严振龙
- 作品数：8 被引量：39H指数：5
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 致仔猪水肿病大肠埃希氏菌F_(107)菌毛抗原的提取及鉴定被引量：2
- 2002年
- 将致仔猪水肿病大肠埃希氏菌 10 7/ 86菌株在TSB、TSA培养基上传代 ,使之表达F10 7菌毛 ,大量收集菌毛化的细菌 ,利用热洗脱法提取菌毛抗原。粗提菌毛抗原经聚丙烯酰胺凝胶电泳可见一条约 15ku的条带 ,以染色凝胶为对照 ,将未染色凝胶上的菌毛抗原条带切下 ,进行提纯。经免疫印迹反应 ,证实其条带为F10
- 严振龙王欣之姜连连董国雄李俊宝
- 关键词：仔猪水肿病大肠埃希氏菌
- 志贺样毒素II型变异体A亚单位单抗的制备被引量：9
- 2003年
- 将表达志贺样毒素II型变异体A亚单位重组蛋白的菌株ppSLT -IIeA在含氨苄青霉素的 2×YTA培养基中培养 ,至对数生长期时加入IPTG诱导 ,诱导的重组菌超声波裂解后 ,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明其已表达重组蛋白。用谷胱苷肽活化的Sepharose 4B亲和层析柱纯化重组蛋白 ,测定纯化蛋白的浓度 ,免疫BALB/c小鼠 ,细胞融合后经ELISA检测 ,得到一株阳性杂交瘤细胞 ,命名为A2 _D3 ,制备的单抗腹水ELISA效价为 2 4log2 ,免疫印迹结果表明此单抗仅与重组蛋白反应 ,而与载体蛋白不反应。利用此单抗检测 13株水肿病菌株 。
- 姜连连陈雷严振龙徐建生董国雄
- 关键词：单抗仔猪水肿病
- 类志贺毒素II型变异体B亚单位单抗的制备和初步应用被引量：7
- 2003年
- 将表达类志贺毒素II型变异体B亚单位融合蛋白的菌株ppSLT-IIeB在含氨苄青霉素的2×YTA培养基中培养,至对数生长期时加入IPTG诱导,诱导的重组菌超声波裂解后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明其已表达融合蛋白。用谷胱苷肽活化的Sepharose4B亲和层析柱纯化融合蛋白,测定纯化蛋白的浓度,免疫BALB/C小鼠,细胞融合后经ELISA检测,得到一株阳性杂交瘤细胞,命名为7C3-1,制备的单抗腹水ELISA效价为210,Westernblet结果表明此单抗仅与融合蛋白反应,而与载体蛋白不反应。利用此单抗检测18株水肿病菌株,发现有13株产类志贺毒素II型变异体。
- 严振龙董国雄李俊宝
- 关键词：B亚单位单克隆抗体融合蛋白水肿病
- SLT-IIeA基因在原核系统中的克隆与表达及其鉴定被引量：1
- 2002年
- PCR扩增并克隆在 p UC1 8质粒中的类志贺样毒素 II型变异体 ( SL T-IIe) A亚单位基因片段切出 ,按预定阅读框架插入到原核性表达载体 p GEX-6p-1的谷胱甘肽 S-转移酶( GST)基因的下游 ,获得重组质粒 pp GEX-A。重组质粒导入大肠杆菌 BL2 1 ,用 IPTG进行诱导表达 ,通过对重组大肠杆菌的菌体裂解物的SDS-PAGE电泳分析及 Western-blot鉴定 ,表明重组菌能大量表达融合蛋白形式的 SL T-IIe A,即 SL T-IIe A蛋白与谷胱甘肽转移酶相连组成的蛋白质。本实验的研究结果 ,为进一步研究 SL T-IIe的生物学特性及研制仔猪水肿病亚单位苗提供了有效的生物材料。
- 严振龙陈雷姜连连成大荣徐建生董国雄李俊宝
- 关键词：原核系统克隆仔猪水肿瘤
- 致仔猪水肿病大肠杆菌快速检测方法的建立被引量：11
- 2003年
- 将水肿病菌株S在TSB培养基中连续传代两次 ,离心后用生理盐水洗涤 ,制成1×108的细菌悬液。菌液倍比稀释 ,分别与适当浓度的F107菌毛单抗作玻板凝集、间接ELISA、斑点 -ELISA试验 ,结果表明 ,当单抗100×稀释时 ,三种方法的细菌最小检出量分别为2.5×107、6×105、1×103,斑点 -ELISA最敏感。从患水肿病的仔猪小肠黏膜上刮取黏液 ,溶于PBS中 ,将此溶液一部分稀释后在麦康凯平板上菌落计数 ,另一部分作为抗原做斑点 -ELISA。结果显示致病菌在小肠黏膜上大量存在 ,斑点 -ELISA能敏感、快速的检测出来。这一检测方法的建立 ,为其它大肠杆菌病的诊断提供了较好的借鉴。
- 严振龙徐建生董国雄李俊宝
- 关键词：仔猪水肿病大肠杆菌间接ELISA
- 仔猪水肿病的诊断与防治被引量：8
- 2003年
- 王欣之严振龙
- 关键词：大肠杆菌仔猪水肿病
- F107(F18_(ab))菌毛单抗的制备、鉴定与初步应用被引量：11
- 2002年
- 将大肠杆菌 10 7/ 86和水肿病菌株在TSB中培养 ,鉴定其表达F10 7菌毛 ,前者作为免疫原免疫BABL/C小鼠 ,后者作为检测抗原包装酶标板。细胞融合后经ELISA和玻板凝集检测 ,得到一株阳性杂交瘤细胞株 ,命名为F7_1。该细胞株制备的腹水ELISA效价为 :2 16,试管凝集价为 :1∶5 12 0 ,在免疫印迹中可与提取的F10 7菌毛特异性条带发生反应。利用此单抗检测表明 ,91%的水肿病菌株表达F10
- 严振龙陈雷徐建生董国雄李俊宝
- 关键词：ELISA免疫印迹
- F107(F18ab)菌毛的提取、提纯及鉴定被引量：4
- 2002年
- 将致仔猪水肿病菌株107/86在TSB、TSA培养基上传代,使之表达F107菌毛,大量收集菌毛化的细菌,利用热洗脱法提取菌毛。粗提菌毛经15%的聚丙烯酰胺凝胶电泳可见一条约15ku的条带,以染色的凝胶为对照,将未染色凝胶上的菌毛条带切下,捣碎,加生理盐水,37℃,2h后离心,吸出上清再次电泳,可见提纯的菌毛条带。用针对F107菌毛的单抗做免疫印迹反应,证实此条带为F107菌毛蛋白。
- 严振龙王欣之姜连连董国雄李俊宝
- 关键词：聚丙烯酰胺凝胶电泳单抗免疫印迹致病菌提纯
