廖晓丹
- 作品数：11 被引量：13H指数：2
- 供职机构：四川农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 携带猪传染性胃肠炎病毒S/N融合双基因的减毒沙门氏菌的构建与鉴定被引量：1
- 2012年
- 旨在构建携带猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S/N融合双基因的减毒沙门氏菌,并鉴定该疫苗菌株的生物学特性,为开展TGEV口服免疫研究奠定材料基础。采用PCR方法从克隆质粒19T-S和19T-N中分别扩增了TGEV的S基因(含主要抗原位点,2.1kb)和N基因(1.2kb),将S基因和N基因插入pVAX1载体,构建携带S/N融合双基因的真核表达质粒pVAX-S/N。将pVAX-S/N电转化减毒沙门氏菌SL7207,筛选获得重组菌株SL7207(pVAX-S/N),并对重组菌株SL7207(pVAX-S/N)的体外稳定性、目的基因在体内的转录、口服接种小鼠的安全性及在体内稳定性等特性进行了鉴定。结果表明,真核质粒pVAX-S/N构建成功,该质粒转染COS7中能表达2个目的蛋白,重组菌SL7207(pVAX-S/N)在Kan+抗性下体外培养稳定性好,口服接种小鼠3d可从回肠组织检测到目的基因的转录,以0.5×109、1×109和2×109 CFU口服对小鼠均具有安全性,重组菌在接种小鼠的肝、脾于4周左右逐渐被机体清除。结果表明成功构建TGEVS/N双基因疫苗SL7207(pVAX-S/N),该疫苗具有良好的稳定性与安全性等特点,为开展TGEV口服免疫研究奠定了基础。
- 黄小波李春松杨恒曹三杰文心田廖晓丹张鑫淼
- 关键词：减毒沙门氏菌猪传染性胃肠炎病毒生物学特性
- 减毒沙门氏菌递呈PEDV/TGEV双基因核酸疫苗研究
- 猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)主要引起猪的病毒性腹泻,这两种病原引起的腹泻对2周龄内新生仔猪危害尤为严重,可导致感染仔猪发生严重的腹泻、呕吐与脱水,死亡率高达100%,给养猪业造成严重的经济...
- 廖晓丹
- 关键词：口服免疫DNA疫苗
- 文献传递
- 猪传染性胃肠炎病毒S-N融合双基因疫苗的构建及其免疫原性分析被引量：4
- 2012年
- 为了构建TGEV S-N融合双基因疫苗并分析其免疫原性,从S、N基因克隆质粒中以PCR扩增了S基因(2.1kb,含A、B、C、D抗原位点)和N基因(1.2kb),将S基因插入pVAX1载体构建了pVAX-S质粒,再将N基因插入pVAX-S中S基因末端,构建了融合表达S、N双基因的重组质粒pVAX-S-N,将pVAX-S-N转染COS7细胞以免疫荧光试验进行S、N双基因的表达鉴定。用纯化的pVAX-S-N和作为对照的pVAX-S、pVAX1、PBS免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,分别测定免疫后第0、14、28、42天的小鼠血清IgG抗体,测定免疫后第42天小鼠外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)的数量。结果,融合质粒pVAX-S-N可在COS7细胞特异性表达S、N两个蛋白,pVAX-S-N免疫小鼠后第14天即可诱导产生抗TGEV的特异性IgG,但pVAX-S-N诱导的抗体水平一直低于pVAX-S诱导的抗体水平,在免疫后第42天差异极显著(P<0.01);pVAX-S-N可激发小鼠产生细胞免疫应答,但pVAX-S-N组的CD3+、CD4+、CD8+数量均低于pVAX-S免疫组。研究结果表明,融合双基因疫苗pVAX-S-N具有免疫原性,但免疫效果却不如单基因疫苗pVAX-S的理想。
- 黄小波杨恒曹三杰文心田李春松廖晓丹张鑫淼
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒DNA疫苗免疫原性
- 携带猪流行性腹泻病毒S基因的减毒沙门氏菌的构建与鉴定
- 本研究以RT-PCR扩增猪流行性腹泻病毒SC-L株的S基因抗原区域(简称S1,1-2367bp,编码S蛋白N末端1-789氨基酸位点),插入pMD19-T载体,酶切并回收目的片段插入双启动子真核表达载体pVAXD中,构建...
- 梁恩涛廖晓丹文心田黄小波曹三杰阳酉萍段素芬张丹张小会
- 关键词：猪流行性腹泻病毒检测减毒沙门氏菌
- 文献传递
- PPV VP2和PCV2 ORF2重组病毒样颗粒的获得及其免疫原性研究被引量：1
- 2010年
- 将PCV2 ORF2基因插入PPV VP2基因HindⅢ酶切位点(即PPV VLPs的N端1/3处)获得重组基因VP2.ORF2,并将其克隆到真核表达载体pEGFP-C1中得到重组质粒pEGFP-VP2.ORF2,经转染及电镜观察表明成功获得VP2.ORF2重组病毒样颗粒。重组病毒样颗粒经超速离心纯化后免疫小鼠,同时设立PPV普通疫苗、PCV2弱毒株及空白对照组,并在不同时期检测小鼠CD_3^+、CD_4^+、CD_8^+T淋巴细胞动态变化情况及PPV和PCV2抗体水平。结果显示:VP2.ORF2重组病毒样颗粒免疫小鼠后能诱导较高水平的细胞免疫和高于同等条件普通疫苗和弱毒株的体液免疫水平。此研究结果为进一步探索VP2.ORF2重组病毒样颗粒的形成机制提供了依据,也为PPV-PCV2二联疫苗的研发打下了基础。
- 徐志文蒋清蓉郭万柱朱玲胡秋炅陈扬廖晓丹
- 关键词：猪细小病毒
- 荣昌猪白细胞介素-2受体γ链基因克隆、表达与鉴定
- 2009年
- 运用RT-PCR技术从由刀豆蛋白(ConA)诱导培养的荣昌猪外周血单核淋巴细胞(PBMC)扩增出猪白细胞介素-2受体γ链基因的完整开放阅读框(ORF),长约1 107 bp,编码由368个氨基酸残基组成的相对分子质量为41 780的蛋白多肽。荣昌猪IL-2Rγ与人、猕猴、牛、犬、鼠在氨基酸水平上的同源性分别为81.6%,80.8%,85.1%,83.2%和68.8%。运用PCR技术从含荣昌猪IL-2Rγ开放阅读框序列质粒中扩增其成熟蛋白编码基因,共1 020 bp。将其定向克隆于原核表达载体pET-32a(+)后在E.coliBL21中诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达的融合蛋白约为52 000,重组蛋白以包涵体的形式表达,表达产物约占菌体总蛋白的37.6%;Western-blotting分析表明,在相对分子质量52 000处有一条特异性的带;对γ诱导重组菌进行转录检测得到约1 020 bp的特异性片段。
- 廖晓丹郭万柱吴翼余光勇蒋清蓉
- 关键词：克隆原核表达
- 荣昌猪白细胞介素-2受体γ链基因的克隆、表达及生物活性研究
- 根据已发表的猪白细胞介素-2受体γ链基因(porcineinterlukin-2receptorγchain)序列(Genbank登陆号：NM214083)设计合成特异性引物，以ConA诱导的荣昌猪外周血淋巴细胞总RNA...
- 廖晓丹
- 关键词：白细胞介素2生物活性基因序列原核表达
- 文献传递
- PEDV和TGEV双基因共表达载体pVAXD-PS1-TS的构建及体外表达被引量：1
- 2012年
- 采用RT-PCR扩增猪传染性肠胃炎病毒(TGEV)SC-H株S基因N端主要抗原位点片段(大小约为1 916bp)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)SC-L株S1基因(大小约为2 367bp),插入pMDl9-T simple载体,经酶切与测序鉴定后,构建重组质粒pMD19-T-TS与pMD19-T-PS1。从T载体上将PS1、TS基因切下,以亚克隆方法插入双启动子真核表达载体pVAXD,构建能同时表达TGEV S基因和PEDV S1基因的重组质粒pVAXD-PS1-TS。对重组质粒进行PCR与酶切鉴定后,以脂质体转染法转染COS7细胞,间接免疫荧光检测转染后细胞外源基因的表达情况。结果表明,重组质粒构建正确且能够在COS7细胞中得到表达,转染的细胞呈现特异性荧光。真核表达质粒pVAXD-PS1-TS的成功构建为进一步研究PEDV和TGEV的二联核酸疫苗奠定了基础。
- 廖晓丹曹三杰黄小波唐莹文心田
- 关键词：猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒S基因
- 一种预防仔猪病毒性腹泻的疫苗
- 本发明公开了包含SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示核苷酸序列的重组沙门氏菌在制备预防猪病毒性腹泻的药物中的用途，还公开了一种由包含SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示核苷酸序列的重组沙门氏菌...
- 黄小波文心田张小会曹三杰廖晓丹文翼平伍锐张雨迪张丹梁恩涛
- 文献传递
- 携带猪流行性腹泻病毒S基因的减毒鼠伤寒沙门菌的构建与鉴定被引量：5
- 2014年
- 为构建可有效抵抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)入侵的诱导黏膜免疫反应的核酸疫苗,采用RTPCR方法扩增了PEDV SC-L株的S基因主要抗原编码区域(简称S1),插入pMD19-T载体,构建载体pMD19-T-S1,再将S1基因片段插入双启动子真核表达载体pVAXD中,构建了pVAXD-S1表达载体。经免疫荧光法鉴定S1基因可在COS-7细胞中正常表达后,将pVAXD-S1电转入减毒鼠伤寒沙门菌SL7207中,构建了携带S1基因的重组减毒沙门菌SL7207(pVAXD-S1),并对该重组菌株的生长曲线、携带质粒的稳定性、口服小鼠的安全性及目的基因在体内转录等特性进行了鉴定。结果显示,SL7207(pVAXD-S1)在含卡那霉素(100μg/mL)的培养环境中稳定性良好,以每只1×109 CFU口服免疫BALB/c小鼠具有良好的安全性,携带的S1基因能在小鼠回肠末端组织内正常转录及表达。本研究为深入开展减毒沙门菌疫苗菌株SL7207(pVAXD-S1)的免疫评价及构建PEDV与其他抗原基因联合免疫DNA疫苗奠定了基础。
- 梁恩涛廖晓丹黄小波文心田曹三杰阳酉萍段素芬张丹张小会
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S基因
