目的构建PRIM1基因的干扰慢病毒载体,供后续深入研究PRIM1基因在肿瘤形成中的机制。方法以PRIM1基因为模板,按照RNA序列设计原则,完成RNA干扰靶点设计后,构建RPIM1基因RNA干扰慢病毒成含干扰序列的单链DNA oligo,退火配对产生双链DNA;随后通过其两端酶切位点直接连入酶切后的慢病毒载体;将连接产物转入制备好的大肠杆菌感受态细胞,PCR鉴定阳性重组子,送测序验证,对测序结果比对正确的克隆进行质粒抽提。结果对RNA序列设计软件评估后选取的干扰靶点序列,经过退火配对得到具有带黏性末端的双链的DNA; Age I和EcoRI双酶切使GV115载体线性化;双链DNA oligo与线性化的载体连接的产物经PCR扩增后的序列与目标序列完全一致,获得测序结果正确的阳性克隆质粒。结论以PRIM1基因为模板,按照载体设计构建常规方法成功构建PRIM1干扰慢病毒载体。
目的:建立Pristane诱导的BALB/c小鼠系统性红斑狼疮(SLE)模型。方法:雌性BALB/c小鼠随机分成2组,模型组单次腹腔注射0.5 ml Pristane,对照组注射等量的0.9%氯化钠注射液,注射前及注射后每月ELISA法检测血清抗dsDNA抗体和抗Sm/RNP抗体含量,Albustix试纸法检测尿蛋白含量,每月定期观察小鼠症状和体征。6个月后处死全部小鼠后解剖,肉眼观察腹腔脏器组织病变,并取病变组织及肾脏做病理学检查,观察其组织病理变化(HE染色法)及肾脏免疫复合物(IC)沉积情况(直接荧光染色法)。结果:模型组小鼠造模2个月后,血清抗Sm/RNP抗体和抗dsDNA抗体开始出现,并逐月增高,与同期对照组小鼠比较,3～6个月时血清抗Sm/RNP抗体和4～6个月时血清抗dsDNA抗体均明显增高(P<0.01),且血清抗Sm/RNP抗体的增高较抗dsDNA抗体更为显著;尿蛋白(≥+)于造模后3个月时开始出现,6个月时显著高于对照组小鼠(P<0.01);3个月时模型组小鼠开始出现关节病变,6个月时其阳性率达55%,明显高于对照组小鼠(P=0.004)。6个月后处死动物,解剖发现模型组大多数小鼠腹腔可见多少不等的脂肪肉芽肿结节;肾脏病理检查>50%的模型组小鼠出现不同程度肾小球肾炎病变伴毛细血管壁大量IC沉积。对照组除1只小鼠在造模6个月时出现轻度蛋白尿(+)外,未见其他病变。结论:Pristane能成功诱发BALB/c小鼠SLE,且建立的SLE模型稳定可靠。
