周景文
- 作品数：92 被引量：363H指数：11
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程理学更多>>
- 不透明红球菌转化合成α-酮异己酸的培养条件优化被引量：4
- 2011年
- 利用基于非完全平衡块原理的Plackett-Burman法和响应面法对不透明红球菌(Rhodococcus opacus DSM 43250)转化合成α-酮异己酸(KIC)的培养条件进行优化,以提高KIC的产量.首先采用Plackett-Burman(PB)设计对影响KIC产量的6个因素的效应进行评价,筛选出具有显著影响的关键因素——接种量、装液量和初始pH,然后通过最陡爬坡实验和Box-Behnken实验设计对关键因素的最佳水平范围进行研究,并利用SAS软件回归分析建立了二次多项式模型,通过模型求解确定最佳培养条件为:接种量6.93%,装液量33.38 mL,初始pH 7.6.在优化后的培养条件下,KIC的理论最高产量为31.08 mg/L,在验证实验中KIC最高产量为30.97 mg/L,比初始产量23.93 mg/L提高了29.42%,为进一步的发酵放大奠定了基础.
- 祝玉洪刘龙周景文房峻李江华堵国成陈坚
- 关键词：响应面法
- 普通生酮基古龙酸菌中山梨糖脱氢酶和山梨酮脱氢酶的纯化及酶学性质分析被引量：1
- 2017年
- 【目的】对源于普通生酮基古龙酸菌(Ketogulonicigenium vulgare WSH-001)的山梨糖脱氢酶(Sorbose dehydrogenase,SDH)和山梨酮脱氢酶(Sorbosone dehydrogenase,SNDH)的酶学性质进行分析。【方法】以K.vulgare WSH-001基因组DNA为模板,PCR扩增得到山梨糖脱氢酶基因(sdh)和山梨酮脱氢酶基因(sndh),构建重组表达质粒p ET28a-sdh、p ET28a-sndh,并分别转入大肠杆菌BL21(DE3)中。利用镍柱亲和层析和凝胶过滤层析得到纯化的SDH和SNDH。【结果】成功构建产SDH和SNDH的大肠杆菌BL21(DE3)并对目的酶进行纯化。SDS-PAGE分析结果表明,SDH和SNDH的大小分别为64 k Da和48 k Da,与理论预测值一致。显色法测得SDH酶活为3.15 U/mg,最适反应温度为30°C,最适反应pH为8.0左右;SNDH酶活为6.12 U/mg,最适反应温度为35°C,最适反应pH为8.0左右。在pH 3.0、4.0、5.0的偏酸性条件下,2个酶的酶活受到显著影响。【结论】表达并纯化了来源于普通生酮基古龙酸菌来源的SDH、SNDH,并进行了酶学性质分析,为利用SDH、SNDH实现维生素C前体2-酮基-L-古龙酸的一步法发酵生产提供了必要的参考。
- 高媛曾伟主周景文陈坚
- 关键词：氧化葡萄糖酸杆菌2-酮基-L-古龙酸山梨糖脱氢酶
- 水飞蓟来源黄酮3-羟化酶鉴定及黄杉素发酵优化被引量：2
- 2020年
- 黄杉素是一种重要的黄酮类化合物,具有抗炎症、抗氧化等功效,在医药及保健品行业有着广泛的应用。黄酮3-羟化酶(Flavanone 3-hydroxylase,F3H)可以催化圣草酚合成黄杉素等3位羟基化的黄酮类化合物。一直以来,由于黄酮3-羟化酶催化效率低,使得利用微生物法合成黄杉素等多种3位羟基化黄酮的产量较低。文中从水飞蓟转录组中鉴定得到一个黄酮3-羟化酶SmF3H。发酵验证结果表明,SmF3H具有黄酮3位羟基化功能,且催化效率显著高于常用的来源于番茄(Solanum lycopersicum)的SlF3H。选取6个转录强度不同的启动子优化从黄酮前体柚皮素到黄杉素的合成途径,发现PGAL7启动子起始转录SmF3H时黄杉素合成产量最高,在摇瓶中产量达到695.90 mg/L;在5-L发酵罐上进行发酵优化,以柚皮素为底物发酵得到3.54 g/L黄杉素,是目前可见报道的最高产量。
- 高松周景文周景文
- 关键词：黄酮柚皮素
- 细胞培养肉规模化生产工艺及反应器展望被引量：8
- 2020年
- 体外培养动物肌肉组织作为食用材料的构想在20世纪30年代就有了,90年代末还出现了相关的专利,但该技术到目前为止还没有大规模生产的例子。过去五、六年来,尤其是2013年世界首个细胞培养牛肉汉堡公开试吃活动以后,培养肉(Cultured meat)被大量报道。截至2019年3月,全世界已有超过25家公司宣布正在研究将培养肉推向市场,但仍没有一家企业能把产品放到普通消费者面前。这其中一部分限制因素是监管和社会伦理方面的争议,但更大的问题是生产成本居高不下。规模化生产是降低单位成本的有效手段,但目前业界对动物细胞大规模培养的传质、传热、混合、剪切应力等问题还缺乏足够关注。动物细胞培养传统上多用于量低价高的医疗、医药领域,提高产量的途径往往是多组体积不超过2?20m^3的设备并列运行,保持培养环境均一性问题不大。但人工培养动物肌肉细胞若作为大宗食品进入市场与传统养殖业进行有效竞争,所需的生物反应器规模和细胞密度还需在目前常用的动物细胞培养技术基础上提高至少一个数量级。因此,培养肉大规模培养工艺与设备的进步是使其成为替代性动物蛋白来源的前提条件。本工作对培养肉规模化生产能采用的反应器类型、操作模式、存在的主要问题及与反应器相关的研究方向进行探讨,为国内相关企业和科研机构提供参考。
- 李雪良张国强赵鑫锐孙秀兰周景文堵国成陈坚
- 关键词：生物反应器微载体传质
- 调控酿酒酵母类异戊二烯合成途径强化芳樟醇合成被引量：8
- 2013年
- 芳樟醇是一种重要单萜,广泛应用于食品、医药、日化等工业领域。然而芳樟醇在植物中含量低且难提取,限制了其大规模生产。目前通常以酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae作为单萜生物合成宿主,其内源类异戊二烯合成途径提供合成单萜物质的前体——香叶基二磷酸(GPP)。由于该途径代谢通量较低,导致GPP供应不足,极大地降低了异源单萜的合成效率。为了调节该途径的代谢通量,构建酿酒酵母整合表达载体pRS305-tHMG1和游离表达载体pYLIS-IDI1,并分别转入酿酒酵母CEN.PK2-1C中,获得酿酒酵母工程菌LS01和LS02。同时将载体pYLIS-IDI1转入酿酒酵母工程菌LS01中,构建酿酒酵母工程菌LS03。GC-MS检测结果显示,通过提高异戊二烯二磷酸异构酶(IDI1)和羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶活性区域(tHMG1)的表达水平,最终使芳樟醇产量提高1.3倍至(127.71±7.68)g/L。结果表明,通过调控类异戊二烯合成途径,强化GPP合成前体供给,可以显著提高酿酒酵母中芳樟醇的产量。
- 孙明雪刘继栋堵国成周景文陈坚
- 关键词：酿酒酵母芳樟醇
- 赖氨酸芽孢杆菌产氨基甲酸乙酯水解酶的发酵条件优化被引量：8
- 2017年
- 氨基甲酸乙酯是发酵酒精饮料及发酵食品中一种广泛存在的致癌物,酶法降解是解决氨基甲酸乙酯污染的重要途径之一。作者以一株来源于小鼠胃部具有水解氨基甲酸乙酯活性的菌株Lysinibacillus fusiformis SC02为出发菌株,通过摇瓶水平单因素实验对其产酶条件进行了优化。优化后的培养基组成为:半乳糖25 g/L,大豆蛋白胨20 g/L,尿素4 g/L,硫酸铜0.02 g/L,pH6.0。最佳产酶的发酵条件为:发酵温度37℃,接种体积分数3%,装液量20 m L/250 m L。在上述优化的培养基和培养条件下,产酶水平由900 U/L提高到4 500 U/L,提高了350%。在3 L发酵罐水平上初步探究了不同搅拌转速对菌株产酶的影响。当搅拌转速达到800 r/min,菌株最高酶活水平由4 500 U/L提高到7 066 U/L,提高了57%。
- 王伟高陈坚周景文
- 关键词：发酵条件优化芽孢杆菌发酵食品
- 基于系统生物学技术的维生素C高效发酵和流程重构
- 维生素C是一种重要的有机酸，广泛应用于制药、食品、饮料、化妆品和饲料等工业中。相对于“莱氏法”而言，生物技术法生产维生素C具有低成本、高品质等优势。本文介绍了维生素C生物合成过程的系统生物学相关研究，并给出了生物技术法将...
- 陈坚堵国成李江华周景文
- 关键词：维生素C生物合成发酵工艺生物技术
- 细菌脂肪氧合酶酶学性质分析及表达优化被引量：1
- 2020年
- 脂肪氧合酶(lipoxygenase,LOX)是一类含有非血红素铁的双加氧酶,在食品、医药和化工等行业具有广泛应用。利用Escherichia coli BL21(DE3)重组表达来源于Pseudomonas aeruginosa和Burkholderia thailandensis的脂肪氧合酶PaLOX、BtLOX,并对其酶学性质进行比较分析。通过对酶学性质分析发现:PaLOX、BtLOX的最适反应温度分别为25和35℃;最适反应pH分别为7.0和7.5。PaLOX的K_(cat)/K_m较BtLOX高16.7倍,展现出更好的开发应用潜力。为优化PaLOX的可溶性表达,采取了2种优化策略:首先利用乳糖作为诱导剂代替异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG),使胞内酶活力提高了1.53倍,可溶表达水平提高了2.41倍;进一步与触发因子(triggering factor,TF)融合表达,TF-PaLOX酶活力提高了1.85倍,可溶表达水平提高3.19倍。该研究通过分析细菌来源脂肪氧合酶酶学性质及优化表达条件,为脂肪氧合酶的高效生产及应用提供了重要参考。
- 庞翠萍刘松刘松张国强周景文
- 关键词：脂肪氧合酶酶学性质可溶表达
- 甘油替代葡萄糖作为碳源生产丙酮酸
- 2014年
- 光滑球拟酵母是重要的丙酮酸工业生产菌株,主要利用葡萄糖作为碳源生产丙酮酸。该研究以产量大且价格便宜的甘油部分替代葡萄糖并控制碳源组成为80 g/L葡萄糖和20 g/L甘油,摇瓶条件下发酵52 h,丙酮酸产量达到27.6 g/L,在7 L发酵罐上最终丙酮酸产量为61.7 g/L,与碳源为100 g/L葡萄糖的对照条件相比,几乎没有任何变化。由于碳源是培养基的主要成分,用甘油替代葡萄糖可以降低丙酮酸生产的原料成本,减轻由于大量生物柴油合成造成的甘油产能过剩问题。
- 徐沙吕永坤周景文
- 关键词：光滑球拟酵母甘油葡萄糖丙酮酸
- 大肠杆菌酪氨酸转运系统基因敲除对酪氨酸生产的影响被引量：5
- 2019年
- 酪氨酸是三大芳香族氨基酸之一,广泛用于食品、医药和化工等领域。转运系统工程为代谢工程改造大肠杆菌选育酪氨酸生产菌株提供了一种重要的研究策略。大肠杆菌中酪氨酸胞内转运主要通过aroP和tyrP基因编码的通透酶进行调控。以酪氨酸生产菌株HGXP为出发菌株,利用CRISPR-Cas9技术成功构建了aroP和tyrP基因敲除菌,并通过发酵试验考察了调节转运系统对酪氨酸生产的影响。发酵结果表明,aroP和tyrP基因敲除菌酪氨酸产量分别达到3.74 g/L和3.45 g/L,较出发菌株酪氨酸产量分别提高了19%和10%。对诱导温度进行了优化,结果表明38℃为最佳诱导温度。在3 L发酵罐上进行了补料分批发酵,aroP和tyrP基因敲除菌酪氨酸产量进一步提高至44.5 g/L和35.1 g/L,较出发菌株酪氨酸产量分别提高了57%和24%。研究结果对代谢工程强化大肠杆菌生产酪氨酸具有重要的参考价值。
- 王钦曾伟主周景文
- 关键词：大肠杆菌L-酪氨酸转运系统基因敲除
