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长链非编码RNA Linc00461干扰慢病毒的构建与鉴定: 2016年; 目的制备shRNA干扰人长链非编码RNA Linc00461的慢病毒载体(shRNA-Linc00461),为进一步深入研究长链非编码RNA的功能奠定基础。方法利用在线干扰设计网页进行干扰引物设计,根据小干扰RNA的设计原则,选取三对针对Linc00461特异性干扰引物送公司合成。合成的片段连接到慢病毒载体质粒p SIH1-H1,形成p SIH1-H1-shRNA-Linc00461质粒。用PCR及测序对其进行鉴定,之后与慢病毒包装质粒混匀,由脂质体转染至HEK293T细胞进行包装,产生慢病毒shRNA-Linc00461,收集上清液使其感染乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过RT-PCR鉴定重组慢病毒干扰效果。并选取干扰效果最好的Linc00461感染MDA-MB-231细胞,运用MTT和流式细胞术检测细胞增殖和周期的改变。结果 SIH1-H1-shRNA Linc00461质粒经PCR验证和测序后,证实其构建成功。shRNA-Linc00461在HEK293T细胞中重组成慢病毒,并成功感染MDA-MB-231,感染效率约为70%。shRNA-Linc00461感染乳腺癌MDA-MB-231细胞后Linc00461的表达下调65.32%;感染shRNA-Linc00461第3天MTT结果显示:实验组吸光度值(0.232±0.032)明显低于实验对照组(0.398±0.037)。流式结果提示实验组G2M期细胞(47.55±5.063)%高于实验对照组(8.876±3.565)%。结论成功构建了shRNA-Linc00461慢病毒载体,并能有效抑制Linc00461表达,为深入研究人Linc00461基因功能奠定了基础。; 孙笑笑王科张彦; 关键词：RNA 小分子干扰乳腺肿瘤慢病毒属

BMP9可通过下调PI3K/AKt信号通路抑制乳腺癌生长: 目的:探讨骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic protein-9,BMP9)是否可通过PI3K/AKt信号通路抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长。方法:采用免疫组织化学法检测临床乳腺癌患者癌组织...; 李述王科; 文献传递

新的乳腺癌抑制因子BMP9可通过调节乳腺癌细胞和脂肪细胞相互作用来抑制乳腺癌生长和转移: 目的 :三阴性乳腺癌在临床上易发生转移且治疗效果差,是医学难题。越来越多证据表明乳腺癌的脂肪微环境对乳腺癌细胞易发生侵袭转移起着关键作用。本研究通过体内和体外实验证实BMP9作为乳腺癌的抑制因子在乳腺癌脂肪微环境中,通过...; 王科王婷张彦; 文献传递

骨形态发生蛋白9调节乳腺癌细胞中长链非编码RNA的表达被引量：2: 2019年; 目的:筛选出与骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein-9,BMP-9)表达相关的长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA),为探讨BMP-9通过调节LncRNA表达水平参与乳腺癌细胞生长、分化、迁移和凋亡等的作用机制提供实验依据。方法 :将携带有BMP-9全基因的重组腺病毒Ad-BMP-9和携带有绿色荧光蛋白(greenuorescent protein,GFP)基因的空载体腺病毒Ad-GFP(对照组)分别感染MDA-MB-231细胞。应用微阵列芯片技术分别检测BMP-9过表达组(MDA-MB-231/BMP-9细胞)和对照组(MDA-MB-231/GFP细胞)中Lnc RNA表达谱的差异,并通过实时荧光定量PCR法验证筛选获得的14条LncRNA(LINC00443、LINC00638、LINC00486、RHNO1、SERHL、HOXA11-AS、IQCA1、LINC00461、LOC440173、LHFPL、ANKRD36BP2、BVES-AS1、LINC00937和LINC00608)在MDA-MB-231/BMP-9和MDA-MB-231/GFP细胞中的表达情况。通过基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析发生表达水平变化的Lnc RNA涉及的功能及通路。结果 :重组BMP-9腺病毒感染的MDA-MB-231细胞中BMP-9 mRNA的表达水平较对照组明显升高。与对照组相比,BMP-9过表达的MDA-MB-231/BMP-9细胞中LncRNA表达水平发生明显变化。实时荧光定量PCR检测结果显示,LINC00443、LINC00638和LINC00486的表达水平上调(P值均<0.05),IQCA1、LINC00461、LOC440173、LHFPL和ANKRD36BP2的表达水平下调(P值均<0.05)。发生表达改变的LncRNA参与了细胞骨架和细胞膜等的形成,或作为细胞间信号转导的信号分子发挥作用。结论 :BMP-9过表达的MDA-MB-231细胞中LncRNA表达谱较对照组出现显著变化,提示部分LncRNA可能参与了BMP-9调控乳腺癌MDAMB-231细胞增殖和侵袭等生物学过程,并发挥关键作用。; 彭书生袁永强李述代红莹朱天金王科; 关键词：芯片分析技术计算生物学

骨形态发生蛋白9对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响被引量：5: 2011年; 目的:探讨骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein9,BMP9)在体内、外对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。方法:将pAdtrack-CMV/BMP9和pAdtrack-CMV/GFP腺病毒感染MDA-MB-231细胞,RT-PCR法检测MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231/BMP9细胞中BMP9mRNA的表达,MTT法、平板集落形成实验和FCM法检测细胞增殖和凋亡的情况。建立裸鼠MDA-MB-231、MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231/BMP9移植瘤模型,测量移植瘤体积,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果:MDA-MB-231和MDA-MB-231/GFP细胞中无BMP9mRNA的表达,MDA-MB-231/BMP9细胞中有明显BMP9mRNA表达;MDA-MB-231/BMP9细胞增殖抑制率高于MDA-MB-231/GFP细胞(P<0.05),而细胞集落形成率明显低于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.05),细胞凋亡率则明显高于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.05)。MDA-MB-231/BMP9组的裸鼠移植瘤体积明显小于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.001),而移植瘤细胞中的凋亡指数则明显高于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.001)。结论:BMP9可在体内、外抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖并促进其凋亡。; 王科冯红蕾孙笑笑罗进勇王虹张彦; 关键词：细胞增殖细胞凋亡细胞增殖细胞凋亡

骨形态发生蛋白9体外调节乳腺癌细胞与骨髓间充质干细胞的相互作用被引量：3: 2013年; 目的观察骨形态发生蛋白9(BMP9)在共培养条件下对HS-5成骨分化及MDA-MB-231转移相关因子表达的影响。方法采用Transwell小室间接共培养MDA-MB-231细胞与HS-5细胞,加入BMP9条件培养基,使用化学发光法、细胞化学染色法及茜素红S染色法分别检测HS-5细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、ALP表达及细胞钙盐沉积的变化;应用RT-PCR及Western blot观察HS-5细胞骨钙素(OCN)、MDA-MB-231细胞甲状旁腺激素相关蛋白(PTH-rP)及白细胞介素6(IL-6)mRNA和蛋白表达的变化。结果 HS-5的ALP活性升高,并呈时间依赖性,第9天达最高,随后降低;ALP细胞化学染色结果进一步证实这一点;HS-5细胞钙盐沉积增多、OCN mRNA和蛋白的表达升高(P<0.05);MDA-MB-231转移相关的PTH-rP及IL-6 mRNA和蛋白的表达下降(P<0.05)。结论 BMP9能够调节乳腺癌细胞与骨髓间充质干细胞的相互作用。; 万绍恒刘月红孙笑笑王科王维陈莹莹张彦; 关键词：乳腺肿瘤骨髓间充质干细胞

7种数据库工具对MRPL13蛋白在乳腺癌中的表达、功能分析及预后价值研究被引量：2: 2020年; 目的通过Oncomine、cBioPortal、癌症细胞系百科全书(CCLE)和The human protein atlas等多个数据库,探讨线粒体核糖体蛋白L13(MRPL13)在乳腺癌组织与正常乳腺组织的表达差异,并进一步分析MRPL13表达与乳腺癌患者预后的关系。方法首先利用Oncomine和cBioPortal数据库分析MRPL13在乳腺癌和正常乳腺组织中的表达差异,用CCLE数据库分析MRPL13在乳腺癌细胞系中的表达情况,并利用The human protein atlas数据库观察MRPL13蛋白水平的表达变化。接着,通过String数据库建立MRPL13的共表达网络,并且利用DAVID数据库对共表达网络进行GO生物学功能和KEGG信号通路富集分析。最后利用cBioPortal和Kaplan-Meier Plot在线分析网络工具探索分析MRPL13表达变化与乳腺癌患者生存期的关系。结果Oncomine数据库发现MRPL13在乳腺癌中高表达(P=5.55×10-9),cBioPortal数据库显示816例乳腺癌患者样本中有43%的MRPL13基因表达上调。同样在CCLE数据库也发现MRPL13在乳腺癌细胞系中高表达,3个数据库结果一致。The human protein atlas数据库发现MRPL13蛋白中等程度表达且主要集中表达在细胞质与细胞膜内。cBioPortal和Kaplan-Meier Plotter网络在线分析均显示乳腺癌患者中MRPL13高表达能显著降低乳腺癌患者生存期,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论相较于正常组织,MRPL13在乳腺癌中高表达,且提示乳腺癌患者预后不良,可作为乳腺癌患者预后评估的分子标志物之一。; 符亮袁永强李玲王科; 关键词：乳腺癌数据库

BMP9对人乳腺癌细胞MDA-MB-231骨转移的影响及可能机制被引量：2: 2012年; 探讨BMP9对人乳腺癌MDA-MB-231细胞骨转移能力的影响及其可能的机制。扩增高滴度的BMP9表达腺病毒,感染MDA-MB-231细胞,制备表达BMP9的重组MDA-MB-231/BMP9细胞,以此作为实验组;同时以含GFP的空载腺病毒感染该细胞为MDA-MB-231/GFP,联合MDA-MB-231共同作为对照组;RT-PCR及Western blot检测重组MDA-MB-231/BMP9细胞中BMP9以及磷酸化Smad1(PSmad1)的表达;定量PCR及Western blot检测三组细胞中CTGFmRNA和蛋白水平的表达情况,最后结合X片运用免疫组织化学染色的方法检测三组标本中CTGF的表达。结果发现重组MDA-MB-231/BMP9细胞中存在BMP9的表达;与对照组细胞相比,MDA-MB-231/BMP9细胞中存在PSmad1的活化增强及CTGF的表达下调;X片发现实验组裸鼠胫骨溶骨性缺损减少;瘤体组织免疫组化发现实验组CTGF表达下调。所以BMP9可以在体内抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的骨转移并且这种抑制作用有可能是通过下调CTGF来实现的。; 徐欣李杰孙笑笑王科冯红蕾刘月红万绍恒罗进勇张彦; 关键词：骨转移 CTGF 乳腺癌

骨形态发生蛋白9抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外侵袭和迁移被引量：9: 2011年; 目的探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭、迁移能力的影响。方法 RT-PCR法检测MDA-MB-231细胞系中BMP9的表达;扩增高滴度的BMP9表达腺病毒,感染MDA-MB-231细胞,制备高表达BMP9的重组MDA-MB-231/BMP9细胞,以此作为实验组;同时以含GFP的空载腺病毒感染该细胞为MDA-MB-231/GFP,联合空白MDA-MB-231共同作为对照组;通过平板集落形成实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验检测重组MDA-MB-231/BMP9细胞侵袭及迁移能力。结果与对照组细胞相比,实验组细胞中BMP9 mRNA表达水平明显增高;实验组细胞集落形成率由对照的90.6%±2.5%与85.6%±3.5%显著下降至57.3%±4.5%(P<0.05);实验组划痕愈合率由对照的95.4%±3.1%与92.5%±2.4%下降至74.0%±3.6%(P<0.05);实验组穿膜细胞数由对照的(255.3±16.1)个与(267.3±14.9)个下降至(150.3±14.6)个(P<0.05)。结论 BMP9可以在体外抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭与迁移。; 王科冯红蕾孙笑笑罗进勇张彦; 关键词：乳腺癌肿瘤侵袭

BMP9/PI3K/Akt信号通路抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长被引量：2: 2016年; 探讨骨形态发生蛋白9是否可通过其它非经典BMPs/SMAD信号通路来抑制人乳腺癌癌细胞MDA-MB-231的生长。本研究采用免疫组化方法检测临床乳腺癌患者癌组织和癌旁组织中BMP9、Akt总蛋白和Akt磷酸化蛋白表达,采用Western blot检测过表达BMP9或靶向干扰BMP9后,对乳腺癌细胞中PI3K/Akt信号通路中Akt总蛋白和Akt磷酸化蛋白表达的影响,通过裸鼠异位移植瘤动物模型证实BMP9可抑制乳腺癌生长,及其对细胞增殖核抗原PCNA表达改变。结果显示,临床乳腺癌患者癌组织中BMP9表达明显低于癌旁组织,癌组织中存在BMP9表达,Akt磷酸化蛋白表达明显降低;BMP9腺病毒感染MDA-MB-231后,MDA-MB-231/BMP9组的Akt磷酸化蛋白表达明显低于MDA-MB-231/GFP,干扰掉MCF7中内源性BMP9后,MCF7/si BMP9组Akt磷酸化蛋白表达明显高于MVF7/si NC组;裸鼠移植瘤动物模型在成瘤后的第21天,MDA-MB-231/BMP9瘤体大小为(0.329±0.047)明显小于MDA-MB-231/GFP(3.102±0.027),PCNA染色显示MDA-MB-231/BMP9的PCNA阳性率为(26.3±3.1)%,明显低于MDA-MB-231/GFP(57.8±5.3)%。由此得出结论,BMP9抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长还可以通过抑制PI3K/Akt信号通路激活来发挥作用。; 刘洋张银朱天金唐治贵王科; 关键词：乳腺癌 PI3K/AKT信号通路

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王科

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