李松林
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中国医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：辽宁省科技厅基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人白细胞介素32γ基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的构建人白细胞介素32γ(IL-32γ)基因重组腺病毒载体,并检测其在HEK293细胞中的表达。方法从表达质粒pDONR223中扩增目的片段IL-32γ,定向克隆至穿梭载体pShuttle-GFP-CMV获得pShuttle-(ΔGFP)-IL-32γ,经I-CeuI+I-SceI双酶切处理后转移至腺病毒载体pAdxsi,得到Ad-IL-32γ进行PCR鉴定及滴度测定。将Ad-IL-32γ转染至人胚肾细胞HEK293中,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)确定Ad-IL-32γ的转染效率,并通过Western印迹检测目的基因IL-32γ的表达。结果目的片段IL-32γ转入穿梭载体后,酶切鉴定pShuttle-(ΔGFP)-IL-32γ正确。酶切穿梭载体将目的基因片段克隆至腺病毒载体pAdxsi得到Ad-IL-32γ病毒载体,酶切鉴定证实构建成功。Ad-IL-32γ病毒滴度为2×1010pfu/ml。转染HEK293细胞通过观察GFP判断转染效率,并通过Western印迹证实其在HEK293中的表达。结论成功构建IL-32γ重组腺病毒载体并证实其能在体外有效表达IL-32γ蛋白,为进一步基于Ad-IL-32γ的基因治疗研究奠定基础。
- 李松林朱妍妍李霏尹元琴
- 关键词：腺病毒基因治疗
- NK4基因重组慢病毒载体的构建及在肝癌细胞中的表达被引量：4
- 2011年
- 目的构建共表达人NK4基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组慢病毒载体,转染人高侵袭转移肝癌细胞LM3(HCCLM3),观察其转染效率及表达情况。方法采用DNA重组技术,将NK4基因克隆至带EGFP的慢病毒表达载体pLenti6.3-内部核糖体进入位点序列(IRES)-EGFP中,并用脂质体介导法将慢病毒包装系统和带NK4基因的质粒pLenti6.3-NK4-IRES-EGFP共转染293T细胞,包装慢病毒并测定滴度。以不同感染复数(MOI)的重组慢病毒感染293T细胞,筛选最适MOI,以最适MOI重组慢病毒感染HCCLM3细胞,观察转染效率。Western blot法测定细胞中NK4蛋白表达水平。结果成功构建共表达NK4基因和EGFP基因的慢病毒载体pLenti6.3-NK4-IRES-EGFP,并对其包装、纯化及浓缩后测定病毒滴度为1.08×108 TU/mL。重组慢病毒感染HCCLM3细胞筛选其最适MOI为7。转染后HCCLM3细胞中可见明显的NK4蛋白表达,而未转染细胞中无NK4蛋白的表达。结论成功构建了NK4基因的重组慢病毒载体,有效地转染HCCLM3细胞后可高表达NK4蛋白。
- 李霏李松林尹元琴
- 关键词：NK4慢病毒载体基因转染
- NK4基因转染对裸鼠肝癌移植瘤生长的影响
- 2012年
- 目的:构建稳定表达NK4的LM3肝癌细胞系,建立裸鼠肝癌模型,观察肿瘤生长情况,并探讨NK4抑制肿瘤可能的机制。方法:构建携带NK4基因的慢病毒载体pLenti6.3-NK4-IRES-EGFP,转染LM3细胞构建稳定表达NK4的细胞系,分组建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型。测量肿瘤瘤体的体积,重量,采用免疫组化等方法观察肿瘤微血管密度,瘤体中MMP-9的表达。结果:接种肝癌细胞28天后,NK4组裸鼠移植瘤体积为(1.28±0.25)cm3,明显小于对照组与空载体组(2.15±0.58)cm3和(2.06±0.51)cm3(P<0.01)。NK4组瘤重为(1.17±0.78)g,显著低于对照组和空载体组(3.69±1.92)g和(3.52±1.68)g(P<0.01)。NK4转染组的肿瘤血管密度为(10.25±3.85),显著低于对照组和空载体组(2 6.5 6±7.6 2)和(24.37±8.34)。NK4组瘤体中MMP-9表达明显减少。结论:转染NK4基因可以显著抑制裸鼠肝癌移植瘤的生长,其作用机制可能是通过抑制肿瘤内新生血管的形成和肿瘤细胞的侵袭。
- 李松林刘新莉李霏尹元琴
- 关键词：肝癌移植瘤NK4裸鼠基因转染
- 白细胞介素-32研究进展被引量：1
- 2012年
- 白细胞介素-32（IL-32）是新近发现的一种细胞因子，体内外研究证明，它能通过抑制核转录因子-κB（NF—κB）、信号传导及转录激活因子3等通路抑制结肠癌及黑素瘤细胞的生长，促进其凋亡。此外，在慢性髓细胞性白血病、肉瘤、前列腺癌中能够通过不同的途径抑制肿瘤生长。
- 李松林尹元琴
- 关键词：转录因子死亡受体
- NK4基因转染对人乳腺癌细胞MDA-MB-231生物学特性的影响被引量：1
- 2013年
- 目的通过在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中转染携带有NK4基因的慢病毒载体,研究NK4对乳腺癌细胞的生物学特性影响及其作用机制。方法将NK4重组慢病毒载体pLenti6.3-NK4-IRES-EGFP转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹法(Western blot)检测转染细胞中NK4的基因和蛋白表达,检测在肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)存在的条件下磷酸化c-met受体(p-met)的表达。采用MTT、Transwell小室检测转染NK4基因对乳腺癌细胞的生长、侵袭的影响。结果转染NK4基因的乳腺癌细胞MDA-MB-231能够表达并分泌NK4,RT-PCR扩增出预期的453 bp片段,Western blot显示有50 kD的蛋白并且转染组与空载体组和对照组相比p-met的表达明显减弱。MTT结果显示转染NK4组细胞生长抑制率达(67±2.04)%,较其他两组抑制率高(P<0.01),Transwell结果显示转染NK4基因能够显著抑制由HGF诱导的乳腺癌细胞的侵袭(P<0.01)。结论 NK4通过竞争性抑制HGF诱导的乳腺癌细胞中c-met受体的磷酸化从而抑制了乳腺癌的生长、侵袭。
- 李松林李霏刘新莉尹元琴
- 关键词：NK4乳腺癌慢病毒载体
- 转染NK_4基因对HCCLM_3细胞生物学特性的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:根据肝细胞生长因子(HGF)在肝癌进展过程中的促进作用和NK4拮抗HGF效应,探讨NK4基因在高转移肝癌细胞中的表达及其对肿瘤细胞增殖,侵袭转移能力的影响。方法:构建pLenti6.3-NK4-IRES-EGFP慢病毒质粒载体,将载体转染至人高侵袭转移肝癌细胞HCCLM3(HCCLM3)中,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western-Blot)检测NK4的表达产物。MTT法测定细胞增殖情况。通过小室侵袭试验检测HCCLM3细胞的侵袭转移能力。结果:转染后的HCCLM3细胞可表达活性NK4蛋白;NK4可以抑制由HGF引起HCCLM3细胞的增殖作用(P<0.05),且可以抑制其侵袭转移能力(P<0.05)。结论:通过HGF途径NK4可抑制HCCLM3细胞的增殖和侵袭转移能力,提示其在肝癌抗转移治疗中可能有重要作用。
- 李霏李松林尹元琴
- 关键词：肝细胞生长因子
