庄增辉
- 作品数：10 被引量：68H指数：4
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 葡萄糖异构酶产生菌——玫瑰红链霉菌336质粒pSR336限制酶图谱的建立
- 1991年
- 开发新的克隆载体依然是链霉菌基因克隆的一项重要基础工作。我们首次从葡萄糖异构酶产生菌——玫瑰红链霉菌(Streptomyces roseoru-her)336中分离到质粒pSR336。
- 还连栋李彤董可宁庄增辉薛禹谷
- 关键词：质粒限制酶图谱
- 链霉菌和大肠杆菌穿梭质粒载体的构建被引量：2
- 1990年
- 本文报道了链霉菌和大肠杆菌穿梭质粒载体pSE-3的构建;把具有双启动子的大肠杆菌的质粒pGEM-3与新霉素抗性基因启动子缺失的链霉菌的探针质粒pIJ486分别用BamHI和BglⅡ酶切,T4 DNA连接酶连接后转化到E.coli HB101(Amp(?),Neo(?)),所得重组质粒能强启动pIJ486质粒上的氨基糖苷磷酸转移酶基因(aph),并使新霉素抗性基因在大肠杆菌中得到强表达。此重组质粒被命名为pSE-3,当其转化到变青链霉菌TK54(Tsr(?),Neo(?))的原生质体前,新霉素抗性基因亦能得到强表达。酶切结果表明,构建的具有两个启动子的穿梭质粒载体pSE-3上有HindⅢ和EcoRI的单酶位点,拷贝数约为39。经再转化和传代50代等研究表明,穿梭质粒载体pSE-3在链霉菌和大肠杆菌中均是稳定的。为某些有应用价值的目的基因在大肠杆菌和链霉菌中的克隆与表达提供了一个有价值的穿梭质粒载体。
- 谭华荣何松庄增辉薛禹谷
- 关键词：链霉菌大肠杆菌
- 玫瑰红链霉菌336质粒（pSR336）DNA的分离及特性研究被引量：2
- 1996年
- 从葡萄糖异构酶产生菌──玫瑰红链霉菌３３６中分离得到质粒ｐＳＲ３３６。经电泳检测和电镜观察证实，存在共价闭合超螺旋和开环两种分子构型，分子量约为６．３５ｋｂ，拷贝数约为１３０。采用高温（４０℃），吖啶橙、溴化乙锭和ＳＤＳ等物理、化学因素消除ｐＳＲ３３６，均未获得质粒消除株，表明ｐＳＲ３３６质粒是非常稳定的。用变铅青链霉菌ＴＫ２１作受体，进行平皿杂交以检测ｐＳＲ３３６的接合转移能力，未观察到麻点（ｐｏｃｋ）的形成。用ＨｉｎｄⅢ分别酶切ｐＳＲ３３６和ｐＩＪ４８６，连接得到一个嵌合质粒ｐＩＲ３０，检测玫瑰红链霉菌３３６（ｐＳＲ３３６）、变铅青链霉菌ＴＫ５４（ｐＩＲ３０）、变铅青链霉菌ＴＫ５４（ｐＩＪ４８６）及变铅青链霉菌ＴＫ５４这４株菌的葡萄糖异构酶活性及对硫链丝菌肽等２１种抗生素的抗性，结果表明ｐＳＲ３３６与葡萄糖异构酶的产生没有明显的联系；该质粒不含有硫链丝菌肽等１６种抗生素的抗性，是否含有庐山霉素、洋红霉素、莫能菌素、春雷霉素这４种抗生素和乳链菌肽的抗性尚需进一步加以确定。
- 还连栋董可宁谭华荣庄增辉薛禹谷
- 关键词：质粒DNA
- 乳链菌肽产生菌的定向筛选及发酵产物的鉴定被引量：33
- 1997年
- 利用乳链菌肽产生菌中nip^+nis^rsuc^+紧密连锁的原理,在添加乳链菌肽、蔗糖及溴甲酚紫的选择培养基上,从牛奶样品中定向筛选乳链菌肽产生菌。对筛选到的L. lactis1409菌株发酵产物的分析鉴定结果揭示:该产物对多种革兰氏阳性菌有强烈抑制作用,而对革兰氏阴性菌、酵母菌和霉菌无效,在pH值低的条件下对热稳定,对α—胰凝乳蛋白酶敏感,具有生物活性的蛋白质的分子量与乳链菌肽相当,而1409菌株的质粒分布与L. laclisATCC11454和L. lactis 7962不同,说明筛选到的L. laclis 1409菌株确是一株新的乳链菌肽产生菌。
- 还连栋陈秀珠庄增辉薛禹谷才迎
- 关键词：乳酸乳球菌乳链菌肽
- 变铅青链霉菌启动子的克隆和表达被引量：1
- 1991年
- 利用启动子探测质粒pIJ486(Tsr^(?) Neo^(?))将变铅青链霉菌(streptomyces lividans)TK24染色体DNA的BamHI酶切片段插入pIJ486的BamHI位点。获得4个硫链丝菌肽抗性、新霉素抗性的重组质粒。它们分别命名为pMGI(10.6kb)、pMG40(7.6kb)、pMG50(10.8kb)和pMG88(7.92kb)。BamHI酶切分析及再转化试验表明,新霉素抗性的恢复确实来自载体的外源插入序列。用BgⅢ酶切已将pMG40的插入序列缩小到0.78kb的pMG40-2,pMG50的插入序列缩小到2.2kb的pMG50-25,仍保留启动子活性。重组质粒pMG50-25的新霉素抗性水平高达90μg/ml(卡那霉素抗性水平为500μg/ml),表明这是一个活性很强的启动子。
- 还连栋董可宁庄增辉薛禹谷
- 关键词：启动子变铅青链霉菌克隆
- 链霉素生产菌——灰色链霉菌和热灰紫链霉菌的原生质体融合的研究被引量：1
- 1989年
- 本文采用原生质体融合技术,把链霉素生产菌——灰色链霉菌No. 45 Streptomyces griseus No. 45(Lin^r, Rif^s)同耐高温的不产生抗生素的热灰紫链霉菌T272 Streptomyces thermogriseoviolaceus T272(Lin^s, Rif^r)进行了原生质体融合。以抗性为选择标记,以PEG6000为助融剂;选出了融合体。制备超薄切片后在电镜下观察了原生质体融合的详细过程。在链霉素生物合成受抑制的高温(37℃)下,测定了融合体的抑菌活性;从形态上与两亲株不同的46株融合体中发现6.3%的融合体既有耐高温的特性也有抑菌的活性。
- 谭华荣庄增辉薛禹谷
- 关键词：链霉菌原生质体融合耐高温性
- 大肠杆菌葡萄糖异构酶基因在变铅青链霉菌中的克隆与表达被引量：5
- 1990年
- 本文用穿梭质粒载体pSE-3,进行了大肠杆菌葡萄糖异构酶基因在变铅青链霉菌中的克隆与表达。把含有1.6kb葡萄糖异构酶基因的pX1200(4.3kb)质粒与pGEM-3(2.9kb)质粒分别用EcoRI酶解,T4DNA连接酶连接,转化E.Coli HB101(Xy1^-,Neo(?)),得到的重组质粒被命名为pX1203(7.2kb);将pX1203与穿梭质粒载体pSE-3分别用HindⅢ酶解,T_4DNA连接酶连接,转化E.Coli HB101,在含有新霉素的木糖培养基上筛选到转化重组体,其重组质粒被命名为pSE×100(10.6kb);把pSE×100转化变铅青链霉菌TK54的原生质体,在硫链丝菌肽(50μg/ml)和新霉素(50μg/ml)的平皿上得到了重组体。经质粒提取,酶切分析,再转化和葡萄糖异构酶活性测定,结果表明,大肠杆菌的葡萄糖异构酶基因确实已在链霉菌中克隆和表达。
- 谭华荣何松庄增辉薛禹谷张其玖
- 关键词：基因克隆葡萄糖异构酶
- 乳酸乳球菌启动子-信号肽活性片段在大肠杆菌中的克隆和表达被引量：5
- 1997年
- 利用pGPB14为启动子-信号肽序列探测载体,在大肠杆菌中克隆乳酸乳球菌总DNA中具有启动子-信号肽功能的DNA片段。共得到42个具有红霉索、氨苄青霉素双重抗性的转化子。转化子的氨苄青霉素抗性水平在100～800μg/ml之间,β-内酰胺酶活力大多积累于周质空间,说明重组质粒中的外源插入片段确实具有发动转录和促进分泌的功能。Southern杂交结果表明,插入片段的确来源于乳酸乳球菌总DNA,其大小在80～400bp之间。DNA序列测定发现pSEQ8和pSEQ12中插入片段分属于pSEQ4和pSEQ17插入片段的一部分。在测序的4个DNA序列中都找到了启动子和起始密码子。其中2个含有典型的S.D.序列和非典型的信号肽序列,其他2个则没有发现典型的S.D.序列和信号肽序列。另外发现启动子上游序列对启动子转录起始的效率具有促进作用。
- 还连栋孙汉珍陈秀珠庄增辉薛禹谷
- 关键词：乳酸乳球菌启动子信号肽大肠杆菌基因克隆
- 乳链菌肽(NISIN)的杀菌作用机制被引量：23
- 1997年
- 还连栋贾士芳庄增辉薛禹谷
- 关键词：乳链菌肽天然食品防腐剂
- 天然食品防腐剂——乳链球菌肽概况
- 1991年
- 庄增辉
- 关键词：食品防腐剂乳链球菌肽
