姚家伟
- 作品数:5 被引量:20H指数:3
- 供职机构:中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金:国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- EB病毒潜伏膜蛋白2DNA疫苗的构建及其初步免疫效果观察被引量:9
- 2002年
- 目的 以EB病毒潜伏膜蛋白 2 (latentmembraneprotein 2 ,LMP2 )为靶基因 ,构建EBV LMP2的侯选DNA疫苗 ;并初步探讨其在小鼠体内诱导特异性细胞毒方面的作用 ,为研制鼻咽癌 (na sopharyngealcarcinoma ,NPC)等EB病毒相关肿瘤的治疗性疫苗提供有益资料。方法 将EB病毒LMP2全cDNA片段克隆至含CMV早期启动子的真核表达载体pcDNAⅢ上 ,构建CMV启动子EB病毒LMP2DNA疫苗。在体外将重组质粒转染COS细胞 ,以RT PCR和间接免疫荧光法检测重组质粒在转染的COS细胞中的转录和表达。采用 5 0 μg、10 0 μg、2 0 0 μg 3种质粒剂量进行初步的小鼠免疫试验。结果 重组质粒可在真核细胞中有效地转录和表达LMP2。免疫接种小鼠后可诱发机体产生针对LMP2蛋白的特异性体液免疫和细胞免疫。 5 0 μg、10 0 μg、2 0 0 μg 3种免疫剂量产生的抗体水平差异不大。在免疫接种 6周后 ,重组质粒免疫的小鼠产生针对LMP2的特异性CTL均明显高于空载体免疫小鼠。 3种剂量的CTL结果显示 :在 10 0 μg、2 0 0 μg免疫组 ,小鼠诱导产生的CTL水平要略高于 5 0 μg免疫组。结论 EB病毒重组质粒LMP2免疫小鼠可以诱发小鼠产生特异的体液和细胞免疫应答。
- 朱伟严周玲王琦姚家伟曾毅
- 关键词:EB病毒潜伏膜蛋白2核酸疫苗DNA疫苗免疫效果观察
- 免疫斑点法检测特异性EBV潜伏膜蛋白2合成肽的细胞毒T淋巴细胞被引量:6
- 2000年
- 周玲姚家伟陈志坚周微雅李德锐A.Rickinon曾毅
- 关键词:细胞毒T淋巴细胞
- EB病毒潜伏膜蛋白2重组腺病毒的构建及其免疫效果的研究被引量:5
- 2003年
- 为了进一步研究以EB病毒潜伏膜蛋白2穴LMP2)为靶抗原制备EB病毒相关肿瘤的治疗性疫苗,利用AdEasy系统构建了EBV鄄LMP2的重组腺病毒。PCR鉴定结果证实病毒DNA中含有目的基因的特异性片段;RT鄄PCR证明了外源基因在真核细胞中得以转录;免疫酶和Westernblot的结果也显示LMP2蛋白在真核细胞得到表达。将扩增后的病毒感染Hela细胞测定病毒滴度为1.5×109pfu/ml。将重组病毒以灌胃、肌肉注射和滴鼻的方式感染小鼠,经免疫荧光检测其特异性抗体,LDH法检测特异性CTL的杀伤作用,结果发现三种给药途径均可诱发小鼠针对LMP2的特异性体液免疫和细胞免疫,而用Ad5作为对照组的小鼠则没有引起相应的免疫反应。该研究将有益于进一步探索抗肿瘤特异性主动免疫作用在阻止肿瘤的生长、扩散或复发中的作用。对诱导机体产生特异性抗瘤活性有重要意义。
- 姚家伟周玲王琦左建民曾毅
- 关键词:EB病毒潜伏膜蛋白2重组腺病毒免疫效果肿瘤
- 中国不同人群中T细胞对EB病毒潜伏膜蛋白2的识别被引量:1
- 2001年
- 采集我国广东、广西和北京地区 ,鼻咽癌病人、EBV IgA/VCA阳性和正常人各30例的外周血标本 ,按照已确定的受HLA限制的潜伏膜蛋白2(LMP2)的CTL表位 ,合成在中国人群中常见的HLA A2、A11、A24、B40短肽 ,应用酶免疫吸附斑点法(Elispot) ,检测EBV特异性CD +的CTL应答。结果表明 :30例正常人中27人有特异性LMP2应答 ,在EBV IgA/VCA阳性的30人中17人对LMP2识别 。
- 王琦周玲姚家伟陈志坚李德锐周微雅曾毅
- 关键词:EB病毒
- EB病毒潜伏膜蛋白2重组逆转录病毒的构建及表达被引量:1
- 2000年
- 目的 寻找在真核细胞中表达Epstein Barr(EB)病毒潜伏膜蛋白 2 (Latentmembraneprotein 2 ,LMP2 )的有效途径 ,研究LMP2蛋白功能及深入探讨其在诱导细胞免疫应答中的作用。方法 将EB病毒LMP2蛋白的基因重组至逆转录病毒载体LXSN上 ,通过脂质体将重组质粒导入PT6 7细胞 ,G418筛选抗性克隆 ,收集含重组病毒的上清 ,将其感染小鼠成纤维细胞NIH 3T3 ,测定病毒滴度 ,提取转染细胞DNA进行PCR鉴定 ,间接免疫荧光法检测外源基因在感染病毒的NIH 3T3中的表达。结果 培养上清的病毒滴度为 5 .8× 10 5 PFU ml,聚合酶链反应 (PCR)结果证实 ,转染细胞的DNA中含有目的基因的特异性片段。免疫荧光结果表明EBV LMP2基因在小鼠成纤维细胞中获得表达。
- 朱伟严周玲姚家伟曾毅
- 关键词:疱疹病毒科膜蛋白质类基因表达