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Let-7a表达质粒的构建及其对肺癌A549细胞k-Ras蛋白表达的抑制作用被引量：2: 2010年; 目的探讨let-7a介导的基因表达调控在肺癌形成中的作用。方法依据miRBase数据库中hsa-let-7a序列,设计两条寡核苷酸片段,退火处理后克隆至pGenesil-1质粒,构建重组质粒pGenesil-let-7a,同时设计并构建一个阴性对照质粒pGenesil-control。将pGenesil-let-7a及pGenesil-control转染肺癌A549细胞,经G418筛选,建立稳定表达let-7a-GFP及control-GFP的细胞株。采用MTT比色法检测活细胞数并绘制生长曲线;半定量RT-PCR、Western blotting及免疫细胞化学检测k-Ras表达的差异。结果经测序证实重组质粒构建成功,与未处理的A549细胞和稳定表达pGenesil-control的细胞相比,在稳定表达pGenesil-let-7a的A549细胞中,细胞生长明显减慢,k-Ras的蛋白表达明显降低,而k-Ras的mRNA水平无明显变化。结论 let-7a在翻译水平抑制了k-Ras的表达,并对细胞生长具有显著的抑制作用。; 何晓燕陈俊霞欧阳溪张政彭惠民; 关键词：微RNA 肺癌 K-RAS

RNA干扰核糖核酸酶抑制因子对非浸润性膀胱癌BIU-87细胞的影响: 核糖核酸酶抑制因子(Ribonuclease Inhibitor,RI)是一种胞浆内酸性糖蛋白,由许多亮氨酸重复顺序组成,含有这样结构的一百多种蛋白质显示了广泛的功能,包括细胞周期调节、DNA 修复、胞外基质的相互作用及...; 欧阳溪何晓燕褚颖豪陈俊霞; 关键词：核糖核酸酶抑制因子 BIU-87细胞; 文献传递

let-7a调控人肺腺癌细胞株A549中NIRF基因的表达: NIRF 是近年来新发现的一种核蛋白,其蛋白质内部含有 UBL(ubiquitin-like)、 PHD(plant homeodomain)、SRA(set and ring associated)、RING(real...; 何晓燕彭惠民陈俊霞欧阳溪; 关键词：MICRORNA 肺癌; 文献传递

重组人核糖核酸酶抑制因子腺相关病毒的构建及表达被引量：1: 2010年; 目的构建携带全长人核糖核酸酶抑制因子(Ribonuclease inhibitor,RI)基因的重组腺相关病毒,并在膀胱癌细胞T24中表达。方法 Trizol法提取人脐静脉内皮细胞ECV30总RNA,经RT-PCR扩增RI基因,克隆至pUCm-T质粒中,再亚克隆至pAAV-IRES-hrGFP载体,构建pAAV-IRES-hrGFP-RI重组质粒,与pAAV-RC和pAAV-Helper质粒共转染HEK293细胞,包装并扩增腺相关病毒RI-AAV,检测其感染性滴度,并转染T24细胞,采用RT-PCR检测RI基因mRNA的转录水平,Westernblot检测RI蛋白的表达水平。结果重组质粒pAAV-IRES-hrGFP-RI经酶切及测序鉴定构建正确;重组腺相关病毒RI-AAV的感染性滴度为1.1×1010U/ml;RI-AAV转染的T24细胞RI基因mRNA的转录水平及蛋白表达水平较未转染组及空病毒转染组均显著提高,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论已成功构建人RI基因重组腺相关病毒,为进一步研究RI对膀胱癌细胞的侵袭和转移的作用奠定了基础。; 褚颖豪欧阳溪何晓燕陈俊霞高娟朱军; 关键词：核糖核酸酶抑制因子腺相关病毒膀胱肿瘤

RNA干扰核糖核酸酶抑制因子表达对膀胱癌BIU-87细胞侵袭和转移的影响: 目的：构建核糖核酸酶抑制因子（RI）基因siRNA干扰质粒，并检测其对人膀胱癌BIU-87细胞侵袭和转移的影响。方法：设计并构建针对RI基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体和1个无同源性的阴性对照载体，...; 欧阳溪; 关键词：膀胱癌核糖核酸酶抑制因子 RNA干扰 BIU-87细胞细胞迁移细胞侵袭; 文献传递

RI基因siRNA干扰质粒的构建及其对人膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响被引量：9: 2009年; 目的构建核糖核酸酶抑制因子(RI)基因siRNA干扰质粒,并检测其对人膀胱癌细胞BIU-87迁移和侵袭能力的影响。方法设计并构建针对RI基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体和1个无同源性的阴性对照载体,经酶切和DNA测序鉴定后,转染BIU-87细胞,通过RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学法检测干扰的有效性。光镜及HE染色观察细胞形态的改变,黏附试验、划痕试验和Transwell法检测细胞黏附、迁移和侵袭能力的变化,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架微丝结构。结果酶切和测序结果证明干扰质粒构建正确;转染特异性siRNA表达载体的BIU-87细胞RI蛋白的表达水平明显降低,对照组未发生明显改变;转染干扰质粒的细胞堆叠严重,细胞黏附能力显著降低,迁移和侵袭能力显著提高,细胞骨架微丝聚集,伸展出片状伪足。结论已成功构建RI基因siRNA干扰质粒,其可显著提高膀胱癌细胞的迁移和侵袭能力,说明RI可作为抑制肿瘤迁移和侵袭的有效靶点。; 欧阳溪陈俊霞何晓燕褚颖豪夏俊; 关键词：核糖核酸酶抑制因子 RNA干扰膀胱癌细胞迁移

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欧阳溪