ADP-核糖基化抑制细胞的蛋白质合成而导致细胞死亡。该毒素蛋白有三个主要结构功能区(domain):细胞结合功能区(Domain Ia)、转位功能区(Domain Ⅱ)和ADP-核糖基化活性区(Domain Ⅲ)。此外,与绿脓杆菌外毒素A相关的嵌合毒素和人工疫苗已展示出诱人的应用前景。
- 高基民汪美先刘新垣
- 关键词：绿脓杆菌外毒素A
- 靶向CS1的CAR-T细胞构建及其抗肿瘤活性的体外研究
- 2020年
- 文中利用基因工程方法构建包含4-1BB或ICOS的第二代Anti-CS1慢病毒表达载体,以及同时包含这两个共刺激因子的第三代Anti-CS1慢病毒表达载体,通过制备相应慢病毒感染人CD3^+T细胞,分别获得靶向CS1的第二代和第三代CAR-T细胞。研究结果表明:以ICOS为共刺激因子及以4-1BB为共刺激因子的第二代CAR-T抗肿瘤活性相似,且在效靶比为1︰1时,含ICOS共刺激因子比含4-1BB共刺激因子的第二代CAR-T细胞对IM9-lucgfp细胞的杀伤效力更高;在效靶比为1︰1、2︰1和5︰1时,第三代CAR-T细胞对IM9-lucgfp细胞的杀伤效力低于第二代;在效靶比为10︰1时,二代和三代CAR-T细胞对IM9-lucgfp细胞的杀伤效力都达到85%以上,显著高于对照组。综上所述,该研究成功构建了靶向CS1的第二代和第三代CAR-T细胞,其可高效杀伤高表达CS1的肿瘤细胞,且靶向CS1的第二代CAR-T细胞比第三代对肿瘤细胞的杀伤效力更强。
- 张伟光王春玲陶智博尹昌林高基民
- 关键词：多发性骨髓瘤4-1BB
- CFP10蛋白时间分辨荧光免疫分析法在结核性胸腔积液中的诊断价值
- 2018年
- 目的 对基于时间分辨荧光免疫分析技术(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)诊断结核性胸腔积液的新方法进行临床评价。方法 共收集191例疑似结核性胸腔积液标本。采用TRFIA检测胸腔积液标本中结核分枝杆菌培养滤液蛋白-10(CFP10),并与培养、涂片及T.SPOT.TB进行比较。结果 有效检测标本174例,其中100例临床综合诊断为结核性胸腔积液,74例诊断为非结核性胸腔积液。以临床综合诊断为金标准,CFP10蛋白时间分辨荧光免疫分析法(CFP10-TRFIA)检测结核性胸腔积液患者的敏感度为42%(42/100)高于细菌学方法(P<0.05),特异性为90.5%(67/74)优于T.SPOT.TB(P<0.05),阳性预测值为84%(42/50),阴性预测值为53.2%(66/124)。其中24例培养阳性患者中,CFP10-TRFIA共检测出24例。结论 CFP10-TRFIA可提高结核性胸腔积液的检出率,可作为结核性胸腔积液的快速诊断工具并为临床及时治疗提供参考。
- 邓岚兰陈海霞安军张洪涛刘静仪李卫民高基民
- 关键词：结核病胸腔积液时间分辨荧光免疫分析
- 苯并芘诱发的肺慢性炎症中免疫抑制微环境促进肺癌发生发展
- 我们新近研究表明：TNFα表达持续上调对苯并芘诱导的肺慢性炎症微环境的形成和维持、以及肺癌的发生发展不可或缺;苯并芘除直接作用于支气管上皮细胞导致其发生癌前病变/癌变外，还可促使肺慢性炎症组织内MDSC募集增加及其免疫抑...
- 周竹君宁春红吴海明宋焕芳吴燕青刘腕玉高基民
- 关键词：慢性炎症肿瘤坏死因子Α肺癌
- 2型猪链球菌天冬氨酸激酶的原核表达及抗原性检测被引量：1
- 2017年
- 目的原核表达2型猪链球菌(Streptococcus suis 2)天冬氨酸激酶(aspartokinase,AK)并检测其免疫原性。方法对S.suis 2中国强毒株05ZYH33的AK编码基因05SSU1811进行生物信息学分析并设计引物,通过PCR从05ZYH33基因组中扩增目的片段。将目的基因克隆入原核表达载体pET28a,转化E.coli BL21(DE3)后采用IPTG诱导表达目的蛋白,用His亲和层析柱纯化重组蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。用纯化的重组AK免疫BALB/c小鼠4次,采血,分离血清,采用间接ELISA检测抗体效价,并进行Western blot分析。结果构建的重组质粒在宿主菌中高效表达目的蛋白,His亲和层析柱纯化的重组蛋白,能与感染05ZYH33全菌的猪恢复期血清反应。ELISA检测重组AK免疫鼠血清抗体效价为1∶102 400,Western blot显示该抗血清能与重组蛋白反应。结论成功制备重组AK蛋白,该蛋白具有抗原性,为进一步研究AK在S.suis 2致病过程中的作用奠定了基础。
- 孙卫平吴倩倩范伟伟张剑李超龙王长军潘秀珍高基民
- 关键词：2型猪链球菌原核表达天冬氨酸激酶多克隆抗体
- 人宫颈癌组织中乳头瘤病毒第16型DNA的检测--斑点分子杂交法与体外基因放大法
- 高基民
- 关键词：宫颈癌组织乳头瘤病毒分子杂交法
- SA-IL-7融合蛋白的制备及其膀胱内灌注对小鼠表浅性膀胱癌的治疗效应被引量：2
- 2013年
- 目的:制备链亲和素标记的白介素7(streptavidin-tagged interleukin-7,SA-IL-7)融合蛋白,评价其对小鼠表浅性膀胱癌治疗的效果。方法:构建pET24a-SA-IL-7重组质粒,制备SA-IL-7融合蛋白。流式细胞术检测SA-IL-7融合蛋白与生物素化膀胱癌细胞MB49的结合,胸腺细胞增殖法检测SA-IL-7融合蛋白促进胸腺细胞增殖的生物学活性。应用小鼠表浅性膀胱癌模型评价膀胱内灌注SA-IL-7的治疗效果,观察小鼠生存期,免疫组化法检测各组小鼠肿瘤浸润CD8+T细胞。结果:成功制备的SA-IL-7融合蛋白可锚定于生物素化的MB49细胞表面,结合率达(96.6±1.3)%;同时能够促进胸腺细胞的增殖。SA-IL-7融合蛋白能够锚定于小鼠生物素化的膀胱黏膜表面7 d以上,而未生物素化的膀胱黏膜在始终未检测到IL-7的存在。在小鼠表浅型膀胱癌模型中,MB49细胞接种后的第80天,IL-7灌注治疗组90%小鼠死亡,而SA-IL-7组60%小鼠存活且未出现肿瘤(P<0.05);且SA-IL-7灌注治疗组小鼠肿瘤组织中浸润CD8+T细胞明显增多(P<0.01)。SA-IL-7治愈的15只表浅型膀胱癌模型小鼠中,11只能够抵抗膀胱内MB49细胞的第二次接种,而对照组15只小鼠仅1只幸存(P<0.01)。结论:SA-IL-7融合蛋白膀胱内灌注能够产生抗肿瘤免疫应答和明显的治疗效果,有可能成为免疫治疗浅表性膀胱癌的新方法。
- 张振贺利民马磊李金龙许晓玲高基民
- 关键词：白细胞介素7链亲和素融合蛋白表浅性膀胱癌
