李文美
- 作品数：16 被引量：68H指数：4
- 供职机构：华南理工大学食品科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划广州市科技计划项目广东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程农业科学化学工程更多>>
- 沙丁胺醇多克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2013年
- 为了对沙丁胺醇进行酶联免疫吸附法(ELISA)测定,通过四种方法制备沙丁胺醇衍生物,分别将其与牛血清蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)偶联,制备人工完全抗原,采用紫外分光光度法测定蛋白质浓度并计算偶联比,用所制备的四种免疫原免疫新西兰白兔获得抗沙丁胺醇(SAL)抗体,每一种抗体都用四种包被抗原进行配对筛选,据此得到最佳的抗体-包被抗原的组合,对筛选出的抗体用正辛酸-硫酸铵法进行纯化,采用间接ELISA法测定多克隆抗体(pAb)的效价并进行特异性鉴定。结果表明:成功偶联了完全抗原,四种免疫原的偶联比分别为9:1、6:1、6:1、12:1,得到最佳的抗体-包被抗原的组合,筛选出的抗体效价达到1:64000,此抗体对克伦特罗和特布他林的交叉反应率分别为144%和169%,对其他类似物几乎没有交叉反应。本研究为沙丁胺醇、克伦特罗和特布他林多残留酶联免疫检测法的建立奠定了基础。
- 张赛许青华李文美何小维
- 关键词：沙丁胺醇人工抗原多克隆抗体
- 呋喃唑酮代谢物人工抗原的制备及鉴定被引量：3
- 2014年
- 在催化剂条件下,以碳酸二甲酯和乙醇肼为原料,四氢呋喃为溶剂,合成了高收率的呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ)。实验结果表明,得到的AOZ收率可达到82.7%,此时的最佳反应条件如下:催化剂用量12%,反应温度75℃,反应时间3h。随后对AOZ进行结构改造,得到AOZ半抗原衍生物,同时采用戊二醛法将AOZ及其半抗原衍生物与活化的卵血清蛋白(cOVA)和牛血清白蛋白(cBSA)交联,成功制备了免疫原和包被原;通过气相质谱联用仪(GC-MS)、元素分析、紫外分光光度计等手段对半抗原和完全抗原进行鉴定。GC-MS结果证明了AOZ的成功合成;元素分析数据表明,半抗原顺利合成;紫外扫描数据显示,半抗原与cOVA、cBSA偶联成功,免疫原I、免疫原Ⅱ的偶联比分别为16.74和24.05。
- 李静宇何小维李敏刘晓云李文美
- 关键词：呋喃唑酮半抗原人工抗原
- NT-proBNP特异性单克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2016年
- 旨在制备并鉴定抗人NT-pro BNP特异性单克隆抗体。采用重组NT-pro BNP蛋白免疫Balb/c小鼠,取血清效价高的脾细胞与SP2/0细胞融合,经HAT筛选和有限稀释法亚克隆,获得阳性杂交瘤细胞株,用动物体内诱生法制备腹水,用正辛酸-硫酸铵沉淀法将抗体纯化,并测定抗体的亚类、效价、特异性及相对亲和力。结果表明,获得4株能稳定分泌抗人NT-pro BNP单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,分别命名为1G12、1B2、3D5和2D11。抗体Ig亚类,1G12和1B2为Ig G2a型,2D11为Ig G1型,3D5为Ig G2b型;1G12,1B2和3D5的抗体效价达到106,而2D11的效价仅达104。特异性好,1G12、1B2、3D5和2D11四株抗体的亲和常数依次为9.32×1011、1.07×1012、2.31×1012和6.33×1010。成功制备了特异性抗人NT-pro BNP单克隆抗体。
- 刘鹏展黄绮玲何小维李文美张文琪张赛
- 关键词：NT-PROBNP单克隆抗体间接ELISA法
- 大肠杆菌表达包涵体蛋白体外复性研究进展被引量：13
- 2010年
- 包涵体形成是大肠杆菌表达重组蛋白常见的问题。因此,为获得大量的活性蛋白而对其包涵体进行复性的研究引起了人们极大兴趣。本文综述了近年来发展起来的低分子量添加物、反胶团、分子伴侣、层析复性等新的复性方法、复性检测方法和体外复性机制。
- 赵喜红何小维李文美杨连生王继华彭运平刘晓云
- 关键词：包涵体蛋白复性重组蛋白
- 沙丁胺醇药物残留酶联免疫检测法的建立及优化被引量：6
- 2013年
- 本试验通过优化ELISA工作条件,建立间接竞争ELISA检测沙丁胺醇(SAL)的方法。采用方阵滴定法确定包被抗原、抗体、酶标二抗的工作浓度;以上述试验条件为基础,以系列稀释的SAL标准溶液作为检测对象,绘制标准曲线,并最终确定优化的试验方案。方阵滴定法确定包被抗原工作浓度为1:2000,抗体工作浓度为1:4000,酶标二抗工作浓度为1:6000;从标准曲线可知,线性检测范围为0.5～20 ng/mL,IC50为2.33 ng/mL;最终优化的试验方案中酶标板为深圳金灿华有限公司的产品,包被液为0.05 mol/LpH 9.6的碳酸盐缓冲液,封闭液为1%BSA+PBST,标准品用复溶液配制,抗体稀释液为1号,酶标二抗稀释液为3号,显色时间为15 min。本研究建立了一种灵敏、特异、操作简单、适于大批量样品筛选的SAL检测方法,对其他药物残留免疫学快速检测产品的研制及应用也有一定的借鉴意义。
- 胡霏许青华李文美何小维
- 关键词：沙丁胺醇间接竞争ELISA
- 羟考酮及其代谢物的定性及定量分析方法研究被引量：2
- 2014年
- 目的獉獉:建立适用于药物滥用者尿中羟考酮及其代谢物的定性定量检测方法。方法獉獉:针对人体尿液样本,采用固相萃取法进行提取,经MSTFA试剂衍生后,用气相色谱-质谱仪在选择离子模式下检测样本中的羟考酮及其代谢物,同时通过同位素内标方法进行定量分析,从抗干扰性、精密度、回收率等方面进行验证定量检测的准确性。结果獉獉:方法中羟考酮的最低检出量分别为10 ng·mL-1;定量线性范围均为0.0-400.0 ng·mL-1,最低定量限为100ng·mL-1;在75.0 ng·mL-1、100.0 ng·mL-1、300.0 ng·mL-1浓度下的日间精密度分别为2.21%、3.30%、1.22%,日内精密度为1.83%、1.80%、1.40%;在100.0 ng·mL-1和200.0 ng·mL-1浓度下,羟考酮前处理回收率分别为102.78%和100.76%。去甲羟考酮的最低检出量为10.0 ng·mL-1;定量线性范围为0.0-400.0 ng·mL-1,最低定量限为100 ng·mL-1;在75.0 ng·mL-1、100.0 ng·mL-1、300.0 ng·mL-1的浓度下的日间精密度分别为3.08%、2.99%、1.20%,日内精密度为2.40%、0.74%、1.17%;在100.0 ng·mL-1和200.0 ng·mL-1浓度下,前处理回收率分别为96.41%h和95.82%。结论獉獉:本方法是一种准确、灵敏、特异性强的检测方法,可用于药物滥用人员尿中羟考酮及其代谢物的定性定量分析。
- 陈飞刘晓云李文美李文美唐时幸陈园园
- 关键词：羟考酮固相萃取气相色谱-质谱
- 犬C-反应蛋白荧光定量免疫层析检测方法的建立与应用被引量：3
- 2019年
- 试验开展了犬C-反应蛋白(C-CRP)荧光微球免疫层析定量方法的研究,旨在研制一种操作简易、灵敏度高,用于快速定量检测C-CRP荧光免疫层析试纸条。采用双抗体夹心法和荧光免疫层析技术,以羧基荧光微球标记的抗C-CRP单克隆抗体及羊抗鸡IgY为标记抗体,抗C-CRP单克隆抗体和鸡IgY分别作为检测线和质控线制备荧光免疫层析试纸条。结果显示,所制备C-CRP检测试纸条的检测范围为0.5～250mg/L,检测限为0.5mg/L,批内和批间变异系数(CV)分别为0.68%～6.94%和0.89%～8.79%,平均回收率为98.15%～101.19%,试剂与9种干扰物质无交叉反应。加速破坏稳定性试验表明试纸条可以常温放置24个月。临床样本测试发现,其与I-CHROMA试剂盒检测结果相关性良好(R2=0.995)。综上所述,该荧光免疫层析试纸条灵敏度、特异度较高,且操作简单、快速,可用于宠物犬临床检测。
- 康业王羽胡树昆吴培钿李文美何小维
- QuEChERS结合UPLC-M S/M S检测血液中苯丙胺类及其相关9种物质被引量：3
- 2020年
- 对QuEChERS前处理方法从提取、分离、净化等方面进行优化以减弱样本中的基质效应,提高灵敏度;使用提取试剂(含0.1%甲酸的乙腈:甲醇=70:30,V/V)进行提取,加入无水硫酸镁、硼酸钠、研磨珠进行提取分离,使用混合净化剂(十八烷基硅烷(C18):乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)=1:2,m/m)进行净化,UPLC-MS/MS测定,外标法定量。结果表明:在优化条件下,苯丙胺类及其相关9种物质的色谱峰分离良好,且各标准化合物的线性相关系数均大于0.991,检出限(LODs)为0.3~1.0 ng/mL,定量限(LOQs)均为2.5 ng/mL;血液添加标准品样本在低(20 ng/mL)、中(100 ng/mL)、高(400 ng/mL)3个浓度的加标回收率为80.1%~103.1%,精密度相对标准偏差(RSD)为1.5%~8.6%;临床4份检测样本中有3份检出苯丙胺类阳性,准确率为71.5%~99.1%。所建立的QuEChERS方法与UPLC-MS/MS结合的分析方法可应用于血液样本中苯丙胺类及其相关9种药物的同时检测分析。
- 刘洋何小维刘晓云王平陈金李文美
- 关键词：QUECHERSUPLC-MS/MS血液
- 金纳米粒子与抗体蛋白相互作用的光谱研究被引量：1
- 2014年
- 本文运用透射电镜(TEM)、Zeta电位测量、紫外-可见吸收光谱(UV-Vis)、荧光光谱以及衰减全反射傅立叶变换红外光谱(ATR-FTIR)等技术手段,研究了免疫球蛋白G(IgG)与金纳米粒子的相互作用。结果表明,所制备的金纳米粒子呈均一分散的球形,抗体蛋白能够与金纳米粒子形成稳定的复合物。内源荧光光谱表明金纳米粒子对抗体蛋白的内源荧光有显著的静态猝灭,猝灭常数KSV=4.25×109 L·mol-1,同时金纳米粒子与抗体蛋白间有较强的作用,结合常数K=1.95×1014,结合位点数n为1.49。外源荧光光谱表明金纳米粒子与抗体蛋白之间的作用力主要是疏水相互作用。ATR-FTIR分析抗体蛋白与金纳米粒子作用前后蛋白二级结构的变化,结果显示,抗体蛋白有序结构含量降低,构象朝着更加松散的状态变化。
- 张赛彭运平何小维李文美刘晓云
- 关键词：金纳米粒子抗体蛋白荧光光谱傅立叶变换红外光谱
- SARS-CoV抗原免疫鸡后卵黄抗体效价变化研究被引量：2
- 2006年
- 目的:了解SARS-CoV抗原免疫鸡后,卵黄抗体效价的变化。方法:卵黄1∶1 600倍稀释后ELISA方法测定抗体效价。结果:Cutoff为0.21±0.05,在首次免疫26-28 d后,抗体效价达到最高(1∶1 600稀释(A450=1.3),并且抗体持续高效价(A450>0.8)。随着免疫时间的延长,抗体效价降低;间隔一定时间加强免疫,抗体效价又回升达到高峰。结论:SARS-CoV抗原持续免疫鸡,卵黄抗体持续保持高效价。
- 何小维彭运平王继华李文美罗志刚
- 关键词：冠状病毒属抗体
