屈玉玲
- 作品数：15 被引量：35H指数：3
- 供职机构：宁夏医科大学总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金宁夏回族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- RNA干扰P115基因对胃癌细胞巨噬细胞移动抑制因子表达的抑制作用被引量：15
- 2011年
- 目的构建高尔基体转运蛋白P115基因shRNA表达载体,探讨P115基因沉默对胃癌细胞株BGC-823中巨噬细胞移动抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)表达的影响。方法设计4对针对P115基因的shRNA序列,构建重组表达质粒,转染高表达P115的胃癌细胞株BGC-823。RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学检测P115及MIF的mRNA和蛋白的表达。结果 4个P115基因shRNA质粒经单酶切和测序证实构建正确;转染BGC-823细胞后,均能抑制P115基因的表达,其中以pGPU6/GFP/Neo-shP115-2的沉默效果最好,其对P115基因mRNA表达的抑制率为75.07%,对P115蛋白表达的抑制率为70.97%;转染pGPU6/GFP/Neo-shP115-2后,MIF基因的mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论 P115基因沉默后,BGC-823细胞MIF的表达明显降低,提示P115可能参与调节胃癌细胞MIF的表达,P115基因可作为研究胃癌发生发展分子机理的新靶点。
- 邓玮易永芬文雪闫田静屈玉玲
- 关键词：胃肿瘤巨噬细胞移动抑制因子RNA干扰
- 脑胶质瘤中TERT启动子突变分析及预后研究被引量：1
- 2021年
- 目的研究弥漫性胶质瘤中端粒酶逆转录酶启动子区(TERTp)突变状态,探讨其对胶质瘤患者临床预后的影响。方法从88例胶质瘤石蜡标本提取基因组DNA,用Sanger测序法检测TERTp突变情况,分析在胶质瘤中突变率及与临床病理指标的相关性,运用Kaplan-Meier生存曲线分析TERTp状态与患者预后的相关性。结果TERT启动子区突变在脑胶质瘤中总发生率为63.6%(56/88),主要集中在少突胶质细胞瘤(61.6%)和胶质母细胞瘤(74.2%)中。TERTp突变率与胶质瘤WHO分级无明显相关性,TERTp突变型(TERTp-mut)胶质瘤患者术后生存时间低于野生型患者(P<0.05)。结论TERTp状态可作为胶质母细胞瘤患者预后指标,联合其他基因检测可能具有更精准的预后价值及治疗意义。
- 刘晓莉屈玉玲翟学锋杨治花
- 沉默高尔基体P115基因对胃癌细胞凋亡的影响
- 目的:探讨高尔基体囊泡转运蛋白P115表达抑制对胃癌细胞株凋亡的影响及其可能的相关机制。
方法:运用含shP115基因片段真核表达质粒转染胃癌BGC细胞,免疫荧光显微镜检测细胞转染率,western-blot及RT...
- 屈玉玲
- 关键词：高尔基体胃癌细胞凋亡转运蛋白P53蛋白细胞增殖活性
- 文献传递
- shRNA沉默P115基因对胃癌细胞增殖相关蛋白表达的影响及机制
- 2013年
- 目的探讨高尔基体囊泡转运蛋白(colgi-vesicular transport protein,P115)基因沉默对胃癌细胞株BGC-823中增殖相关因子细胞周期素D1(cyclinD1)、微小染色体维持缺陷蛋白2(mini chromosome maintenance protein 2,Mcm2)和增殖细胞核抗原(proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)表达的影响及其可能的机制。方法采用脂质体介导法将重组表达质粒P115-shRNA2(P115-shRNA2组)和阴性对照质粒shNC(阴性对照组)转染至高表达P115的胃癌细胞株BGC-823中,并设未转染组,经G418筛选出稳定转染细胞,实时定量PCR(Real-time PCR)法检测细胞中P115、巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)、cyclinD1、Mcm2和PCNA基因mRNA的转录水平;Western blot法检测细胞中P115、MIF、pERK1/2、cyclinD1、Mcm2和PCNA蛋白表达水平;免疫共沉淀法检测BGC-823细胞中P115与MIF间的相互作用;ELISA法检测细胞上清液中MIF的分泌水平。结果与未转染组和阴性对照组相比,P115-shRNA2组细胞中P115、MIF、cyclinD1、Mcm2和PCNA的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,ERK1/2的磷酸化水平明显下调,BGC-823细胞培养上清中MIF的含量明显降低;P115蛋白可在抗MIF的免疫沉淀物中检出,P115和MIF在BGC-823细胞中存在特异性的相互作用。结论 P115基因沉默下调胃癌细胞中cyclinD1、Mcm2和PCNA的表达,其分子机制可能与P115通过调控MIF的表达和分泌,进而启动下游的ERK1/2信号通路有关。P115可作为研究胃癌细胞增殖分子机制的新靶点。
- 邓玮易永芬屈玉玲闫田静文雪
- 关键词：短发夹RNA胃癌细胞周期素D1细胞增殖
- 人P115基因重组真核表达质粒的构建及其对肝癌细胞增殖的影响
- 2011年
- 目的构建人P115基因重组真核表达质粒,并探讨其过表达对人肝癌细胞HepG2增殖活性的影响。方法采用RT-PCR从HepG2细胞中扩增人P115基因,插入pEGFP-N1 Vector(+)载体,构建重组真核表达质粒pEGFP-N1 Vector(+)-USO1,将重组质粒转染至HepG2细胞,免疫荧光及流式细胞术检测转染效率;RT-PCR及Western blot检测转染细胞中P115基因及蛋白的表达;MTT法检测转染细胞的增殖活性、流式细胞术检测细胞周期变化。结果重组真核表达质粒pEGFP-N1 Vec-tor(+)-USO1经酶切鉴定及测序证明构建正确;重组质粒转染HepG2细胞的转染效率达84.83%;重组质粒转染的HepG2细胞中P115基因和蛋白的表达水平及细胞增殖活性均明显高于空载体转染和未转染的细胞;重组质粒转染的细胞G1/G2期比例明显减少,S期比例明显增加。结论已成功构建了人P115基因重组真核表达质粒,其在肝癌细胞中过表达P115可促进肝癌细胞增殖。
- 屈玉玲易永芬邓玮文雪闫田静
- 关键词：肝肿瘤真核细胞基因表达细胞增殖
- 胃癌组织和细胞中P115、MIF的表达及意义被引量：10
- 2011年
- 目的观察胃癌组织和细胞中高尔基体转运蛋白P115和MIF的表达情况,探讨其在胃癌发生、发展中的意义。方法用S-P、Western blot和RT-PCR法检测P115及MIF在正常胃黏膜和胃癌组织,3种细胞株(正常胃黏膜上皮GES-1,不同分化程度的胃癌细胞株MKN-28,BGC-823)中的蛋白和mRNA表达情况。结果 P115和MIF在胃癌组织中的阳性表达率分别为73.3%、80%,在正常胃黏膜中的阳性表达率分别为40%、46.7%,胃癌组织中P115和MIF的表达明显高于正常胃黏膜(P<0.01),且P115的表达和MIF的表达呈正相关(r=0.433,P=0.017);胃癌组织中P115、MIF的蛋白和mRNA表达水平明显高于正常胃黏膜组织(P<0.01)。免疫细胞化学,Western blot和RT-PCR结果显示:P115、MIF在胃癌细胞株MKN-28、BGC-823中的蛋白及mRNA表达水平明显高于正常胃黏膜上皮GES-1(P<0.01);且低分化胃癌细胞株BGC-823中P115和MIF的表达水平明显高于高分化胃癌细胞株MKN-28(P<0.05)。结论 P115和MIF的过表达,可能在胃癌的发生过程中起协同作用;对P115和MIF相互作用机制的深入探讨有可能使其成为研究胃癌发生、发展的分子机制的新靶点。
- 邓玮易永芬闫田静文雪屈玉玲
- 关键词：胃黏膜胃癌MIF
- 卵巢透明细胞癌中HNF-1β与OPN的相关性及临床意义被引量：1
- 2021年
- 目的探讨卵巢内膜异位症恶变为卵巢透明细胞癌(ovarian clear cell carcinoma, OCCC)中HNF-1β与OPN的相关性及临床意义。方法采用免疫组化EnVision两步法检测增生期子宫内膜、分泌期子宫内膜、卵巢内膜异位症、OCCC及卵巢子宫内膜样癌(ovarian endometrioid carcinoma, OEC)中HNF-1β和OPN的表达,并分析两者的相关性。结果 HNF-1β在增生期子宫内膜、卵巢内膜异位症及OCCC组的中~高阳性率分别为0(0/24)、84.6%(22/26)、100%(24/24),差异有统计学意义(Z=73.605,χ~2=69.370,P<0.05)。OPN在增生期子宫内膜、卵巢内膜异位症及OCCC组的中~高阳性率分别为0(0/24)、80.8%(21/26)、100%(24/24),差异有统计学意义(Z=77.886,χ~2=71.508,P<0.05)。Spearman相关分析显示,HNF-1β和OPN在增生期子宫内膜中的表达呈正相关(r_s=0.574,P<0.05),在分泌期子宫内膜中的表达呈正相关(r_s=0.881,P<0.05),在卵巢内膜异位症中的表达呈正相关(r_s=0.830,P<0.05),在OCCC中的表达呈正相关(r_s=0.674,P<0.05),而两者在OEC中的表达无显著相关性(r_s=-0.407,P>0.05)。结论 HNF-1β和OPN可能协同参与卵巢内膜异位症癌变为OCCC的过程,维持其生物学行为。阻断HNF-1β表达或与OPN的相互作用,有望成为OCCC新的治疗靶点。
- 屈玉玲王晶朱嘉晖刘晓莉翟学峰
- 关键词：卵巢肿瘤透明细胞癌OPN免疫组织化学
- 大鼠结直肠腺瘤—癌序列模型的APC蛋白表达及意义被引量：3
- 2014年
- 目的探讨SD大鼠结直肠"腺瘤—癌"序列模型不同病变阶段正常组织、腺瘤和癌变组织中结肠腺瘤性息肉病基因(adenomatous polyposis coli,APC)蛋白表达水平的变化。方法采用1,2-二甲基肼盐建立结直肠"腺瘤—癌"序列动物模型。按30mg·kg-1体质量,每周皮下注射1次,连续注射20周。造模完成后取同时存在正常、腺瘤和癌组织的30例SD大鼠结直肠组织标本,用免疫组化染色方法检测APC蛋白的表达水平。结果 APC阳性表达率在癌、腺瘤、正常组织中均不同(P<0.05);APC阳性率正常组高于腺瘤组和癌变组,腺瘤组高于癌变组(P<0.0125)。免疫染色结果显示,在腺瘤-癌序列进展过程中,阳性细胞数与染色强度逐渐下降。结论 SD大鼠"腺瘤—癌"序列动物模型中,APC蛋白在不同阶段表达水平不同,可作为预测结直肠癌发生的早期肿瘤标志物。
- 宋伟张曹李海杨银学屈玉玲
- 关键词：APC基因免疫组化
- 高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ和E-钙黏素在正常肝组织及肝癌组织中的表达及其意义被引量：2
- 2011年
- 目的探讨高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(GMⅡ)和E-钙黏素(E-cadherin)在正常肝组织及不同分化的肝癌组织中的表达及其意义。方法采用RT-PCR法检测GMⅡ和E-cadherin mRNA在正常肝组织、高分化及中低分化肝癌组织中的表达;免疫组化SP法及Western blot法检测GMⅡ和E-cadherin蛋白在3种肝组织中的表达,并对GMⅡ和E-cadherin的差异表达进行相关性分析。结果 RT-PCR及Western blot分析显示,GMⅡmRNA和蛋白在正常肝组织中表达水平最低,在中低分化肝癌组织中表达水平最高,在高分化肝癌组织中表达居中,E-cadherin的表达则相反,各组间表达差异均有统计学意义(P<0.05);免疫组化SP法检测显示,GMⅡ主要表达于正常肝组织及肝癌组织的胞浆,在正常肝组织、高分化及中低分化肝癌组织的表达阳性率分别为40%、64%和86%,E-cadherin在正常肝组织的胞膜、胞浆中均有表达,而在肝癌组织中则主要表达于胞浆,其表达阳性率分别为70%、33%和9%,各组间表达差异均有统计学意义(P<0.05);GMⅡ和E-cadherin表达的Pearson相关系数r值为-0.415,P值为0.01。结论 GMⅡ和E-cadherin在肝癌组织中的表达呈负相关,GMⅡ对肝癌的发生发展可能发挥一定的作用。
- 闫田静易永芬邓玮文雪屈玉玲
- 关键词：E-钙黏素肝肿瘤
- p115基因沉默对人胃癌BGC-823细胞迁移及侵袭能力的影响及其机制被引量：1
- 2012年
- 目的探讨高尔基体囊泡转运蛋白(Golgi-vesicular transport protein)p115基因沉默对人胃癌BGC-823细胞侵袭能力的影响及其机制。方法采用脂质体法将质粒pGPU6/GFP/Neo/p115(p115 shRNA)和阴性对照质粒(shNC)分别转染至BGC-823细胞中,并设空白对照组。转染后48 h,采用RT-PCR、Westernblot和细胞免疫荧光法检测各组细胞中p115基因及蛋白表达的变化,及其对巨噬细胞游走抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)、基质金属蛋白酶-2(Matrix metallopro-teinase-2,MMP-2)、MMP-9基因和蛋白表达的调节;细胞划痕及Transwell小室试验检测细胞迁移及侵袭能力的变化。结果p115 shRNA组细胞中p115、MIF、MMP-2、MMP-9在基因和蛋白水平的表达均较shNC组和空白对照组明显下降(P<0.01);p115shRNA组细胞的划痕愈合能力明显低于两个对照组(P<0.01);p115 shRNA组的穿膜细胞数明显低于两个对照组(P<0.01)。结论在BGC-823细胞中,抑制P115的表达后,可能通过下调MIF、MMP-2、MMP-9的表达,抑制肿瘤细胞的侵袭运动。
- 闫田静易永芬邓玮文雪屈玉玲
- 关键词：RNA干扰巨噬细胞游走抑制因子基质金属蛋白酶2基质金属蛋白酶9胃癌
