胡晓静 作品数:13 被引量:52 H指数:5 供职机构: 广西大学 更多>> 发文基金: 广西壮族自治区科技攻关计划 广西青年科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 经济管理 更多>>
猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲株与NSP2变异株二重PCR诊断方法的建立及应用 被引量:5 2009年 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型标准株VR2332保守序列与近年PRRSV自然变异株序列分析研究,设计合成了2对特异引物,分别扩增出225、427bp两条特异型基因片段,通过优化RT-PCR条件,建立了可同时检测PRRSV标准株和NSP2变异株的二重PCR诊断方法。应用该方法分别对广西不同地区的16份病、死猪的血液、肺等组织进行检测,结果15份PRRSV阳性,其中1份为标准株,14份为变异株。试验结果表明,PRRSV标准株与变异株二重PCR诊断方法具有高度特异性、敏感性和实用性,可用于临床诊断,为目前流行的猪高热病病原研究及广西PRRS的防制提供了一定科学依据。 何丹 龙剑明 傅薇 冯淑萍 胡晓静 付建 刘棋关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒 变异株 二重PCR Cloning and Prokaryotic Expression of VP1 Gene of Foot-and-Mouth Disease Virus (FMDV) Type O 被引量:2 2008年 According to the complete genome of foot-and-mouth disease virus(FMDV)type O,a pair of special primers was designed to amplify VP1 gene.The VP1 gene was amplified by RT-PCR and subsequently inserted into the expression vector pGEX-6p-1 and induced by IPTG.Then SDS-PAGE showed the expressed protein was 51 kD in molecular weight.Then the product was purified by GSTrap FF columns.The product was detected through Western-blot that showed the protein has antigenicity.It provided fundamental data and materials for further investigation on diagnosis method of FMDV. 付薇 陈磊 熊毅 潘琼 王常伟 陈进喜 胡晓静 刘棋关键词:VP1 CLONING 广西猪伪狂犬病毒感染状况调查报告 被引量:8 2008年 为了解广西猪伪狂犬病毒的感染状况,应用PCR技术对来自广西46个种猪场的1940份公猪精液进行了猪伪狂犬病毒(PRV)的检测,阳性率为0;同时对广西25个已使用猪伪狂犬病病毒gE基因缺失疫苗猪场的1455份送检血清,采用了猪伪狂犬病基因缺失鉴别ELISA方法进行了血清学抗体监测,结果检出猪伪狂犬gE抗体阳性11份,阳性率为0.76%。结果表明,广西猪群中存在猪伪狂犬病野毒感染,但感染率较低。 付薇 胡晓静 朱伟 潘杰 龙剑明 王常伟 刘棋关键词:PCR 猪FMDV的VP1结构蛋白特异性抗体间接ELISA的建立 2008年 以纯化的FMDV-VP1融合蛋白为抗原,建立了猪口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白间接ELISA检测方法。抗原包被浓度为10μg·mL-1时,血清最佳稀释度为1∶40,通过测定30份FMDV阴性血清,确定了该方法的阳性判定标准。结果表明,该方法特异性强,重复性好;对216份送检猪血清用ELISA检测,阳性检出率为31.5%,阴性检出率为68.5%,与HA符合率为96.2%,表明建立的VP1结构蛋白间接ELISA检测方法具有很好的特异性和敏感性。 陈磊 付薇 胡晓静 熊毅 潘琼 刘棋关键词:间接ELISA 鹅γ-干扰素表达及抗病毒活性的研究 鹅γ-干扰素(IFN-γ)是由激活的T细胞和NK细胞产生的一类细胞因子,它具有高效的抗病毒感染作用,作为生物药剂具有广阔的应用前景。本研究从培养的鹅外周血淋巴细胞总RNA中成功扩增到鹅IFN-γ基因,并将其克隆、测序,结... 胡晓静关键词:原核表达 抗病毒活性 文献传递 玻璃化冷冻水牛MII期卵母细胞的初步研究 被引量:6 2008年 为建立玻璃化冷冻保存水牛MⅡ期卵母细胞的有效程序,试验比较了3种冷冻保护剂组合(Ⅰ:20%乙二醇+20%二甲基亚砜;Ⅱ:25%乙二醇+25%二甲基亚砜;III:25%乙二醇+25%甘油)和3种玻璃化冷冻方法(毛细玻璃管法、铜环法及半麦管法)对水牛MⅡ期卵母细胞的毒性和冷冻效果的影响。结果表明,Ⅲ组的卵母细胞形态正常率显著低于Ⅰ和Ⅱ组(P<0.05),且III组的存活率也显著低于Ⅰ组(P<0.05),而Ⅰ和Ⅱ组的卵母细胞形态正常率和存活率没有显著差异(P>0.05)。进一步孤雌激活发现,Ⅰ组的卵裂率显著高于Ⅲ组(29.17±4.81%,5.56±11.11%,P<0.05),Ⅰ组的囊胚发育率显著高于Ⅱ和Ⅲ组(8.33±2.23%,2.43±2.87%,1.86±3.71%,P<0.05),然而Ⅱ和Ⅲ组间的卵裂率和囊胚发育率没有差别(P>0.05)。采用铜环法的回收率显著高于半麦管法(P<0.05),但和毛细玻璃管法之间差异不显著(P>0.05),冻后卵母细胞孤雌激活后的卵裂率和囊胚发育率差异不显著(P>0.05)。3种冷冻保护剂中Ⅰ组的细胞毒性作用最小,Ⅲ组的细胞毒性作用最大;铜环法和毛细玻璃管法能有效冷冻保存水牛的MⅡ期卵母细胞。 杨素芳 陈玉 胡晓静 冯贵雪 潘红平 石德顺关键词:水牛 冷冻保护剂 玻璃化冷冻 2株鹅细小病毒的主要结构蛋白VP2基因的克隆和序列分析 被引量:4 2008年 将鹅细小病毒PJ分离株和XJ分离株接种于13日龄非免疫鸭胚,收集接毒后24~72h死亡的鸭胚尿囊液。根据Genbank已发表的鹅细小病毒B株基因组核苷酸序列设计1对引物,对2株鹅细小病毒毒株主要结构蛋白VP2基因进行PCR扩增,将扩增产物与pMD18-T载体连接并测序。结果表明:PJ株和XJ株VP2的核苷酸序列全长分别为2 044bp和2 050bp,PJ株与B株、XJ株、台湾株的同源性均为93.5%~96.7%,与YG株、哈尔滨株、广东株的同源性为88.7%左右,与匈牙利株的同源性仅为80.7%,而与番鸭细小病毒的同源性为74.8%~80.7%。XJ株与匈牙利株的同源性为83.5%,与番鸭细小病毒的同源性为76.8%~80.0%,与其他毒株的同源性为91.6%~98.3%。 胡晓静 潘杰 陈进喜 付薇 徐贤坤 何丹 刘棋 熊毅关键词:鹅细小病毒 VP2基因 克隆 鹅副粘病毒病免疫程序探讨 被引量:3 2009年 研究先使用商品新城疫Ⅳ系弱毒苗对ND抗体检测为阴性的实验鹅进行首免和二免,再用鹅副粘病毒油乳剂灭活苗进行加强免疫。定期抽取血清用HI试验检测抗体滴度,并抽取部分有抗体滴度的鹅进行攻毒试验。结果表明:在一免后抗体滴度没有变化,而进行二免后,抗体滴度可达到3log2~4log2,加强免疫后达到10log2左右,且能抵抗强毒的攻击。 许瑞胜 潘杰 龙剑明 徐贤坤 胡晓静 冯淑萍 何丹 熊毅关键词:鹅副粘病毒病 免疫效果 免疫程序 O型口蹄疫病毒结构蛋白基因VP1的克隆与原核表达 被引量:14 2008年 [目的]为进一步研究口蹄疫病毒的诊断方法提供理论依据。[方法]根据GenBank上已公布的O型口蹄疫病毒核苷酸序列,设计合成1对特异性引物,通过RT-PCR扩增VP1基因,将其克隆至表达载体pGEX-6p-1中,经测序鉴定目的基因正确地整合至表达质粒中,用IPTG诱导重组基因表达。[结果]通过PCR扩增获得682 bp的目的片段,所克隆的VP1基因在原核细胞中成功表达,表达产物为融合蛋白,经SDS-PAGE鉴定分子量为51 kD,Western Blot结果表明融合蛋白具有免疫原性。[结论]获得了猪O型口蹄疫VP1融合蛋白,可作为包被抗原用于口蹄疫诊断试剂盒的研制。 付薇 陈磊 熊毅 潘琼 王常伟 陈进喜 胡晓静 刘棋关键词:口蹄疫病毒 VP1 克隆 广西鹅γ干扰素基因的克隆与序列分析 被引量:1 2010年 为进一步研究鹅干扰素(IFN)的分子生物学特性及抗病毒作用机理,提取经刀豆素(ConA)刺激培养的鹅外周血淋巴细胞总RNA,采用RT-PCR技术扩增获得鹅IFN-γ基因,将其克隆至pMD18-T载体并进行序列测定分析。结果表明,克隆获得的广西鹅IFN-γ基因与GenBank上已公布的鹅IFN-γ基因核苷酸序列的同源性均高于99.2%、氨基酸同源性均高于98.2%;与其他动物的IFN-γ基因核苷酸及氨基酸序列比较,亲缘关系越远,同源性越低。 胡丽萍 胡晓静 付薇 徐贤坤 何丹 刘棋 熊毅关键词:Γ干扰素 克隆