孝飞飞
- 作品数：9 被引量：18H指数：3
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- RNA干扰Apollon基因逆转白血病K562细胞多药耐药被引量：4
- 2013年
- 背景与目的:Apollon基因在白血病等多种肿瘤内高表达。本试验通过构建高效干扰Apollon基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,探讨RNA干扰技术能否逆转人髓系白血病K562细胞多药耐药。方法:构建靶向Apollon基因真核表达载体pGPHI-GFP-Neo-Apollon,应用LipofectamineTM2000转染K562细胞,G418稳定筛选。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、细胞免疫荧光法分别检测重组载体稳定转染K562细胞后Apollon mRNA及蛋白的表达情况;四甲基偶氮唑盐(MTT)、流式细胞术检测细胞转染前后对长春新碱(leurocristine,VCR)、足叶乙苷(etoposide,VP16)的敏感性及凋亡率的变化。结果:成功构建了pGPHI-GFP-Neo-Apollon载体并在K562细胞内稳定表达的细胞克隆,经G418筛选后,重组载体能有效沉默Apollon的表达,Apollon mRNA及蛋白表达水平明显下降。MTT结果显示,基因干扰组细胞对VCR、VP16的敏感性明显增强,其半数抑制浓度(half-inhibitory,IC50)值分别为(0.144±0.018)mg/L、(17.336±3.571)mg/L,明显低于细胞对照组(P<0.05)。流式细胞术检测结果表明,基因干扰组细胞联合化疗药物后细胞凋亡率显著升高(P<0.05),而转染阴性对照组细胞凋亡率与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:pGPHI-GFP-Neo-Apollon载体能显著增强VCR和VP16对白血病K562细胞的诱导凋亡作用,提高K562细胞对化疗药物的敏感性,提示RNA干扰Apollon基因表达能一定程度逆转白血病细胞的多药耐药。
- 贾秀红孝飞飞李建厂
- 关键词：白血病RNA干扰多药耐药性K562细胞
- HOXB基因与白血病关系的研究进展
- 2012年
- HOXB基因是同源盒基因家族的成员之一，在造血调控中发挥重要的作用，其表达异常参与了白血病的发生，各亚型的差异性高表达影响白血病的进展及表型，还与白血病的治疗和预后密切相关，表达水平越高对治疗的反应越差，预后也较差。通过转基因、抑制P21、联合细胞因子或MS-5细胞株、全反式维甲酸等方法在基因水平进行研究，可为揭示白血病的发病机制及治疗和预后提供理论基础。
- 孝飞飞贾秀红
- 关键词：白血病同源盒基因
- siA pollon抑制P-gp逆转白血病细胞耐药机制的研究被引量：1
- 2020年
- 目的观察Apollon siRNA靶向沉默Apollon基因能否降低多药耐药(MDR)P糖蛋白(P-gp)表达,进而逆转K562/DNR多药耐药。方法将细胞分为实验组(脂质体转染靶向Apollon的siRNA K562/DNR)、细胞对照组(K562/DNR)和阴性对照组(脂质体转染的siRNAnc)。采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测三组细胞Apollon mRNA表达情况;采用Western Blotting法检测三组P-gp糖蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞转染前后对长春新碱(VCR)、柔红霉素(DNR)的敏感性。比较三组细胞Apollon mRNA表达情况、P-gp糖蛋白表达情况;分析细胞转染前后对VCR、DNR的敏感性。结果实验组Apollon mRNA的相对表达量为(24.233±0.108)%,低于细胞对照组的(90.031±0.182)%和阴性对照组的(83.686±0.076)%,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组P-gp糖蛋白表达水平低于细胞对照组及阴性对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组K562/DNR的VCR、DNR的IC50值明显高于细胞对照组和阴性对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组未加药、DNR、VCR的K562/DNR的凋亡率均显著高于细胞对照组的(37.120±0.309)%和阴性对照组的(36.316±0.193)%,差异具有统计学意义(P<0.05);K562/DNR对化疗药VCR和DNR敏感性明显增强。结论siApollon能显著抑制K562/DNR细胞增殖,且P-gp的表达明显降低,提高K562/DNR细胞对化疗药物的敏感性,促进K562/DNR的凋亡,提示RNA干扰Apollon基因表达能在很大程度上提高K562/DNR对化疗药物的敏感性。
- 孝飞飞孙洪光李建厂朱淑霞田春梅
- 关键词：多药耐药
- 乳腺癌细胞CD44^+CD24^-/low亚群化疗药物外排作用研究被引量：4
- 2020年
- 目的研究乳腺癌细胞CD44^+CD24^-/low细胞亚群对化疗药物的外排作用。方法培养多药耐药MCF-7/ADR细胞株,应用免疫磁珠法(MACS)分选CD44^+CD24^-/low亚群,流式细胞仪检测分选前后CD44^+CD24^-/low细胞比例,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测化疗药物敏感程度,激光共聚焦显微镜下观察胞内阿霉素蓄积,流式细胞仪检测P-糖蛋白(P-gp)表达水平。分析MACS分选CD44^+CD24^-/low亚群结果,分选前后CD44^+CD24^-/low细胞比例,CD44^+CD24^-/low亚群对化疗药物的敏感性,CD44^+CD24^-/low亚群胞内化疗药物蓄积,CD44^+CD24^-/low细胞亚群的P-gp表达水平。结果MACS分选前后分别计数细胞数量,被分选出来的CD44^+CD24^-/low细胞比例约为6%。MCF-7/ADR细胞中CD44^+CD24^-/low细胞比例为6.21%,与分选所得CD44^+CD24^-/low细胞比例相符。经流式细胞仪检测,分选所得CD44^+CD24^-/low亚群中CD44^+CD24^-/low细胞比例约为93.85%,达到进一步相关试验要求。CD44^+CD24^-/low亚群的半数杀伤浓度(IC50)为(17.37±0.46)mg/ml,MCF-7/ADR细胞的IC50为(15.84±0.66)mg/ml,比较差异具有统计学意义(P<0.05)。激光共聚焦显微镜下观察发现,MCF-7/ADR细胞及分选所得CD44^+CD24^-/low亚群均具有较强的药物外排作用,阿霉素多集中于细胞核膜表面内侧,在细胞核中心阿霉素蓄积较少。MCF-7/ADR细胞较CD44^+CD24^-/low亚群胞内蓄积更高浓度阿霉素,荧光强度分别为(571.67±11.15)和(518.67±11.93),比较差异有统计学意义(P<0.05)。CD44^+CD24^-/low细胞亚群P-gp表达荧光强度为(114906.70±2560.19),MCF-7/ADR细胞P-gp表达荧光强度为(101177.10±2171.86),比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论经MACS分选所得CD44^+CD24^-/low细胞亚群有更强的药物外排能力,高表达P-gp蛋白,可能是引起乳腺癌多药耐药的重要原因。
- 孙洪光孝飞飞贾中明王希龙张国强杨振林
- 关键词：乳腺癌肿瘤干细胞多药耐药免疫磁珠法化疗药物
- Apollon特异性siRNA序列的筛选及功能鉴定
- 2014年
- 目的 筛选干扰Apollon基因表达的siRNA序列并鉴定其功能.方法 采用化学方法合成针对Apollon基因不同位点的siRNA序列;应用Lipofectamine 2000转染人类乳腺癌MCF-7细胞;反转录PCR（RT-PCR）检测Apollon mRNA表达水平;细胞免疫荧光结合激光共聚焦技术定量分析Apollon蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝（MTT）和流式细胞术分别检测siRNA干扰Apollon后对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响.结果 合成的3对siRNA序列均能抑制Apollon mRNA表达,其siRNA1、siRNA2、siRNA3对ApollonmRNA的抑制率分别为（36.201±11.629）％、（67.308±7.686）％、（47.123±12.000）％,与对照组相比差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）;siRNA2转染MCF-7细胞后Apollon蛋白的荧光强度为（14.97±2.08）％,增殖抑制率达（73.361±2.118）％,凋亡率为（28.793±0.743）％.结论 筛选出的siRNA2序列可有效沉默Apollon基因的表达,显著抑制MCF-7细胞的增殖和促进其凋亡,为肿瘤靶向治疗提供实验依据.
- 孝飞飞贾秀红李建厂李有杰
- 关键词：肿瘤MCF-7细胞
- Apollon siRNA对慢性髓系白血病K562细胞株阿糖胞苷敏感性影响研究被引量：1
- 2014年
- 目的:研究小干扰RNA(RNAi)技术沉默凋亡抑制蛋白Apollon基因联合小剂量阿糖胞苷(Ara-C)对K562细胞化疗敏感性的影响。方法:构建pGPHI-GFP-Neo-Apollon真核表达载体,经阳离子脂质体转染K562细胞,实验分为RNAi组、阴性质粒组、细胞对照组、Ara-C组和RNAi+Ara-C组5组,采用RT-PCR和细胞免疫荧光检测干扰效果。RNAi与小剂量Ara-C单独和联合应用后,采用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:RT-PCR结果显示,实验组Apollon mRNA的相对表达量为(27.622±0.057)%,与细胞对照组(89.770±0.028)%和阴性对照组(84.868±0.057)%相比明显降低,差异有统计学意义,F=57.573,P=0.012。细胞免疫荧光检测结果显示,实验组细胞Apollon蛋白的荧光强度为(15.96±1.71)%,明显低于细胞对照组(35.36±2.90)%和阴性对照组(34.97±2.65)%,差异有统计学意义,F=71.063,P=0.013。重组载体和(或)10μg/mL Ara-C作用于K562细胞24、48和72h后,RNAi组和RNAi+Ara-C组K562细胞增殖抑制率(IR%)明显增高,随着作用时间的延长,抑制效果越明显。流式细胞术结果显示,RNAi+Ara-C组细胞凋亡率为(30.816±1.06)%,明显高于细胞对照组(4.803±0.112)%、阴性对照组(4.566±0.205)%和Ara-C组(11.61±0.604)%及RNAi组(20.226±0.986)%,差异有统计学意义,F=138.57,P<0.001。结论:靶向Apollon RNAi联合小剂量Ara-C能有效抑制K562细胞增殖并促进其凋亡,显著减少Ara-C使用剂量,明显提高了K562细胞对Ara-C的敏感性。
- 孝飞飞贾秀红李建厂
- 关键词：APOLLON阿糖胞苷K562细胞
- PBL联合CBL教学法在乳腺癌临床教学中的应用评价被引量：4
- 2023年
- 目的分析乳腺临床教学中联合应用以问题为基础的教学法(problem-based learning,PBL)、以案例为基础的教学法(case-based learning,CBL)的效果。方法选取2021年1月—2022年1月在滨州医学院附属医院乳腺外科实习的临床专业82名学生为研究对象,经随机抽签法分组,对照组采用传统教学法,观察组联用PBL、CBL教学法。汇总学生的两项教学成绩(理论考试、实践操作考试)、8项教学质量(课前预习、小组讨论、病例分析、问题探究、临床实践、临床思维、课堂氛围、学习兴趣)、教学满意度,并进行比较。结果观察组教学成绩、教学质量评分、教学满意度均高于对照组(P<0.05)。结论在乳腺癌临床教学中联用PBL、CBL教学法,学生的教学成绩和教学质量更高,满意度更好。
- 孙洪光贾中明王希龙张国强孝飞飞
- 关键词：乳腺癌临床教学教学成绩教学满意度
- Apollon siRNA联合川芎嗪对白血病细胞增殖及凋亡的影响被引量：3
- 2014年
- 目的观察Apollon siRNA靶向沉默Apollon基因联合川芎嗪(TMP)对人慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖及凋亡的影响。方法根据前期实验筛选出的干扰效果最佳的Apollon siRNA片段,构建pGPHIGFP-Neo-Apollon真核表达载体,并将构建成功的载体转染至K562细胞。将实验分为细胞对照组(未行任何处理)、阴性对照组(转染阴性质粒载体)和RNA干扰组(转染pGPHI-GFP-Neo-Apollon质粒载体),利用RT-PCR法和细胞免疫荧光法分别检测各组细胞Apollon mRNA及蛋白的表达情况;再于上述分组基础上新增TMP组(施加320μg/mL TMP)、TMP+阴性对照组和TMP+RNA干扰组,应用MTT法和流式细胞术分别检测各组K562细胞的增殖能力和细胞凋亡率。结果构建的pGPHI-GFP-Neo-Apollon载体能在K562细胞内稳定表达;RNA干扰组Apollon mRNA及其蛋白的相对表达水平明显低于细胞对照组和阴性对照组(均P<0.05);RNA干扰组K562细胞的增殖抑制率和凋亡率高于细胞对照组(P<0.05),与RNA干扰组及TMP组比较,siRNA转染联合TMP能显著提高K562细胞的增殖抑制率和凋亡率(均P<0.05)。结论 Apollon siRNA转染能显著抑制K562细胞增殖并促进其凋亡,且与TMP联合使用对提高K562细胞的增殖抑制率和凋亡率具有显著协同作用,提示siRNA技术联合药物在白血病治疗中具有重要的潜在价值。
- 贾秀红孝飞飞李建厂
- 关键词：RNA干扰川芎嗪白血病K562细胞
- RNA干扰抑制Apollon表达联合川芎嗪可增强白血病细胞对化疗药物的敏感性被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默凋亡抑制蛋白Apollon基因表达联合中药川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)能否增强人髓系白血病K562细胞对长春新碱(vincristine,VCR)和柔红霉素(daunorubicin,DNR)的药物敏感性。方法:依据前期实验筛选出的干扰效果最佳的靶向Apollon的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)片段,构建pGPHI-GFP-Neo-Apollon真核表达载体,应用LipofectAMINETM2000转染白血病K562细胞,G418稳定筛选。采用反转录-PCR(reverse transcriptase PCR,RT-PCR)法和细胞免疫荧光法分别检测重组载体稳定转染K562细胞后Apollon mRNA及其蛋白的表达情况;RNAi联合TMP与VCR或DNR用药后,应用MTT法检测细胞对化疗药物敏感性的变化,FCM法检测细胞凋亡率。结果:成功构建了pGPHI-GFP-Neo-Apollon载体并在K562细胞内稳定表达,重组载体能有效沉默Apollon mRNA及蛋白表达。RNAi组细胞联合TMP作用后能明显增加细胞对VCR、DNR的敏感性,其半数抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC50)值明显低于单纯TMP作用组(P<0.05),细胞凋亡率也显著增加,与未经任何处理的对照组及单纯TMP作用组比较的凋亡率差异有统计学意义(P<0.05)。结论:靶向Apollon的RNAi联合TMP能明显提高K562细胞对VCR、DNR的敏感性,显著减少化疗药物使用剂量且更易于化疗药物诱导细胞凋亡,提示RNAi沉默Apollon基因联合中药TMP能在一定程度上逆转白血病细胞的耐药性。
- 孝飞飞贾秀红李建厂
- 关键词：RNA干扰凋亡抑制蛋白质类川芎嗪K562细胞
