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人CD137胞外区噬菌体展示系统的构建及鉴定: 2006年; 目的:以噬菌体展示具有天然结构的人CD137分子胞外区,检测其抗原性和生物活性,为以CD137为靶点体外筛选CD137拮抗性类肽药物奠定基础。方法:PCR方法从CIS质粒扩增人CD137胞外区,将其克隆入噬菌粒载体pComb3HSS,构建的重组载体电转入受体菌XL1Blue,并加辅助噬菌体VCSM13共感染,使CD137胞外区展示在噬菌体表面。采用ELISA法检测噬菌体展示CD137的抗原性,MTT法检测CD137噬菌体对抗CD137抗体刺激的人外周血淋巴细胞增殖作用的影响检测其生物活性。结果:成功构建表达人CD137分子胞外区的重组噬菌粒载体pComb3HCD137,并以噬菌体展示系统展示CD137分子胞外区。ELISA结果显示噬菌体展示CD137可与抗人CD137抗体特异性结合,证实CD137分子成功展示于噬菌体表面,且具有抗原性。体外生物活性实验显示,展示在噬菌体表面的CD137可抑制抗CD137抗体刺激的人外周血淋巴细胞增殖反应,证实噬菌体展示的CD137有与其配体结合的生物活性结构域。结论:利用噬菌体展示系统成功展示CD137胞外区,噬菌体展示CD137具有抗原性及生物活性。; 李娜张利宁王群刘成虎刘兴田; 关键词：噬菌体展示 CD137 抗原性生物活性

肝癌荷瘤小鼠调节性T细胞数量的改变及其与肿瘤生长的关系被引量：6: 2007年; 目的研究肝癌荷瘤小鼠调节性T细胞数量的改变及其与肿瘤生长的关系。方法采用小鼠肝癌细胞系H22接种BALB／c小鼠,建立肝癌模型;采用流式细胞术方法检测CD4^＋ CD25^＋T／CD4^＋T细胞的比例;以RT-PCR和流式细胞术检测Foxp3基因的表达。以免疫磁珠分选法纯化CD4^＋CD25^＋T和CD4^＋CD25^-T细胞;在体外,用3H-TdR掺入法检测T细胞的增殖情况;在体内,观察荷瘤小鼠来源的CD4^＋CD25^＋T细胞对肿瘤生长的作用。结果（1）荷瘤小鼠在引流淋巴结中,CD4^＋CD25^＋T细胞占CD4＋T细胞（18．80％±0．06％）比例增高,与对照组（9．50％±0．03％）相比,差异有统计学意义（P〈0．01）;在非引流淋巴结（LN）和脾脏（SP）中,荷瘤小鼠CD4^＋CD25^＋T／CD4^＋T比例分别为16．28％±0．02％和17．28％±0．06％,与对照组9．50％±0．03％和11．08％±0．04％相比,差异有统计学意义（P〈0．01,P〈0．05）;同时,调节性T细胞特异性标志Foxp3 mRNA的表达也升高。在同一只荷瘤小鼠中,引流淋巴结中CD4^＋CD25^＋T细胞数量（18．8％±0．06％）较对侧非引流淋巴结（16．28％±0．02％）略有升高,但差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）从荷瘤小鼠中纯化的CD4^＋CD25^＋T细胞,在体外对抗CD3单抗的刺激无反应,但能抑制CD4^＋CD25^-T细胞的增殖。（3）CD4^＋CD25^＋T／CD4＋T比例与肿瘤大小呈正相关,并且可以抑制CD4^＋CD25^-T细胞的抗肿瘤效应。结论肝癌细胞在小鼠体内的生长可以提高调节性T细胞的数量,其数量的高低与肿瘤的大小呈正相关,提示清除调节性T细胞将是肿瘤免疫治疗的策略之一。; 张蘋张利宁朱法良王群王晓燕李海艳刘春梅高飞刘成虎; 关键词：CD4^+CD25^+调节性T细胞 FOXP3

CD4+CD25+Foxp3+Treg对肿瘤生长的影响: 目的:Gershon于上世纪70年代曾提出了“抑制性T细胞”的概念。但是随后的一段时间,相关的研究在一直没有突破性的进展。直到90年代,CTLA4、GITR、CD45RA,尤其是CD25分子的发现,抑制性T细胞的研究开始...; 张蘋张利宁朱法良王群王晓燕郭春高立芬刘成虎刘春梅; 文献传递

NCPP抗肿瘤作用机理及其对免疫性肝损伤的保护作用: 第一部分树突状细胞在NCPP抗肿瘤中的作用目的短小棒状杆菌/(CP/)制剂是一种非特异性免疫增强剂。大量临床资料显示，CP制剂在治疗癌性胸水、局部注射治疗黑色素瘤、抗病...; 刘成虎; 关键词：树突状细胞 T细胞黑色素瘤刀豆蛋白A; 文献传递

从噬菌体随机肽库筛选CD137结合肽被引量：1: 2005年; 目的应用噬菌体随机七肽库筛选与人CD137特异结合的肽序列。方法以重组人CD137作为筛选分子,对噬菌体展示随机七肽库进行亲和淘选。经过5轮淘选后,共随机挑选23个噬菌斑并对其进行了扩增和测序,据此推导随机多肽的氨基酸序列。经夹心ELISA进一步鉴定噬菌体克隆与CD137的结合力。3H-TdR法检测了噬菌体展示多肽对抗CD137Ab刺激的人外周血淋巴细胞增殖反应影响。结果5轮淘选所得的噬菌体回收率逐步提高,显示淘选过程对随机肽库有一定的富集效果。通过对阳性克隆的测序和序列比较分析,得到RPTQGAF、RPTQVAL、RPTQVAF的相似序列和与CD137L具有同源SRS序列的SRSRVRY、HRRPSRS肽序列,ELISA结果显示这5个克隆都有良好的与CD137的结合力。RPTQGAF、RPTQVAL、RPTQVAF和SRSRVRY4个噬菌体展示肽均能在体外抑制抗CD137Ab刺激的淋巴细胞增殖反应。结论通过对噬菌体随机肽库的淘选,得到与CD137结合的相关多肽,为进一步研究CD137与配体结合的特异性位点及其拮抗性多肽药物设计提供了实验依据和结构基础。; 李娜张利宁王群刘成虎王晓燕; 关键词：CD137 噬菌体随机肽库

CD28噬菌体展示载体的构建及鉴定: 2006年; 目的:构建CD28分子胞外区噬菌体展示载体,并对其展示的CD28抗原性进行检测。方法:采用RT-PCR方法扩增CD28胞外区,将其重组于噬菌粒载体pComb3HSS,构建的重组载体与辅助噬菌体VCSM13共转染受体菌,使CD28胞外区展示在噬菌体表面。用ELISA和流式细胞仪检测展示在噬菌体上CD28的抗原性。结果:成功构建了CD28的重组噬菌体展示载体pComb3HSS-CD28。噬菌体展示的CD28可与抗CD28抗体结合,也可与JurkatT细胞表面的CD28竞争性结合抗CD28的抗体。结论:噬菌体展示的CD28具有抗原性。; 李娜张利宁刘成虎王群高飞; 关键词：细菌噬菌体逆转录聚合酶链反应

医疗器械生物学评价第16部分：降解产物与可沥滤物毒代动力学研究设计: 本文件规定了与医疗器械相关的设计和实施毒代动力学研究的原则。附录A描述了医疗器械生物学评价中毒代动力学研究中考虑的问题。本文件适用于医疗器械降解产物与可沥滤物的毒代动力学研究。; 范春光刘成虎侯丽张娜刘香东董秀丽

低剂量NCPP对Con A诱导肝损伤的保护作用及机理研究: 2006年; 目的:研究低剂量无细胞短棒状杆菌纳米级制剂(NCPP)对刀豆蛋白 A(Con A)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及机理。方法:BALB/c 小鼠腹腔注射 NCPP(0.01 mg·只)后第7 d 以 Con A(25μg·g^(-1))尾静脉注射诱导小鼠急性肝损伤模型。测定血清转氨酶(ALT/AST)及肝脏内的病理变化。同时设置 PBS 预处理对照组和 Con A 模型对照组,每组8只小鼠。用流式细胞仪检测肝脏内自然杀伤细胞(NK 细胞)的数量变化和 CD4~4T 淋巴细胞的活化情况。结果:与 Con A 模型组相比,NCPP 预处理组小鼠血清转氨酶明显降低[ALT 水平从(328±14)U·L^(-1)下降到(104±41)U·L^(-1),AST 水平从(141±9)U·L^(-1)下降到(98±17)U·L^(-1)],肝脏组织 HE 染色显示肝脏病理损伤明显减轻,同时流式细胞术的分析结果显示:与 Con A 模型组相比,小鼠肝脏 NK 细胞数量降低,且 CD4^+T 淋巴细胞的活化受到了明显抑制。结论:NCPP 对 Con A 诱导的小鼠急性肝损伤具有保护作用。其机理可能与抑制 CD4^+T 淋巴细胞活化和拮抗肝脏内 NK 细胞的回流有关。; 刘成虎高尚先张利宁李娜王群高立芬刘兴田张蘋高飞; 关键词：CD4^+T淋巴细胞 NK细胞血清转氨酶

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刘成虎

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