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siRNA干扰人BMP9重组腺病毒载体的构建及其促进乳腺癌SK-BR-3细胞增殖被引量：4: 2013年; 目的筛选特异性干扰人BMP9基因的siRNA序列并制备重组腺病毒AdsiBMP9,探讨RNAi人BMP9基因后对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖能力的影响。方法设计制备3对干扰人BMP9的双链DNA序列,亚克隆至Pses-Hus质粒中获得Pses-Hus-siBMP9质粒,脂质体转染乳腺上皮细胞HBL-100筛选有效干扰质粒,构建重组腺病毒并感染SK-BR-3细胞,RT-PCR,Western blot检测BMP9表达,MTT检测细胞增殖能力。结果成功构建并筛选出针对人BMP9基因的有效干扰质粒并包装成腺病毒,病毒滴度为1×1010IU/mL,感染SK-BR-3细胞显示BMP9在转录水平和翻译水平表达量显著低于对照组和空白组(P<0.05),第5天AdsiBMP9组细胞的增殖率显著高于AdsiNC组(P<0.05)。结论成功构建特异性沉默人BMP9基因的siRNA腺病毒载体,可有效抑制SK-BR-3细胞中BMP9基因的表达从而促进该细胞增殖。; 刘月红王科孙笑笑万绍恒王维陈莹莹张彦; 关键词：SIRNA 重组腺病毒载体肿瘤增殖

骨形态发生蛋白9对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响被引量：5: 2011年; 目的:探讨骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein9,BMP9)在体内、外对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。方法:将pAdtrack-CMV/BMP9和pAdtrack-CMV/GFP腺病毒感染MDA-MB-231细胞,RT-PCR法检测MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231/BMP9细胞中BMP9mRNA的表达,MTT法、平板集落形成实验和FCM法检测细胞增殖和凋亡的情况。建立裸鼠MDA-MB-231、MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231/BMP9移植瘤模型,测量移植瘤体积,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果:MDA-MB-231和MDA-MB-231/GFP细胞中无BMP9mRNA的表达,MDA-MB-231/BMP9细胞中有明显BMP9mRNA表达;MDA-MB-231/BMP9细胞增殖抑制率高于MDA-MB-231/GFP细胞(P<0.05),而细胞集落形成率明显低于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.05),细胞凋亡率则明显高于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.05)。MDA-MB-231/BMP9组的裸鼠移植瘤体积明显小于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.001),而移植瘤细胞中的凋亡指数则明显高于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.001)。结论:BMP9可在体内、外抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖并促进其凋亡。; 王科冯红蕾孙笑笑罗进勇王虹张彦; 关键词：细胞增殖细胞凋亡细胞增殖细胞凋亡

下调ALK2对人乳腺癌细胞增殖,侵袭和迁移的影响及机制探讨: 目的：探讨活化素蛋白激酶2(ALK2)下调后对MDA-MB-231细胞生物学行为的改变及可能的机制，为乳腺癌的预防和治疗奠定基础。　　方法：用高转移性人乳腺癌细胞MDA-MB-231作为目的细胞，RT-PCR法检测细胞中...; 孙笑笑; 关键词：乳腺癌细胞生物学行为; 文献传递

骨形态发生蛋白9体外调节乳腺癌细胞与骨髓间充质干细胞的相互作用被引量：3: 2013年; 目的观察骨形态发生蛋白9(BMP9)在共培养条件下对HS-5成骨分化及MDA-MB-231转移相关因子表达的影响。方法采用Transwell小室间接共培养MDA-MB-231细胞与HS-5细胞,加入BMP9条件培养基,使用化学发光法、细胞化学染色法及茜素红S染色法分别检测HS-5细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、ALP表达及细胞钙盐沉积的变化;应用RT-PCR及Western blot观察HS-5细胞骨钙素(OCN)、MDA-MB-231细胞甲状旁腺激素相关蛋白(PTH-rP)及白细胞介素6(IL-6)mRNA和蛋白表达的变化。结果 HS-5的ALP活性升高,并呈时间依赖性,第9天达最高,随后降低;ALP细胞化学染色结果进一步证实这一点;HS-5细胞钙盐沉积增多、OCN mRNA和蛋白的表达升高(P<0.05);MDA-MB-231转移相关的PTH-rP及IL-6 mRNA和蛋白的表达下降(P<0.05)。结论 BMP9能够调节乳腺癌细胞与骨髓间充质干细胞的相互作用。; 万绍恒刘月红孙笑笑王科王维陈莹莹张彦; 关键词：乳腺肿瘤骨髓间充质干细胞

长链非编码RNA Linc00461干扰慢病毒的构建与鉴定: 2016年; 目的制备shRNA干扰人长链非编码RNA Linc00461的慢病毒载体(shRNA-Linc00461),为进一步深入研究长链非编码RNA的功能奠定基础。方法利用在线干扰设计网页进行干扰引物设计,根据小干扰RNA的设计原则,选取三对针对Linc00461特异性干扰引物送公司合成。合成的片段连接到慢病毒载体质粒p SIH1-H1,形成p SIH1-H1-shRNA-Linc00461质粒。用PCR及测序对其进行鉴定,之后与慢病毒包装质粒混匀,由脂质体转染至HEK293T细胞进行包装,产生慢病毒shRNA-Linc00461,收集上清液使其感染乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过RT-PCR鉴定重组慢病毒干扰效果。并选取干扰效果最好的Linc00461感染MDA-MB-231细胞,运用MTT和流式细胞术检测细胞增殖和周期的改变。结果 SIH1-H1-shRNA Linc00461质粒经PCR验证和测序后,证实其构建成功。shRNA-Linc00461在HEK293T细胞中重组成慢病毒,并成功感染MDA-MB-231,感染效率约为70%。shRNA-Linc00461感染乳腺癌MDA-MB-231细胞后Linc00461的表达下调65.32%;感染shRNA-Linc00461第3天MTT结果显示:实验组吸光度值(0.232±0.032)明显低于实验对照组(0.398±0.037)。流式结果提示实验组G2M期细胞(47.55±5.063)%高于实验对照组(8.876±3.565)%。结论成功构建了shRNA-Linc00461慢病毒载体,并能有效抑制Linc00461表达,为深入研究人Linc00461基因功能奠定了基础。; 孙笑笑王科张彦; 关键词：RNA 小分子干扰乳腺肿瘤慢病毒属

人siALK2重组腺病毒的构建及其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭的影响被引量：2: 2013年; 用前期设计并合成好的重组腺病毒质粒pAdsiALK2,经Pac I酶切后转染至HEK293细胞进行包装,制备重组腺病毒,扩增后进行病毒滴度测定,以重组腺病毒siALK2(AdsiALK2)感染MDA-MB-231细胞,以含RFP的腺病毒作为感染对照,并设空白对照组。通过RT-PCR验证MDA-MB-231细胞中ALK2表达显著下降;MTT法、平板集落形成试验、细胞划痕试验及Transwell侵袭试验证实MDA-MB-231/siALK2组相比MDA-MB-231/RFP组细胞的增殖活力、集落形成率及划痕愈合率均显著降低(P<0.05),穿膜细胞数也明显减少(P<0.05),而MDA-MB-231/RFP组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。该研究表明,下调ALK2表达后可以在体外抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移与侵袭。; 费嫦王林孙笑笑刘月红万绍恒王维陈莹莹王婷张彦; 关键词：重组腺病毒乳腺肿瘤细胞增殖细胞运动肿瘤浸润

BMP9对人乳腺癌细胞MDA-MB-231骨转移的影响及可能机制被引量：2: 2012年; 探讨BMP9对人乳腺癌MDA-MB-231细胞骨转移能力的影响及其可能的机制。扩增高滴度的BMP9表达腺病毒,感染MDA-MB-231细胞,制备表达BMP9的重组MDA-MB-231/BMP9细胞,以此作为实验组;同时以含GFP的空载腺病毒感染该细胞为MDA-MB-231/GFP,联合MDA-MB-231共同作为对照组;RT-PCR及Western blot检测重组MDA-MB-231/BMP9细胞中BMP9以及磷酸化Smad1(PSmad1)的表达;定量PCR及Western blot检测三组细胞中CTGFmRNA和蛋白水平的表达情况,最后结合X片运用免疫组织化学染色的方法检测三组标本中CTGF的表达。结果发现重组MDA-MB-231/BMP9细胞中存在BMP9的表达;与对照组细胞相比,MDA-MB-231/BMP9细胞中存在PSmad1的活化增强及CTGF的表达下调;X片发现实验组裸鼠胫骨溶骨性缺损减少;瘤体组织免疫组化发现实验组CTGF表达下调。所以BMP9可以在体内抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的骨转移并且这种抑制作用有可能是通过下调CTGF来实现的。; 徐欣李杰孙笑笑王科冯红蕾刘月红万绍恒罗进勇张彦; 关键词：骨转移 CTGF 乳腺癌

骨形态发生蛋白9抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外侵袭和迁移被引量：9: 2011年; 目的探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭、迁移能力的影响。方法 RT-PCR法检测MDA-MB-231细胞系中BMP9的表达;扩增高滴度的BMP9表达腺病毒,感染MDA-MB-231细胞,制备高表达BMP9的重组MDA-MB-231/BMP9细胞,以此作为实验组;同时以含GFP的空载腺病毒感染该细胞为MDA-MB-231/GFP,联合空白MDA-MB-231共同作为对照组;通过平板集落形成实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验检测重组MDA-MB-231/BMP9细胞侵袭及迁移能力。结果与对照组细胞相比,实验组细胞中BMP9 mRNA表达水平明显增高;实验组细胞集落形成率由对照的90.6%±2.5%与85.6%±3.5%显著下降至57.3%±4.5%(P<0.05);实验组划痕愈合率由对照的95.4%±3.1%与92.5%±2.4%下降至74.0%±3.6%(P<0.05);实验组穿膜细胞数由对照的(255.3±16.1)个与(267.3±14.9)个下降至(150.3±14.6)个(P<0.05)。结论 BMP9可以在体外抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭与迁移。; 王科冯红蕾孙笑笑罗进勇张彦; 关键词：乳腺癌肿瘤侵袭

骨形态发生蛋白9对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与凋亡的作用研究被引量：4: 2010年; 目的:研究骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic protein 9,BMP9)对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、周期及凋亡的影响。方法:半定量RT-PCR法检测高转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231和低转移性乳腺癌细胞MCF-7中BMP9的表达,用人BMP9重组腺病毒(AdBMP9)感染MDA-MB-231细胞作为实验组,含GFP的空载腺病毒(AdGFP)感染MDA-MB-231细胞作为对照组,MTT法观察细胞增殖的变化,流式细胞仪分析周期及凋亡的变化。结果:半定量RT-PCR显示,乳腺癌细胞MDA-MB-231中未检测到BMP9 mRNA的表达;MTT结果显示,AdBMP9处理可引起MDA-MB-231细胞增殖抑制,第5 d MDA-MB-231/BMP9组的细胞增殖率(0.8860±0.0532)显著低于MDA-MB-231/GFP组(1.2240±0.1031)(P<0.05);流式细胞仪分析结果显示,腺病毒感染后第2 d和第3 d,MDA-MB-231/BMP9组细胞周期各相发生变化,G2/M期细胞明显增加,分别为MDA-MB-231/GFP组的3.2倍和2.4倍(P<0.05);同时BMP9可诱发细胞凋亡,腺病毒感染后第3 d MDA-MB-231/BMP9组细胞凋亡百分率(31.55%±8.26%)明显高于MDA-MB-231/GFP组(3.80%±0.46%)(P<0.05)。结论:提示BMP9可通过阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡来抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖。; 冯红蕾王科孙笑笑罗进勇张彦; 关键词：乳腺癌增殖凋亡

DN-ALK2对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭能力的影响被引量：1: 2011年; 目的探讨DN-ALK2对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 RT-PCR法检测MDA-MB-231细胞中ALK2基因mRNA的转录;分别以腺病毒DN-ALK2和RFP感染MDA-MB-231细胞,并设空白对照组,通过MTT法、平板集落形成试验、细胞划痕试验及Transwell侵袭试验检测细胞的增殖、集落形成、迁移及侵袭能力。结果 MDA-MB-231细胞中内源性表达ALK2。腺病毒DN-ALK2和RFP感染MDA-MB-231细胞36 h后,荧光表达量一致,约为70%。MDA-MB-231/DN-ALK2细胞中高表达DN-ALK2。与MDA-MB-231/RFP组相比,MDA-MB-231/DN-ALK2组细胞的增殖活力、集落形成率及划痕愈合率均显著降低(P<0.05),穿膜细胞数也明显减少(P<0.05);而MDA-MB-231/RFP组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论DN-ALK2可以在体外抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移与侵袭。; 孙笑笑王科冯红蕾罗进勇王虹张彦; 关键词：乳腺肿瘤细胞增殖细胞运动肿瘤浸润

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孙笑笑

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