毛建平
- 作品数：81 被引量：326H指数：10
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 小鼠淋巴细胞抗原CTLA-4的胞外肽段表达及纯化被引量：1
- 2010年
- 目的:真核细胞表达小鼠淋巴细胞抗原CTLA-4胞外段肽,研究表达肽段与抗原呈递细胞B7分子结合后减轻小鼠淋巴细胞刺激后的增殖抑制,从而启动T淋巴细胞进一步增殖。方法:从小鼠脾脏淋巴细胞获得总RNA,通过逆转录PCR扩增出CTLA-4全长基因,克隆并测序。依据胞外段序列和真核表达载体pcDNA3.1序列,合成引物扩增胞外片段,两者经内切核酸酶处理、连接构建重组表达pcDNA3.1载体,重组质粒经测序验证后,采用lipofectamine2000转染入小鼠肝癌细胞Hepa1-6,经G418筛选获得稳定表达细胞株。结果:获得小鼠CTLA-4胞外段真核表达载体和小鼠肝癌细胞Hepa1-6稳定表达转染细胞株,制备了CTLA-4胞外肽段,经His标签抗体和小鼠CTLA-4抗体Westernblot检测表达蛋白带均呈阳性。结论:获得CTLA-4胞外段肽,为进一步研究该肽的作用打下基础。
- 方静周颖李智慧达飞胡要磊毛建平
- 关键词：CTLA-4真核表达PCDNA3.1T淋巴细胞
- 致死剂量的γ线照射后小鼠胸腺淋巴细胞的凋亡规律及与bax、bcl-2和Bcl-X_L表达的关系被引量：15
- 2004年
- 目的 :观察致死剂量γ线照射后小鼠胸腺淋巴细胞凋亡特征及与Bax、Bcl 2和Bcl XL 蛋白和mRNA表达的关系 ,为急性重度以上放射病的治疗提供依据。方法 :清洁级C5 7小鼠 2 5 0只 ,随机分为 0、6、9、12、15和 2 0Gy 6个剂量组。经γ线全身 1次照射后 ,于照射后 1～ 2 8d和 3～ 12个月 ,活杀取胸腺和外周血 ,用原位末端标记 (TUNEL)和麦格 姬姆萨 (MGG)染色检测胸腺淋巴细胞的凋亡 ;用原位杂交和碱性磷酸酶免疫组化染色法 ,检测Bax、Bcl 2和Bcl XL mRNA和其蛋白的表达。结果 :(1)各剂量组小鼠外周血白细胞在照射后 6h ,出现一过性的升高 ,以后迅速下降。 6Gy照射后 7d降至最低 ,至照射后 2 8d基本恢复到正常水平。 (2 )不同剂量的γ线照射后 2 4h,胸腺淋巴细胞的凋亡率迅速升高 ;在 6～ 12Gy范围内与照射的剂量呈正比 ,≥ 15Gy照射后变化不明显。 (3) 6Gy照射后 2 4h,胸腺淋巴细胞的凋亡率达高峰 ,而后开始降低 ;但直至照射后 6个月和 12个月 ,凋亡率仍明显高于对照组。 (4 ) 6Gy照射后 3h ,胸腺淋巴细胞中Bax蛋白的表达即出现增加 ,至 2 4h达峰值 ,显示出时效关系 ;而Bcl 2蛋白于照射后 3h即明显下降 ,2 4h降至最低 ;Bcl XL 蛋白也在照射后 2 4h降至最低。bax和bcl 2mRNA的检测与蛋白水平的检测一致。结?
- 崔玉芳丁彦青徐菡姜竺君柳晓兰董波毛建平
- 关键词：胸腺凋亡BAXBCL-2
- mRNA结构靶点筛选新方法RASS的研究
- 尽管反义核酸、Ribozyme、DNA enzyme以及双链RNA干涉小分子与mRNA分子在一级结构上严格按Watson-Crick碱基匹配原则互补配对发挥作用,然而能有效结合发挥作用的却是那些接近mRNA分子高度折叠结...
- 毛建平
- 关键词：MRNA靶点反义核酸基因药物
- 文献传递
- mRNA靶点筛选方法研究进展被引量：18
- 2003年
- mRNA靶点筛选问题是反义核酸领域的一个难题。近年来出现了多种筛选mRNA上可接近位点以确定靶位点的方法 ,包括mRNA实测分析法和计算机模拟分析两大类。其中mRNA实测分析法又包括多种针对自然折叠mRNA的实验分析技术 ;即基因walk技术 ,RNaseH作图技术、寡核苷酸微阵列技术 ,酶作图法确定二级结构技术 ,核酶导向型随机RNA库位点筛选技术和随机寡核苷酸库结合逆转录位点筛选技术。这些方法在鉴定RNA可接近位点及反义核酸的设计方面均有重要作用。
- 王全会毛建平
- 关键词：MRNA反义核酸
- 寡核苷酸文库小片段序列的高效快速测定方法
- 本发明涉及生物学领域，发明了寡核苷酸文库小片段序列的连接测定方法：通过将文库小片段序列连接进行序列测定，达到1次序列测定反应可以获得10至30条左右文库小片段序列的目的，相当于发明前10至30次序列测定反应功效，其费用约...
- 毛建平王利红王全会柳晓兰
- 文献传递
- 龙脑液导致癌细胞凋亡的实验研究被引量：7
- 2013年
- 目的:在细胞培养下检验加入龙脑液诱导癌细胞凋亡的作用。方法:采用人鼻咽癌、肺鳞癌、肺腺癌,乳腺癌细胞和正常细胞株,保持细胞正常培养基浓度下,用不同浓度稀释的龙脑液培养细胞,培养不同时间用四唑盐(MTT)比色试验观察龙脑液对癌细胞增殖的影响,采用细胞涂片染色观察细胞死亡性质,在流式细胞仪分析其凋亡率和性质。结果:二倍稀释浓度的龙脑液能快速导致癌细胞凋亡,四倍稀释浓度的龙脑液培养,均有细胞凋亡发生,凋亡程度从高到底依次为肺鳞癌、肺上皮癌和鼻咽癌,正常细胞293T则只有基础水平的凋亡发生;在撤出龙脑液回到正常培养环境下正常细胞能较快恢复到正常生长状态,而癌细胞则在一定时间内继续发生凋亡。在形态学上出现胞膜起泡或出芽,染色质凝聚分裂、细胞质减少,细胞碎片化等。早期细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻明显导致细胞凋亡,也通过Caspases3凋亡通路变化而引起癌细胞凋亡。结论:龙脑对癌细胞有促凋亡作用。
- 李菲菲方静马琼付辉毛建平
- 关键词：肺鳞癌肺腺癌鼻咽癌凋亡
- 利用RNA干扰技术下调Lon基因表达的生物学效应研究
- 2006年
- 目的:通过构建Lon基因下调的哺乳动物细胞模型表达,观察Lon基因对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响,以探讨Lon蛋白的功能。方法:设计针对Lon蛋白酶的小干扰RNA(siRNA),构建pSi-lencer U6 2.1-Lon真核表达载体,用脂质体法转染人乳腺癌细胞MCF7,RT-PCR检测Lon基因下调的水平,通过采用高温、紫外线照射、顺铂处理,观察Lon基因下调后细胞敏感性的变化(MTT法)。结果:RT-PCR显示重组质粒pSilencer U6 2.1-Lon转染MCF7细胞,Lon基因明显下调,RT-PCR未见扩增目的带,细胞培养结果显示,细胞增殖能力明显减弱。紫外线照射和顺铂处理后的MTT结果显示,pSilencer U6 2.1-Lon转染的MCF7细胞,增殖能力明显下降,与空载体转染组(pSi-lencer U6 2.1)和未转染组相比有显著性差异(P<0.05)。加热应激试验显示,37,41,43℃处理后,RNA干扰转染组(pSilencer U6 2.1-Lon)与空载体转染组、未转染组相比有显著性差异(P<0.05)。而在45℃时,RNA干扰转染组、空载体转染组与未转染组之间均无显著性差异(P>0.05)。结论:RNAi能有效下调Lon蛋白的表达。Lon基因的下调可抑制乳腺癌细胞MCF7的增殖能力,诱导细胞凋亡,以及可增加MCF7对紫外线和顺铂处理的敏感性。
- 薛霞朱运峰毛建平
- 关键词：RNA干扰
- 类泛素家族SUMO-1和UBC9的克隆、融合表达及纯化被引量：2
- 2008年
- 目的:克隆类泛素化家族SUMO-1和UBC9基因,表达并纯化二者与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增SUMO-1和UBC9的编码序列,分别将其以正确相位与pGEX-KG载体中的GST编码序列融合,得到重组质粒pGST-SUMO-1和pGST-UBC9,分别转化大肠杆菌DH5α,表达融合蛋白GST-SUMO-1和GST-UBC9;用谷胱甘肽-Sepharose4B亲和纯化融合蛋白;用Western印迹检测融合蛋白的表达及纯化。结果:分别构建了SUMO-1和UBC9的融合表达载体;Western印迹检测表明,GST-SUMO-1和GST-UBC9融合蛋白获得表达;纯化得到了融合蛋白。结论:克隆、表达并纯化了SUMO-1和UBC9与GST的融合蛋白。
- 韦玮丁丽华张浩杨智洪崔家骏周岩李勤操毛建平叶棋浓
- 关键词：SUMO-1UBC9克隆融合蛋白
- 辐射免疫损伤和免疫重建的干预研究
- 免疫系统由中枢淋巴器官、外周淋巴器官组成，以免疫细胞和免疫分子为基础，它们对电离辐射等致伤因素高度敏感。免疫系统对电离辐射的反应有不同的特点，与剂量和剂量率相关。低剂量辐射对其刺激效应对揭示环境辐射对健康的影响有重要意义...
- 毛建平方静周颖崔玉芳
- 关键词：免疫损伤免疫重建淋巴细胞细胞增殖
- 文献传递
- 抗人GPA^N单克隆抗体的制备及鉴定
- 2000年
- 目的 制备抗GPA单克隆抗体以建立“GPA体细胞突变分析法”。方法 用O ,N型人红细胞 ,以及纯化人GPAN 免疫BALB/c小鼠 ,经杂交瘤技术制备 ,用细胞凝集、间接免疫荧光筛选 ,用ELISA、Westernblot、酶处理红细胞的间接免疫荧光标记鉴定。结果 获得抗GPAN 单克隆抗体 6A8杂交瘤细胞系。其单抗属lgG3亚类 ,λ型轻链 ,识别和结合GPAN 氨基端 1～ 8位决定位点 ,对糖链依赖。流式细胞分选结果显示 6A8特异结合二甲亚胺固定的人MN和N型红细胞。结论 对分析由于基因突变和糖基化变异所致N ,MN红细胞GPAN 突变有理论研究和应用价值。
- 毛建平董燕刘斌孙志贤
- 关键词：MN血型血型糖蛋白A红细胞单克隆抗体
