孙朕
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
- 供职机构：河北农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项河北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- RNA聚合酶Ⅱ识别的启动子表达长dsRNA的RNAi载体的设计与构建
- 目前应用DNA载体介导的RNAi技术是向细胞内引入小干扰RNA(siRNA)简单、经济、有效、安全的方法。目前载体中常用的启动子类型主要有两大类:RNA聚合酶Ⅲ(PolⅢ)识别的启动子和RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)识别的启...
- 孙朕
- 关键词：核酶
- 文献传递
- 有效避免干扰素反应的RNA聚合酶Ⅱ启动子驱动表达长dsRNA的RNAi载体的设计、构建及初步验证
- 目的本研究欲使RNA聚合酶Ⅱ启动子表达的RNA停在细胞核内,为将来应用组织特异性RNA聚合酶Ⅱ启动子表达长dsRNA而有效避免干扰素反应生产组织和发育阶段特异性沉默特定不利基因的家畜品种奠定基础。方法以pCDNA3.1(...
- 孙朕樊宝良
- 关键词：核酶
- 文献传递
- 人IL-3、GM-CSF和Hly基因的cDNA克隆及测序
- 2011年
- 试验利用PCR技术扩增并获得了人IL-3、GM-CSF和人溶菌酶(human lysozyme,Hly)基因组基因编码区序列,人IL-3和GM-CSF基因PCR产物与pMD19-T连接,Hly基因PCR产物同pEASY-Blunt载体连接,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,蓝白斑筛选后经PCR及酶切鉴定,选取测序正确的克隆连接到pIRESneo载体中构建相关真核表达载体,分别用这些基因的表达载体转染PK15细胞,48 h后提取转染细胞的总RNA,并采用RT-PCR方法获得了人IL-3、GM-CSF和Hly基因的cDNA,结果发现,所获得的cDNA序列同NCBI登录的序列完全同源。
- 孙英民孙朕樊宝良
- 关键词：GM-CSF基因CDNA克隆测序
- 家禽血液基因组DNA的快速提取被引量：4
- 2010年
- [目的]建立一种应用硅胶膜提取禽血DNA的新方法。[方法]应用硅胶膜法和传统的酚/氯仿法提取抗凝禽血基因组DNA,设计合成了一对2.7 kb的鸡卵清蛋白基因的引物,检测这2种方法提取的基因组DNA模板对聚合酶链式反应(PCR)扩增效率的影响。[结果]用硅胶膜法提取的基因组DNA产量和质量均比传统的酚/氯仿法高,将该法提取的基因组DNA作为模板能够消除抗凝剂对后续PCR反应的影响。[结论]硅胶膜法为快速提取高质量的禽血基因组DNA奠定了基础。
- 孙朕孙英民郑素月樊宝良
- 关键词：聚合酶链式反应
- RNA聚合酶Ⅱ启动子驱动的长双链RNA干扰载体的构建与验证被引量：1
- 2013年
- 为了探索构建由RNA聚合酶Ⅱ型启动子驱动、能有效避免干扰素反应的表达长双链RNA的RNA干扰载体,试验在转录单元两端各添加了一个自剪切核酶序列,在转录后切成RNA出核所必要的5'帽子和3'polyA尾,以绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因插入2个核酶之间作为试验载体,以表达红色荧光蛋白基因的载体作转染效率校准,通过瞬间转染对荧光蛋白的表达情况进行观察和RT-PCR分析。结果表明:在转染效率基本一致的情况下,试验组未观察到绿色荧光;2个核酶能够完全自剪切,试验组细胞质中有EGFP mRNA的存在,但与正常对照组相比下降了46.1%。说明研究设计的载体达到了延迟表达RNA出核的目的,为用该载体表达长双链RNA时在其出核之前被Dicer酶有效切割成小双链RNA从而避免其出核引起干扰素反应提供了时间保障。
- 曹柯孙朕黄培华樊宝良
- 关键词：RNA干扰核酶
- 人IL-3、GM-CSF及溶菌酶基因cDNA的克隆
- 本研究旨在先从人的血液中直接提取基因组DNA，通过PCR扩增人的基因，再利用瞬时转染和RT PCR获得人cDNA序列的方法。这种方法的优势在于不但可以满足慢病毒载体携带外源DNA长度限制的需要，而且还可以避免采集人的相关...
- 孙英民孙朕樊宝良
- 关键词：GM-CSF基因溶菌酶基因
- 文献传递
