沈姝
- 作品数：16 被引量：32H指数：2
- 供职机构：中国科学院武汉病毒研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金科技基础性工作专项传染病预防控制国家重点实验室基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 古尔图病毒重组截短糖蛋白基因的表达及抗体的制备
- 2020年
- 目的:原核表达古尔图病毒(Guertu virus,GTV)糖蛋白截短片段(Gn、Gn1、Gn2、Gn3、Gc1和Gc2),分别纯化Gn-His、Gc1-His和Gc2-His重组蛋白并制备其多克隆抗体。方法:采用RT-PCR的方法分别扩增得到GTV DXM毒株截短糖蛋白Gn、Gn1、Gn2、Gn3、Gc1和Gc2基因片段,并将其构建到原核表达载体pET-32a(+)中,继而转化到E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白质大小。经镍柱亲和层析纯化Gn-His、Gc1-His和Gc2-His重组蛋白,用GTV阳性羊血清通过Western blot法检测重组蛋白的抗原性。用纯化的蛋白质分别免疫新西兰白兔制备抗血清,ELISA法检测血清效价。将构建的真核表达载体pcDNA3.1-Gn和pcDNA3.1-Gc1/Gc2转染至哺乳动物Vero细胞,并用间接免疫荧光法评估前述制备的兔多克隆抗体的结合活性。最后用Western blot法检测血清与重组蛋白的特异性反应能力。结果:双酶切鉴定和测序结果表明pET-32a-Gn、pET-32a-Gn1/Gn2/Gn3、pET-32a-Gc1/Gc2、pcDNA3.1-Gn和pcDNA3.1-Gc1/Gc2重组表达载体构建正确,重组表达蛋白Gn-His、Gn1/Gn2/Gn3-His、Gc1/Gc2-His相对分子质量(Mr)大小分别约为63.4×103、37.1×103、31.9×103、30.8×103、40×103和54.4×103。重组表达蛋白能够被GTV阳性羊血清所识别;获得的抗GTV Gn、Gc1和Gc2兔多克隆抗体效价分别为1∶409600、1∶204800和1∶6400。间接免疫荧光检测和Western blot结果表明制备的多克隆抗体能够与真核表达产物或重组蛋白发生特异性反应。结论:重组GTV糖蛋白Gn-His、Gc1-His和Gc2-His得到了高效表达和纯化,具有较好的免疫性。制备的多克隆抗体效价高,特异性好。本研究结果为进一步开展GTV糖蛋白生物学功能及其检测方法和疫苗研究提供参考资料。
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- 关键词：糖蛋白原核表达真核表达
- 一种哈特兰病毒的单克隆抗体及其应用
- 本发明提供了一种哈特兰病毒的单克隆抗体及其应用，涉及到生物技术和病毒学领域，本发明筛选得到的单克隆抗体能够特异性识别哈特兰病毒的GP蛋白，且仅能特异性识别哈特兰病毒的空间表位，并且对哈特兰病毒具有特异性中和活性。本发明提...
- 付丽艳沈姝邓菲钱进吴晓丽王志英刘丹
- 一种古尔图病毒的单克隆抗体及其应用
- 本发明提供了一种古尔图病毒的单克隆抗体及其应用，涉及到生物技术和病毒学领域，本发明筛选得到的单克隆抗体能够广谱性识别和中和古尔图病毒、大别班达病毒和哈特兰病毒，对这3种病毒识别的半数有效浓度分别为1.477μg/mL、1...
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- 一种SFTSV嵌合型减毒株及其应用
- 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种SFTSV嵌合型减毒株，所述SFTSV嵌合型减毒株的S、M和L片段的核苷酸序列的GenBank序列号分别为KR698324、KR698337和KR698350，本发明还提供了上述SFT...
- 吴晓丽沈姝邓菲付丽艳朱琼钱进倪军
- 棉铃虫核多角体病毒膜融合蛋白N-糖基化修饰的突变和功能研究
- F蛋白是棉铃虫核多角体病毒(HearNPV)上最主要的囊膜糖蛋白。N-糖基化修饰对大多数糖蛋白的功能起着重要作用,而就杆状病毒而言,N-糖基化修饰对于F蛋白的功能扮演着何种角色,仍有待进一步研究。迄今为止,只有F亚
- 沈姝王曼丽李鑫李淑芬邓菲Just M.ValkIneke Braakman胡志红王华林
- 文献传递
- 一种抗SFTSV的中和性单克隆抗体及其应用
- 本发明涉及一种抗SFTSV的中和性单克隆抗体，其重链可变区包含三个CDR区，所述CDR区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示，轻链可变区包含三个CDR区，所述CDR...
- 邓菲沈姝张艳芳吴晓丽阿布力米提·莫明胡思婧王华林张涛
- 一种古尔图病毒核蛋白的单克隆抗体及其应用
- 本发明提供了一种古尔图病毒核蛋白的单克隆抗体及其应用，涉及到生物技术和病毒学领域，本发明筛选得到的单克隆抗体具有广谱性，可以识别古尔图病毒的核蛋白，尤其是可以识别古尔图病毒核蛋白中的6肽抗原表位，还可以交叉识别大别班达病...
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- 云南省西北地区家畜体表蜱类形态学与分子生物学鉴定被引量：1
- 2017年
- 目的调查云南省西北地区家畜体表蜱的种类及其种群遗传进化情况。方法采集家畜体表寄生的蜱虫,经形态学鉴定后,用PCR法扩增蜱样本的16S rDNA和ITS2基因片段,测序后进行序列分析。结果共采集成蜱样本1 275只,经形态学鉴定为1科3属4种,其中微小扇头蜱1 263只(占99.1%),卵形硬蜱7只(占0.6%),锐跗硬蜱4只(占0.3%),未知血蜱1只(占0.1%)。样品分子鉴定结果与形态学鉴定结果一致。16S rDNA序列分析显示,蜱P6与印度微小扇头蜱(EU918188)的相似性最高为99.8%,与中国云南微小扇头蜱(JX051062)的相似性99.4%;蜱P2与美国卵形硬蜱(U95900)的相似性最高为93.8%;蜱P1与日本锐跗硬蜱(AB105167)的相似性最高为95.9%;蜱P4与澳大利亚parva血蜱(JX573136)的相似性为90.5%,与中国云南长角血蜱(JX051064)的相似性为88.7%。ITS2序列分析显示,蜱P6与来自老挝(KC503276)、中国云南(KC203364)的微小扇头蜱的相似性均为99.9%;蜱P2与日本卵形硬蜱(D88857)的相似性最高为96.1%;蜱P1与日本锐跗硬蜱(AB605168)的相似性最高为95.3%;蜱P4与罗马尼亚Haemaphysalis parva血蜱(FN296282)的相似性最高为91.0%。结论云南地区家畜体表存在微小扇头蜱、卵形硬蜱、锐跗硬蜱和一种与parva血蜱相关的新型血蜱。
- 亚红祥沈姝苏正元邓菲张云智
- 关键词：PCR检测
- 一种抗SFTSV的中和性单克隆抗体及其应用
- 本发明涉及一种抗SFTSV的中和性单克隆抗体，其重链可变区包含三个CDR区，所述CDR区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示，轻链可变区包含三个CDR区，所述CDR...
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- 文献传递
- 棉铃虫核多角体病毒膜融合蛋白N-糖基化修饰的突变和功研究
- 沈姝王曼丽李淑芬侯典海李鑫邓菲Just M Valk胡志红王华林
