褚颖豪
- 作品数：5 被引量：15H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- RNA干扰核糖核酸酶抑制因子对非浸润性膀胱癌BIU-87细胞的影响
- 核糖核酸酶抑制因子(Ribonuclease Inhibitor,RI)是一种胞浆内酸性糖蛋白,由许多亮氨酸重复顺序组成,含有这样结构的一百多种蛋白质显示了广泛的功能,包括细胞周期调节、DNA 修复、胞外基质的相互作用及...
- 欧阳溪何晓燕褚颖豪陈俊霞
- 关键词：核糖核酸酶抑制因子BIU-87细胞
- 文献传递
- 重组人核糖核酸酶抑制因子腺相关病毒的构建及表达被引量：1
- 2010年
- 目的构建携带全长人核糖核酸酶抑制因子(Ribonuclease inhibitor,RI)基因的重组腺相关病毒,并在膀胱癌细胞T24中表达。方法 Trizol法提取人脐静脉内皮细胞ECV30总RNA,经RT-PCR扩增RI基因,克隆至pUCm-T质粒中,再亚克隆至pAAV-IRES-hrGFP载体,构建pAAV-IRES-hrGFP-RI重组质粒,与pAAV-RC和pAAV-Helper质粒共转染HEK293细胞,包装并扩增腺相关病毒RI-AAV,检测其感染性滴度,并转染T24细胞,采用RT-PCR检测RI基因mRNA的转录水平,Westernblot检测RI蛋白的表达水平。结果重组质粒pAAV-IRES-hrGFP-RI经酶切及测序鉴定构建正确;重组腺相关病毒RI-AAV的感染性滴度为1.1×1010U/ml;RI-AAV转染的T24细胞RI基因mRNA的转录水平及蛋白表达水平较未转染组及空病毒转染组均显著提高,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论已成功构建人RI基因重组腺相关病毒,为进一步研究RI对膀胱癌细胞的侵袭和转移的作用奠定了基础。
- 褚颖豪欧阳溪何晓燕陈俊霞高娟朱军
- 关键词：核糖核酸酶抑制因子腺相关病毒膀胱肿瘤
- RI基因siRNA干扰质粒的构建及其对人膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响被引量：9
- 2009年
- 目的构建核糖核酸酶抑制因子(RI)基因siRNA干扰质粒,并检测其对人膀胱癌细胞BIU-87迁移和侵袭能力的影响。方法设计并构建针对RI基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体和1个无同源性的阴性对照载体,经酶切和DNA测序鉴定后,转染BIU-87细胞,通过RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学法检测干扰的有效性。光镜及HE染色观察细胞形态的改变,黏附试验、划痕试验和Transwell法检测细胞黏附、迁移和侵袭能力的变化,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架微丝结构。结果酶切和测序结果证明干扰质粒构建正确;转染特异性siRNA表达载体的BIU-87细胞RI蛋白的表达水平明显降低,对照组未发生明显改变;转染干扰质粒的细胞堆叠严重,细胞黏附能力显著降低,迁移和侵袭能力显著提高,细胞骨架微丝聚集,伸展出片状伪足。结论已成功构建RI基因siRNA干扰质粒,其可显著提高膀胱癌细胞的迁移和侵袭能力,说明RI可作为抑制肿瘤迁移和侵袭的有效靶点。
- 欧阳溪陈俊霞何晓燕褚颖豪夏俊
- 关键词：核糖核酸酶抑制因子RNA干扰膀胱癌细胞迁移
- 重组人核糖核酸酶抑制因子腺相关病毒表达对膀胱癌T24细胞侵袭和转移的影响
- 目的：构建携带全长人核糖核酸酶抑制因子(RI)基因的重组腺相关病毒,转染人膀胱癌细胞T24,并检测其对人膀胱癌T24细胞侵袭和转移的影响。
方法：Trizol法提取人脐静脉内皮细胞总 RNA,经RT-PCR扩增RI...
- 褚颖豪
- 关键词：核糖核酸酶抑制因子重组腺相关病毒膀胱癌细胞转移
- 文献传递
- Let-7a负性调控肺癌A549细胞中NIRF基因的表达被引量：5
- 2009年
- 目的:探讨肺癌A549细胞中let-7a对其靶基因NIRF表达的调控作用.方法:运用生物信息学方法对let-7a进行靶基因预测并分析其靶基因NIRF;构建含有NIRF 3′UTR全长的荧光素酶报告质粒pRL-TK-NIRF 3′UTR;将pRL-TK或pRL-TK-NIRF 3′UTR与pGL3-control,及let-7a mimics或control mimics共转染A549细胞,双荧光素酶报告系统检测试剂盒测定转染后A549细胞中荧光素酶的表达;A549细胞分别转染let-7a mimics和control mimics,Western Blot检测NIRF蛋白的表达.结果:NIRF3′UTR含有一个let-7a结合位点,而且该结合位点在多个物种高度保守;经测序证实荧光素酶报告质粒pRL-TK-NIRF 3′UTR构建成功;共转染let-7amimics,pRL-TK-NIRF3′UTR与pGL3-control的A549细胞组,荧光素酶活性明显降低(P<0.01),为对照组(共转染pRL-TK与pGL3-control的A549细胞组)的50%;Western Blot检测显示,与未转染的A549细胞相比,转染let-7a mimics的A549细胞中NIRF蛋白的表达显著降低(P<0.01),而转染control mimics的A549细胞中NIRF表达无明显变化(P>0.05).结论:肺癌A549细胞中,let-7a可以结合到NIRF 3′UTR,负性调控NIRF的表达.
- 何晓燕陈俊霞褚颖豪张政彭惠民
- 关键词：微RNA肺癌基因表达
