向四海
- 作品数：14 被引量：55H指数：4
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生自动化与计算机技术轻工技术与工程更多>>
- 利用表面等离子体谐振技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素B被引量：21
- 2003年
- 本文研究了利用自行研制开发的表面等离子体谐振 (SPR - 2 0 0 0 )生化分析仪检测金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)与其羊单克隆抗体IgG的免疫吸附反应 ,并研究了用SPR技术检测生物大分子相互识别反应相关的一些问题。为了消除溶液间本体折射率差异的影响 ,我们采用牛血清白蛋白 (BSA)本体折射率补偿法 ,使通入流动系统的不同溶液获得基本一样的本体折射率 ,获得了很好的效果。在此基础上 ,SPR - 2 0 0 0生化分析仪初步实验已经能检测到的SEB最低浓度是 1μg/ml,相当于 3 5× 10 -8M。进一步的实验仍在进行中。
- 向四海崔大付蔡浩原李亚亭王于杰陈翔
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素B
- 利用石英晶振生物传感器检测金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的研究
- 石英晶振传感器又称石英晶体微天平Quartz Crystal Microbalance (QCM).当压电晶体表面吸附了外部物质后,其谐振频率会相应减小.利用这一原理,进行生化检测.本文研究了利用石英晶振QCM生物传感器...
- 郑自攀崔大付向四海
- 关键词：QCM生物传感器金黄色葡萄球菌肠毒素B
- 文献传递
- 一株高产克拉维酸的棒状链霉菌及其应用
- 本发明公开了一株高产克拉维酸的棒状链霉菌及其应用。本发明所提供的高产克拉维酸的棒状链霉菌具体为棒状链霉菌（Streptomyces clavuligerus）16CF10，它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的...
- 杨克迁赵友宝向四海
- 文献传递
- 产海因酶的菌种筛选和产酶条件的研究被引量：5
- 2002年
- 利用5-苄海因作为唯一氮源法筛选高产海因酶的菌种。从本实验室保存的221株菌种中筛选出12株具有不对称水解5-苄海因生成N-氨甲酰基-苯丙氨酸的菌株,其中假单胞菌(Pseudomonas sp.)X_4-49具有较高的产酶活力。对此菌的产酶条件的研究表明,产酶的最佳碳源为甘油,最佳氮源为蛋白胨,最佳诱导物为苄海因、尿嘧啶。苄海因作为诱导物的有效浓度为0.2％,产酶的最适培养基的初始pH为7.0,培养条件为33℃,13h。
- 杨柳王建军向四海孙万儒
- 关键词：海因酶菌种筛选产酶条件假单胞菌
- 一种快速显色定量检测微生物样品中棒酸的方法被引量：2
- 2012年
- 为满足从棒状链霉菌突变库中筛选棒酸高产株的需求,基于显色法原理设计了一种快速检测棒酸含量的方法.该方法的反应机制是β-内酰胺酶水解其黄色底物头孢硝噻吩(λmax=390nm),从而生成红色产物(λmax=486nm).由于棒酸是β-内酰胺酶不可逆抑制剂,在上述反应中棒酸含量的高低将影响底物和产物的量,因此可以通过测定底物和产物的比值(A390/A486)最终测定棒酸的含量.本实验证实,该方法对棒酸的灵敏度为50μg/L,最佳检测窗口为0.05～10mg/L,且该方法的检测结果与HPLC法相关性很好.通过筛选一个小规模棒状链霉菌突变株库,证实该显色法可以快速识别和评价棒酸高产突变株.因此该方法若用于工业实践中的大规模突变株筛选,将节省大量的时间与人力.另外,还利用该显色反应开发了平板检测法,直接根据颜色差异定性判断平板菌落棒酸产量高低.该显色法是一种快速、方便、可靠的棒酸产量检测方法,适用于高通量筛选棒酸高产株.
- 戴西达向四海李佳高强杨克迁
- 关键词：棒状链霉菌显色法Β-内酰胺酶
- SPR实验中的噪声因素及其补偿方法研究被引量：1
- 2003年
- 在SPR实验中 ,SPR的响应曲线会因为溶液间本体折射率差异的影响而受到很大的干扰。介绍一种惰性蛋白溶液折射率补偿法 ,巧妙地解决了单通道SPR仪难以消除溶液间本体折射率差异的问题。基于这种实验方法 ,成功地进行了金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)与其羊单克隆抗体IgG的浓度梯度反应 ,初步实验结果表明 ,SPR 2 0 0 0型生化分析仪对SEB的检测灵敏度为1 μg ml,相当于 3.5× 1 0 -8mol L。
- 蔡浩原崔大付向四海李亚亭王于杰陈翔
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素B补偿方法
- 报告基因法比较两种放线菌启动子的活性被引量：6
- 2009年
- 【目的】比较启动子Psf与红霉素抗性基因启动子(PermE*)在链霉菌中的表达强度差异。【方法】本文利用卡那霉素抗性梯度以及邻苯二酚2,3-双加氧酶显色系统,比较了两个启动子的表达差异。【结果】两个启动子在棒状链霉菌(Streptomyces clavuligerus)NRRL3585、天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)M145,委内瑞拉链霉菌(Streptomyces venezuelae)ISP5230及变铅青链霉菌(Streptomyces lividansTK54)均高表达。在棒状链霉菌和天蓝色链霉菌中Psf的表达活性要强于PermE*。【结论】Psf和PermE*是适用于链霉菌的高活性启动子。这些数据为两个启动子的使用提供了参考依据,也为链霉菌基因表达元件提供了新的选择。
- 李佳向四海杨秀山杨克迁
- 关键词：强启动子链霉菌报告基因
- 一株高产克拉维酸的棒状链霉菌及其应用
- 本发明公开了一株高产克拉维酸的棒状链霉菌及其应用。本发明所提供的高产克拉维酸的棒状链霉菌具体为棒状链霉菌（Streptomyces clavuligerus）16CF10，它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的...
- 杨克迁赵友宝向四海
- 文献传递
- 脲对棒状链霉菌棒酸合成的影响
- 2012年
- 【目的】棒酸(Clavulanic acid)是棒状链霉菌(Streptomyces clavuligerus)产生的β-内酰胺酶抑制剂,其合成过程中产生副产物脲,旨在探讨脲对棒酸合成的影响。【方法】通过发酵过程中脲和铵盐添加实验、阻断脲酶活性以及pH梯度实验研究脲对棒酸合成影响。【结果】脲添加实验结果表明:低浓度脲降低棒酸产量,当添加脲浓度达到20 mmol/L时,完全抑制棒酸合成。由于脲酶可以把脲水解为铵离子,导致铵离子浓度及pH提高,因此,通过阻断棒状链霉菌脲酶活性,可以更准确地反映脲对棒酸合成的影响。结果发现,脲酶敲除株发酵液中脲大量积累,浓度高达10 mmol/L,但棒酸产量没有明显降低,说明在该浓度下脲自身并不能抑制棒酸合成。添加脲降低野生菌棒酸产量,可能是脲被水解为铵离子或其引起的pH变化所致。而棒酸发酵液添加铵盐的结果显示铵离子对棒酸产量没有抑制作用;另外,pH梯度实验证实不同pH对棒酸产量影响较大。【结论】排除了脲和铵离子对棒酸合成的抑制作用,证实了脲酶水解脲导致pH提高是脲添加导致野生菌棒酸产量降低的真正原因,为进一步阐明棒酸合成调控机制提供了根据。
- 戴西达向四海赵友宝高强杨克迁
- 关键词：脲酶棒状链霉菌
- SPR生化分析仪对6-氧甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶的检测被引量：19
- 2003年
- 6-氧甲基鸟嘌吟-DNA甲基转移酶(简称MGMT)是一种重要的DNA损伤修复酶,组织中MGMT活性水平的检测可以为肿瘤的早期预防和治疗中化疗方案的确定提供依据。我们利用基于表面等离子体谐振(SPR)生物传感器原理研制成的SPR-2000型生化分析仪对MGMT的基因片段进行了检测,然后采用配套的软件系统对实验数据进行处理,获得检测曲线;再对检测曲线进行温度补偿修正后便获得了杂交反应曲线,SPP-2000型生化分析仪可以检测1.18×10^(-10)mol/L浓度的MGMT核酸样品,为进一步进行临床检测的研究奠定了基础。
- 崔大付王于杰蔡浩原向四海张国青王晋芳钱世钧
- 关键词：生物传感器MGMT活性检测癌症诊断
