王晓华
- 作品数：4 被引量：8H指数：1
- 供职机构：河南省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家现代甘薯产业化技术体系建设项目辽宁省自然科学基金辽宁省教育厅资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 甘薯羽状斑驳病毒外壳蛋白基因的分子变异被引量：6
- 2012年
- 应用单链构象多态性(single-strand conformation polymorphism,SSCP)技术结合核苷酸序列测定的方法,对我国甘薯主产区11个省份的甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)外壳蛋白(CP)基因的分子变异情况进行了研究。结果表明,SPFMV CP基因的RT-PCR产物表现了较丰富的图谱类型,50个分离物共产生9种主要的SSCP带型;对显示不同带型的20个样品的CP基因进行了序列测定和进化树分析,CP基因核苷酸序列一致性为77.2%～99.9%。说明这些样品的SPFMV的CP基因存在较大的分子变异,可划分为EA、RC、O和C 4个株系。
- 王晓华张振臣乔奇秦艳红张德胜田雨婷
- 关键词：甘薯羽状斑驳病毒外壳蛋白基因分子变异
- 甘薯和巴西牵牛18S rRNA基因的克隆和序列分析被引量：1
- 2011年
- 【研究目的】为甘薯和侵染甘薯病毒的基因表达研究提供内参基因序列信息。【方法】分别以‘商薯19’、‘北京553’2个甘薯品种和巴西牵牛的基因组DNA为模板,利用PCR方法克隆甘薯和巴西牵牛18S rRNA基因序列。【结果】测序结果表明,获得的供试2甘薯品种和巴西牵牛的18S rRNA基因序列长度均为1630bp;序列比对结果表明,甘薯和巴西牵牛与裂叶牵牛、烟草等双子叶植物的18S rRNA基因相应序列的一致性均达98%以上,与单子叶植物Lilium superbum的18S rRNA基因序列也有较高的一致性。【结论】从2甘薯品种和巴西牵牛的基因组中克隆出了18S rRNA基因部分序列,研究结果不仅为利用18S rRNA基因作为内参基因分析甘薯和侵染甘薯病毒基因的表达研究提供了序列依据,而且可为甘薯和巴西牵牛的分子系统学研究提供序列参考。
- 王振东王晓华乔奇张德胜秦艳红田雨婷张振臣
- 关键词：甘薯RRNA基因克隆
- 植物病毒表达载体pClYVV/CP/W的构建及GFP表达的研究被引量：1
- 2009年
- [目的]研究植物病毒表达载体pC1YVV/CP/W的构建及用pC1YVV/CP/W表达绿色荧光蛋白(GFP),为植物反应器生产有用蛋白、开发有效的植物病毒载体提供参考。[方法]用三叶草黄脉病毒侵染性全长cDNA克隆pC1YVV基因组的Mb/CP基因之间的一段多克隆位点和两侧含有病毒蛋白酶NIa切割识别序列的多聚脱氧核糖核苷酸接头,构建pC1YVV/CP/W载体,并将绿色荧光蛋白基因插入pC1YVV/CP/W中构建pC1YVV/CP/W/GFP载体,用反转录PCR对重组病毒克隆转录情况进行检测,并用Western杂交对重组病毒克隆表达的目的基因产物进行测定。[结果]pC1YVV/CP/W/GFP接种的蚕豆幼苗表现出与野生型C1YVV相同的症状,发病率达100%,表明重组病毒克隆pClYVV/CP/W/GFP有侵染性,外源基因的插入没有破坏载体pClYVV/CP/W的开放阅读框;外源基因在F_4子代病毒基因组中稳定存在;重组病毒克隆pC1YVV/CP/W/GFP至少到F_4子代病毒能稳定表达GFP。[结论]该研究结果为用植物表达有用蛋白提供了有用的植物病毒载体。
- 王振东王晓华孟鹏秦会权郑新伟刘芳普薛立江张敏
- 植物病毒表达载体pClYVV/CP/W的构建及GFP表达(摘要)(英文)
- 2009年
- [目的]研究了植物病毒表达载体pClYVV/CP/W的构建及用pClYVV/CP/W表达绿色荧光蛋白(GFP),为植物反应器生产有用蛋白、开发有效的植物病毒载体提供参考。[方法]用三叶草黄脉病毒侵染性全长cDNA克隆pClYVV基因组的NIb/CP基因之间的一段多克隆位点和两侧含有病毒蛋白酶NIa切割识别序列的多聚脱氧核糖核苷酸接头,构建pClYVV/CP/W载体,并将绿色荧光蛋白基因插入pClYVV/CP/W中构建pClYVV/CP/W/GFP载体,用反转录PCR对重组病毒克隆转录情况进行检测,并用Western杂交对重组病毒克隆表达的目的基因产物进行测定。[结果]pClYVV/CP/W/GFP接种的蚕豆幼苗表现出与野生型ClYVV相同的症状,发病率达100%,表明重组病毒克隆pClYVV/CP/W/GFP有侵染性,外源基因的插入没有破坏载体pClYVV/CP/W的开放阅读框;以感染叶总RNA为模板,对pClYVV/CP/W/GFP表达GFP外源基因的稳定性进行了检测,从F0(重组病毒质粒最初转录出的病毒)一直检测到F4子代病毒。检测结果表明,外源基因在F4子代病毒基因组中稳定存在;以从感染叶中提取的总蛋白为抗原,以GFP抗体为第1抗体,以碱性磷酸酶标记抗体为第2抗体,用Western杂交对重组病毒克隆pCVYVV/CP/W/GFP表达外源蛋白进行了定性检测。从F0一直检测到F4子代病毒。检测结果表明,重组病毒克隆pClYVV/CP/W/GFP至少到F4子代病毒能稳定表达GFP。[结论]该研究结果为用植物表达有用蛋白提供了有用的植物病毒载体。
- 王振东王晓华孟鹏秦会权郑新伟刘芳普薛立江张敏
