徐春志
- 作品数：28 被引量：104H指数：7
- 供职机构：贵州大学动物科学学院动物疫病研究所更多>>
- 发文基金：教育部科学技术研究重点项目贵州省“十一五”农业科技攻关项目贵州省优秀科技教育人才省长资金项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 感染细胞与痘疹样本中山羊痘病毒PCR检测方法的建立被引量：2
- 2008年
- 比较Trizol法和SDS-蛋白酶K法提取山羊痘病毒DNA后,根据山羊痘病毒P32基因设计引物,建立了能检测感染细胞培养物与组织病料的PCR方法,结果显示以SDS-蛋白酶K法提取的病毒DNA在含量与纯度上均明显高于Trizol法;该PCR方法对山羊痘标准毒株细胞感染物能扩增出特异性的DNA条带,最小检出量为40.625ng;且能检出山羊痘疫苗毒Y株、贵州现场分离毒LD株和QL株的细胞感染物以及山羊痘疹样本中病毒DNA,而对鸡痘疫苗毒株感染细胞、正常细胞及正常山羊皮肤均为阴性反应。这些结果表明,建立的PCR方法具有特异性强、可靠性好、灵敏度高等特点,可用于山羊痘的临床诊断。
- 徐春志周碧君岳筠程振涛史开志鲍娟李永明文明
- 关键词：山羊痘病毒PCR
- 山羊痘病毒贵州分离株P32基因的克隆及序列分析被引量：4
- 2007年
- 程振涛岳筠徐春志李永明许乐仁周碧君文明
- 关键词：山羊痘病毒克隆载体分离株
- 山羊痘病毒P32基因重组表达载体的构建及原核表达被引量：2
- 2007年
- 以含山羊痘病毒贵州LD株P32基因的质粒pMD18-T-P32/LD为模板,应用PCR方法扩增P32基因,将该基因片段克隆至原核表达载体pET-28a,构建了重组表达载体pET-28a-P32/LD,转化大肠杆菌BL21(DE3)中并诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示,有分子量约为35.5 ku的融合蛋白获得表达,与预期结果相符;Western-Blotting证实该表达蛋白具有免疫学活性。P32蛋白的成功表达为山羊痘基因工程疫苗的研制及诊断方法的建立奠定了基础。
- 程振涛岳筠徐春志李永明许乐仁文明周碧君
- 关键词：山羊痘病毒P32基因原核表达
- 山羊痘病毒P32基因的克隆、测序及在原核细胞表达被引量：1
- 2008年
- 为比较山羊痘病毒贵州分离株P32基因与国内外分离株的关系,并获得P32蛋白,应用PCR方法从贵州山羊痘病毒分离株的核酸样本中扩增出P32基因片段,将PCR产物克隆至pMD18-T载体,对重组质粒进行了基因序列测定。将测定的P32基因核苷酸序列和推导的氨基酸序列与GenBank中相应序列作比较,同源性分别达到99.4%和98.4%,表明山羊痘病毒的P32基因具有高度保守性。将P32基因克隆至原核表达载体pET-28a,成功构建重组表达质粒pET-28a-P32/LD,转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。SDS-PAGE检测显示,重组细菌在35.5 kDa处表达一条特异性的蛋白带,而阴性对照未见这条蛋白带;Western-Blotting检测证实,这条蛋白带能与山羊痘高免血清反应而显示其免疫学活性。
- 程振涛岳筠徐春志李永明许乐仁文明周碧君
- 关键词：山羊痘病毒P32基因基因克隆原核表达
- 猪繁殖与呼吸综合征的血清学调查与病原核酸检测被引量：3
- 2008年
- 为了解贵州省猪群中猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的流行情况，并对l临床发生的疑似PRRS疫情作出确定性诊断，本试验采用PRRS酶联免疫诊断试剂盒对非免疫猪群和免疫猪群的1254头份血清样本进行抗体检测，采用RT—PCR方法对疑似病例样本进行鉴定。结果显示，非免疫健康猪群PRRS抗体阳性率为5．90％；发病猪群阳性率为29．16％；免疫猪群抗体阳性率为59．45％；利用针对PRRSVGP5基因的引物对疑似病例样本进行了PCR扩增，将所得序列与GenBank收录的7株PRRSVGP5基因的核苷酸及氨基酸序列比较分析，结果与欧洲株（Lv）的同源性分别为50．0％和46．7％，与美洲株（VR2332）的同源性分别为88．7％和89．9％，而与国内其它毒株的同源性为93．9％～99．1％和91．5％～99．5％；系统进化分析显示贵州分离株均为美洲型。PRRSVNsp2变异毒株特异性PCR诊断试剂盒鉴定结果显示，疑似病例样本均扩增出特异性条带，表明流行在贵州省猪群中的PRRSV毒株均为变异毒株。
- 岳筠周碧君程振涛徐春志周思旋史开志李永明韦忠梅
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征血清学调查RT-PCR
- 新城疫病毒检测技术研究进展被引量：4
- 2007年
- 新城疫是由新城疫病毒引起的一种急性、高度接触性禽类传染病。本病发病急,致死率高,是严重危害养禽业的重要疾病之一。本文从病毒的分离与鉴定、电镜技术、血清学方法以及分子生物学诊断技术4个方面介绍了新城疫病毒的检测技术,为今后兽医临床上检测新城疫病毒提供一定的参考。
- 刘宇徐春志岳筠陈红
- 关键词：新城疫病毒
- 山羊痘病毒ITR基因片段的克隆与序列分析被引量：1
- 2008年
- 应用PCR方法扩增山羊痘病毒QL、LD、Y和B株ITR基因片段,插入pMD18-T载体,转化DH5α感受态细胞,提取重组载体经PCR和酶切鉴定后测序,并与GenBank上8株羊痘病毒相应序列进行同源性分析。结果经PCR扩增,4株病毒均可得到一条均一的DNA片段,该片段可被内切酶AluⅠ特异酶切,而且该PCR的DNA模板最小检出量为24.40pg。经测序,该基因片段长度为289bp;序列比较发现,4株病毒ITR片段与GenBank上2株山羊痘病毒的核苷酸与氨基酸序列同源性均为100%,与3株绵羊痘病毒分别为98.2%和96.5%,与3株牛疙瘩皮肤病病毒为98.2%～99.3%和96.5%～97.7%。这表明ITR基因片段在羊痘病毒属中较为保守,可以针对ITR基因建立羊痘病毒的PCR检测方法。
- 王开功岳筠徐春志程振涛周思旋罗阿东周碧君许乐仁
- 关键词：山羊痘病毒PCR
- 山羊痘病毒P32基因的PCR-RFLP分析被引量：1
- 2008年
- 根据羊痘病毒基因组设计引物,建立了检测羊痘病毒P32基因的PCR方法,并扩增了疫苗毒株、标准毒株、贵州分离株的P32基因;应用生物学软件对山羊痘和绵羊痘病毒P32基因的酶切位点进行分析,选择合适的限制性内切酶对P32基因进行酶切。结果表明,以SDS-蛋白酶K法提取的病毒DNA在含量和纯度上均高于Trizol法,更有利于PCR扩增;所建立的PCR方法对细胞感染物及山羊痘疹样本均能扩增出特异性的目的DNA条带;软件分析选择限制性内切酶Hinf I对羊痘病毒P32基因的PCR产物进行酶切鉴定,可以有效区分山羊痘病毒和绵羊痘病毒。
- 岳筠周碧君程振涛徐春志王开功李永明
- 关键词：山羊痘病毒PCR方法P32基因
- 山羊痘荧光抗体检测与PCR方法的建立
- 为建立山羊痘直接荧光抗体试验,可对BHK-21感染细胞中的山羊痘病毒进行快速检测;建立针对山羊痘病毒P32基因的PCR检测方法,对临床上发生山羊痘病例进行诊断。建立针对ITR基因片段的PCR检测方法,可达到探索另一较P3...
- 周碧君徐春志岳筠程振涛文明王开功许乐仁
- 关键词：山羊痘荧光抗体PCR方法
- 文献传递
- 猪繁殖障碍疫病的三重PCR法鉴别诊断被引量：1
- 2007年
- 为建立一种简便、快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)3种病原的多重PCR方法,针对PRRSV N基因、PPV VP 2基因及PRV gp50基因分别合成了1对特异性引物,通过PCR均扩增出分子长377bp、445bp和217bp的DNA条带,与预期扩增片段相符。以3对引物同时对PRRSV、PPV和PRV疫苗株进行多重PCR扩增及反应条件的优化,同时扩增出3条特异性条带。利用所建立的多重PCR方法,对贵州省11个养猪场的40份疑似病料进行检测,结果显示,PRRSV、PPV和PRV的阳性检出率分别为62.5%、17.5%和0%。
- 周思旋周碧君岳筠徐春志鲍娟罗阿东史开志陈琼乖
- 关键词：猪蓝耳病细小病毒病伪狂犬病三重PCR
