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何利华: 作品数：139 被引量：346H指数：10; 供职机构：中国疾病预防控制中心更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划国家科技重大专项更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学生物学轻工技术与工程更多>>

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一种基于胃液多重实时PCR检测的幽门螺杆菌(HP)个体化治疗辅助诊断方法: 本发明公开了一种基于胃液多重实时PCR检测的幽门螺杆菌（HP）个体化治疗辅助诊断方法。本发明所述方法能从10-500μl胃液标本中同时检测出HP的特异基因、HP克拉霉素耐药突变位点A2143G和A2142G、以及相应患者...; 张建中彭贤惠刘杰何利华赵飞闫笑梅张茂俊张慧芳; 文献传递

基于标本核酸的肺炎支原体基因分型荧光PCR方法的建立和应用: 2024年; 目的建立一种基于临床标本核酸的肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)核酸检测及基因分型方法。方法通过基因组学比对,选取Mp Genotype 1型和Genotype 2型菌株特异性靶序列设计合成引物和探针,建立Mp双荧光探针PCR检测分型方法,同时评价该方法的特异度、准确度、检测限和重复性。采用建立的荧光PCR方法对临床标本核酸进行检测,并与已报道的荧光PCR方法进行比对。结果对与Mp种属关系相近的其他种支原体以及常见呼吸道细菌、病毒等18种病原体的核酸进行检测,结果显示均无交叉反应;对90份Mp核酸的检测及分型的准确度为100%。该方法对于Genotype 1型和Genotype 2型Mp检测限均为1.0拷贝/μl的核酸样本,组内、组间重复性实验变异系数均小于2.5%。对88份临床标本核酸的检测中,与已报道的荧光PCR方法RepMp1体系的检测结果相比,Kappa值为0.675,P值为0.267,显示出高度的一致性。结论本研究所建立的Mp核酸检测及基因分型方法敏感度和特异度高,分型准确,可应用于各级省市疾控系统对Mp的监测与防控,促进Mp防控体系的完善,增强监测能力,对Mp的预警预测具有重要意义。; 张倚玮刘立雍何利华孟凡亮顾瑞雪龚杰李少丽赵飞; 关键词：肺炎支原体实时荧光PCR

球形孢子丝菌STR分子标记及其应用: 本发明涉及球形孢子丝菌STR分子标记及其应用。本发明首次提供一套球形孢子丝菌的微卫星位点(STR分子标记)组合，其中共包括25个高度多态的微卫星位点(SEQ ID NO:1‑25)。同时，提供了一套能够高效扩增球形孢子菌...; 龚杰李若瑜张建中何利华万喆; 文献传递

蛋白电泳凝胶放置时间对蛋白丰度的影响分析被引量：1: 2014年; 目的利用高分辨力的双向电泳技术检测蛋白电泳后凝胶中的蛋白含量随时间推移的损失情况。方法用双向电泳蛋白裂解液提取鼠疫EV菌株（无毒疫苗株）全菌蛋白并定量。取800肚gEV蛋白，平行进行两块双向电泳凝胶电泳，电泳结束后一块凝胶立刻固定并染色，另一块凝胶4℃放置8h后固定并染色，使用ImageMaster 2D Elite软件比较分析两块凝胶蛋白点数量及蛋白丰度。结果相比直接固定染色的凝胶，8h后固定染色的凝胶中蛋白点扩散丢失严重，比电泳后直接固定凝胶少346个蛋白点，且部分相邻蛋白点发生融合，含量在20～350ng的低丰度蛋白65．9％因蛋白扩散丢失。结论蛋白凝胶放置8h后大量低丰度蛋白由于扩散会丢失，并直接影响后续免疫印迹、质谱鉴定等实验结果的可靠性。; 顾一心何利华孟凡亮张建中赵飞; 关键词：蛋白电泳

幽门螺杆菌cagA基因PCR检测方法初探: 2001年; 目的　建立敏感性高的幽门螺杆菌菌株cagA基因PCR检测方法 ,为客观评价CagA在我国幽门螺杆菌感染致病中的作用提供基础。方法　通过分析比较GenBank中已知的cagA基因序列 ,设计了一对针对cagA基因保守序列、可扩增 2 97bp片段的PCR引物 ,用PCR方法检测幽门螺杆菌的cagA基因 ,与SDS PAGE检测CagA蛋白的结果进行比较。结果　PCR检测 82株国内幽门螺菌杆菌的cagA基因 ,77株为cagA阳性 ,阳性率为 93 .9% ,SDS PAGE显示包括所有PCR扩增阴性菌株在内的 74株幽门螺杆菌均表达CagA ,阳性率为 1 0 0 %。PCR检测cagA基因的敏感性为 93 .2 %。结论　建立了敏感性高的幽门螺杆菌cagA基因PCR检测方法。; 周建嫦张建中徐采朴何利华张茂俊盛涛郭浩岩; 关键词：幽门螺杆菌 CAGA基因 PCR

不同品系养殖鸡弯曲菌感染调查被引量：2: 2014年; 目的了解规模化养殖鸡弯曲菌感染现状。方法随机采集北京市某规模化养殖场蛋鸡(养殖时间大于120d)和肉鸡(养殖时间小于42d)肛拭子标本,采用两种分离培养方案(80份蛋鸡和200份肉鸡标本直接经选择性培养基划线培养,150份肉鸡标本经24h增菌后采用选择性培养基划线培养)进行弯曲菌的微需氧(5%O2、10%CO2和85%N2)培养。从肉鸡标本中随机选取50份,提取病原菌DNA,进行弯曲菌荧光定量PCR检测,并对相同培养条件下生长菌落进行质谱鉴定。结果 80份蛋鸡标本中分离到24株空肠弯曲菌,阳性率为30%;350份肉鸡标本未检测到弯曲菌。通过质谱菌落鉴定,205份标本检测到奇异变形杆菌,检出率为58.6%;145份标本检测到大肠埃希菌,检出率为41.4%。50份肉鸡粪便标本弯曲菌荧光定量PCR检测结果均为阴性,与分离培养结果一致。结论北京市规模化养殖蛋鸡弯曲菌感染率较高,饲养时间较短的肉鸡未发现弯曲菌感染。; 刘夏阳闫革彬顾一心张慧芳何利华肖迪刘红莹张建中张茂俊; 关键词：肉鸡弯曲菌荧光定量PCR

基于高分辨率溶解曲线分析鉴别食品中的3种李斯特氏菌被引量：4: 2020年; 本研究利用高分辨率熔解曲线的方法,以iap基因为靶标新设计一对引物同时鉴别单增李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌和英诺克李斯特氏菌,其余14种常见食源性病原微生物扩增为阴性结果,单增李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌的检出限为10个拷贝,英诺克李斯特氏菌的检测限为50个拷贝。本研究对78份样品进行HRM-realtimePCR法、GB4789.30-2016和SN/T1870-2016(荧光PCR法)的检测,并对3种方法的检测结果进行统计学分析。结果显示:HRM法和国标方法、HRM法和荧光PCR法的检测结果之间存在统计学差异,国标方法和荧光PCR法检测结果之间无统计学差异。本研究建立的基于HRM-real time PCR法检测3种李斯特氏菌的方法快速高效、特异性好、成本低,适用于食品中李斯特氏菌的日常检测和监管。; 岳苑周梦诗徐娟李睿何利华赵飞张建中龚杰; 关键词：高分辨率熔解曲线单核细胞增生李斯特氏菌食品

布鲁氏菌亲水性蛋白对电泳图谱成型影响的初步观察被引量：1: 1992年; 提取布鲁氏菌外膜蛋白的过程中发现在光滑型、粗糙型、非典型菌细胞中都存在着一组亲水性的小分子蛋白(MW<28kD),实验证明,这组小分子蛋白的存在是获得清晰,真切的布鲁氏菌外膜蛋白电泳图谱不可缺少的一个因素。推测小分子亲水性外膜蛋白参与了布鲁氏菌已被公认的三组外膜蛋白之间的相互作用。因此,它是外膜蛋白达到综合平衡的必要组成部分。; 马烨武素怀何利华尚德秋李兰玉; 关键词：布鲁氏菌外膜蛋白

吉兰-巴雷综合征相关空肠弯曲菌的蛋白质谱特征分析被引量：6: 2004年; 目的分析吉兰-巴雷综合征(GBS)相关空肠弯曲菌(Cj)与非GBS相关Cj的蛋白质谱特征。方法利用双向电泳对这两类Cj各8株菌的全菌蛋白进行分离,比较蛋白质谱之间的差异,并对差异蛋白进行基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF)分析。结果比较发现20个差异蛋白,质谱分析鉴定出17个蛋白质,包括wlaX蛋白,参与能量代谢的苹果酸脱氢酶、磷酸丙糖异构酶、镍-铁还原酶小亚单位、半胱氨酸合成酶及支链氨基酸氨基转移酶,参与细胞加工处理过程的热休克蛋白、铁吸收ABC转运系统周质铁结合蛋白、烷基过氧化氢还原酶以及与细胞表面结构有关的鞭毛蛋白、UDP-N-乙酰烯醇式丙酮酸葡萄糖胺还原酶等。结论 wlaX蛋白可能与致GBS相关脂多糖的独特结构合成或细菌的毒力有关,wlaX蛋白及鞭毛蛋白有可能为GBS相关Cj的特征蛋白。; 田新英张建中李春岩何利华刘瑞春尹焱邹清华赵哲; 关键词：吉兰-巴雷综合征空肠弯曲菌急性胃肠炎

幽门螺杆菌中国分离株vacA基因多态性分析被引量：3: 2011年; 目的分析幽门螺杆菌（HP）中国菌株vacA基因多态性。方法对分离自中国7个不同地区、不同胃十二指肠相关疾病患者的119株HP，采用特异引物聚合酶链反应（PCR）方法，对其vacA基因进行PCR扩增。根据核酸电泳中产物片段大小确定vacA等位基因类型并统计分析各型分布。对vacA基因核心片段进行PCR扩增和DNA测序，利用软件MEGA4．0对DNA测序结果进行聚类分析。结果119株HP的vacA基因以sla、m2和il型为主，分别为97．5％（116／119）、68．9％（82／119）和91．6％（109／119）。26．1％（31／119）为mlb；slb，mla未检出。vacA组合基因型以sla／m2／il为主（62．2％，74／119），sla／mlb／il次之（25．2％，30／119）。不同地区、不同疾病来源菌株sla分布的差异无统计学意义（P〉0．05）。而m区基因多态性在疾病类型及分离地区间差异有统计学意义（P〈0．01）。不同疾病来源菌株间i区基因分型分布的差异无统计学意义，但不同分离地区菌株间差异有统计学意义（P〈0．01）。119株的vacA基因序列聚类为三个不同组群。结论HP中国分离株vacA基因型以sla／m2／il组合型为主，sla分型结果与菌株分离地区及疾病类型无关。不同地区、不同疾病来源菌株m区基因分型不同。不同地区菌株vacA基因i区分型不同，但i区基因分型与菌株的疾病来源无显著相关性。; 傅见英姜葵张茂俊何利华张建中; 关键词：幽门螺杆菌分子流行病学

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