王炜煜
- 作品数：23 被引量：58H指数：5
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：卫生部科学研究基金国家重点基础研究发展计划湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生政治法律生物学更多>>
- 蜂毒溶血肽在肿瘤生物治疗中的研究被引量：1
- 2006年
- 蜂毒溶血肽(MLT)是意大利蜜蜂(apis mellifera)毒的主要成分之一,由26个氨基酸组成,以往临床上主要用于治疗自身免疫性疾病。但近20年来,先后发现对多种实验性肿瘤有强烈的杀灭作用,引起了人们的极大关注。现综述近年来在研究蜂毒溶血肽治疗肿瘤、提高基因转染效率等诸方面的研究进展。
- 王炜煜曹利民
- 关键词：肿瘤抗肿瘤药
- Tat蛋白转导结构域介导HSV1-TK导入肝癌细胞及其效应
- 2006年
- 目的：探讨HIV-1编码的反式激活蛋白Tat与HSV1-TK融合表达对肝癌细胞的杀伤效果。方法：合成编码HIV-Tat47-57（Tat 11）的2条寡核苷酸单链，两端分别引入BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两个酶切位点，退火形成寡核苷酸双链，15％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳判断退火效果；以r-pAs16Dr为模板，通过PCR扩增HSV1-TK基因，定向克隆至原核表达载体pET-32中。将含pET-32c-Tat 11-TK的BL21菌通过IPTG诱导表达，表达产物用Ni^（2＋）螯合柱亲和纯化，免疫组化分析重组蛋白Tat 11-TK的膜结合特性，蛋白印迹技术分析该融合蛋白的穿膜能力，检测和分析TK／GCV、Tat 11-TK／GCV对肝癌细胞株HepG2的杀伤作用。结果：表达产物SDS-PAGE在相对分子质量60700左右显示条带，符合Tat 11-TK与表达标签融合蛋白的理论值，并证明以包涵体的形式表达；通过Ni^（2＋）螯合柱亲和纯化获得的Tat 11-TK重组融合蛋白，经免疫组化证实能结合到肝癌细胞表面，蛋白印迹结果说明Tat 11-TK能有效穿过细胞膜进入HepG2细胞内，同时应用低浓度前药更昔洛韦（GCV，150 μmol／L）能有效抑制HepG2细胞生长。结论：Tat 11-TK在原核系统获得高效表达，具有较强的穿膜能力和前药酶活性。
- 曹利民王炜煜赵晓蓉叶庆雷萍刘静代维朱荫昌司进沈关心
- 关键词：HIV-1TATHSV1-TK蛋白转导肝癌基因治疗
- HIF-1α和HIF-2α在肝癌细胞中的时相差异表达被引量：13
- 2006年
- 背景与目的:缺氧诱导因子2α(hypoxia induc ib le factor-2 alpha,H IF-2α)与缺氧诱导因子1α结构功能相似却不可相互替代;两者在缺氧过程中的表达不一致。本研究旨在检测缺氧状态下肝癌细胞中H IF-2α和H IF-1α的时相表达差异并探讨其可能的调节机制和意义。方法:以1%低氧培养箱模拟细胞低氧环境,检测人肝癌SMMC-7721细胞中H IF-1α和H IF-2αmRNA量和蛋白量,以及反义H IF-1α(natural antisense hypoxia induc ib lefactor-1,αaH IF)的mRNA量。同时应用氯化钴(CoC l2)和转录抑制剂5,6-二氯苯并咪唑1-beta-D-呋喃核糖苷(5,6-d ichlorobenzim ida-zole-1-beta-d-ribo furanoside,DRB)检测H IF-1α和H IF-2αmRNA的半衰期,评价H IF-1α和H IF-2αmRNA的稳定性。结果:急性缺氧迅速诱导H IF-1α和H IF-2α蛋白在细胞内堆积。随着缺氧时间延长H IF-1αmRNA的稳定性下降,其蛋白表达降低,而H IF-2α和aH IF蛋白表达持续增高。结论:H IF-2α可能在肿瘤的放疗和化疗抗性以及与肿瘤侵袭和转移方面起着重要作用。aH IF参与了H IF-1αmRNA的调节。
- 王健易继林王炜煜王从俊许荣华
- 关键词：缺氧诱导因子-1Α肝癌
- 去唾液酸糖蛋白受体H1亚基的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2007年
- 目的在原核系统中表达并纯化去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1亚基,制备兔抗人ASGPR1多克隆抗体。方法以质粒pEA1为模板,设计引物,将聚合酶链反应(PCR)扩增产物H1基因克隆到原核表达载体pET-32c中。接种含H1/pET-32c的菌株BL21单菌落至LB肉汤中,1∶100稀释转种后用1 mmol/L终浓度的异丙基硫代-β-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,用纯化的ASGPR1免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果H1/pET-32c在原核系统中成功表达和纯化出约50.3 kD大小的融合蛋白,用纯化的H1成功制备了兔抗人H1多克隆抗体,并用6His-H1和GST-H1重组蛋白进行免疫印迹技术(Western blot)分析,证实了抗体的正确性。结论应用多克隆抗体可以检测体内外ASGPR H1亚基基因的表达,为临床上测定血清可溶性ASGPR奠定基础。
- 王炜煜易继林王健司进朱荫昌曹利
- 关键词：去唾液酸糖蛋白受体原核表达蛋白纯化抗体
- 大鼠脑挫伤后诱导型一氧化氮合成酶的表达及其时相性研究
- 2005年
- ①目的 探讨大鼠实验性脑挫伤后诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的表达及其时相性。②方法 建立脑挫伤动物实验模 型,采用免疫组织化学技术(SABC法),观察大鼠脑挫伤后iNOS在伤后不同时间的表达。免疫组化结果利用计算机彩色图像分析技 术进行定量统计分析处理。③结果 伤后12小时组可见iNOS活性增高,并随伤后存活时间延长,iNOS阳性物质总面积逐渐增多,细 胞染色强度逐渐加深。阳性物质总面积在伤后1～3天达高峰,5天后开始下降,伤后7天仍维持较高水平。细胞染色强度亦随伤后 存活时间的延长而加深,于伤后5天时达高峰,随后骤然下降,至伤后7天仍高于起始水平。④结论 脑挫伤后iNOS在损伤局部的染 色变化呈现一定的时间规律性,可用于脑挫伤时间的推断。
- 王炜煜宋旭东易继林
- 关键词：脑挫伤免疫组织化学一氧化氮合成酶
- 脑挫伤后GFAP和iNOS表达与损伤时间关系的实验性研究
- 该实验采用免疫组织化学技术(SABC法)并结合一般病理形态学观察,研究大鼠实验性脑挫伤后胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达...
- 王炜煜
- 关键词：脑挫伤免疫组织化学一氧化氮合成酶胶质纤维酸性蛋白
- 文献传递
- 室间隔缺损合并间质性肺炎引起医疗纠纷1例
- 2003年
- 王炜煜宋旭东秦启生
- 关键词：室间隔缺损间质性肺炎医疗纠纷合并症法医学鉴定小儿
- 腺病毒介导MDA-7/IL-24选择性杀伤肝癌细胞HepG2的研究被引量：5
- 2006年
- 目的观察MDA-7/IL-24基因对肝癌的选择性杀伤作用,为肝癌的基因治疗提供理论基础。方法将携带人MDA-7/IL-24基因的腺病毒Ad.mda-7感染人正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2;用RT-PCR法观察MDA-7/IL-24基因的表达;ELISA方法检测细胞培养上清液中MDA-7/IL-24蛋白的浓度;4甲基偶氮唑蓝染色法(MTT)及Hoechst染色观察MDA-7/IL-24对肝癌细胞的生长抑制和杀伤作用;Annexin-V和PI双染后流式细胞仪检测2种细胞的凋亡;用流式细胞仪检测细胞周期。结果复制缺陷型腺病毒能介导外源基因MDA-7/IL-24在肝癌细胞株HepG2和正常细胞L02中的高效表达;细胞培养上清液中有MDA-7/IL-24蛋白的表达;MDA-7/IL-24能明显抑制肝癌细胞生长并可促进肝癌细胞的凋亡;MDA-7/IL-24阻滞肝癌细胞于G2/M期,能选择性杀伤肝癌细胞而对正常的肝细胞无阻滞作用和毒性作用。结论复制缺陷型重组腺病毒载体Ad.mda-7能介导MDA-7/IL-24基因在人肝癌细胞中高效表达,促使细胞增殖阻滞及诱导肿瘤细胞凋亡,选择性地杀伤肝癌细胞HepG2,而对正常肝细胞L02无任何毒性作用。
- 王从俊薛新波易继林陈堃郑建伟曾建平许荣华王炜煜吴在德
- 关键词：基因疗法
- 生存素启动子调控HSV1-TK真核表达载体的构建及其对A549肺癌细胞系的杀伤作用被引量：1
- 2010年
- 目的:构建生存素(survivin,SURV)启动子调控的单纯疱疹病毒1型胸苷激酶(HSV1-TK)基因表达载体,检测该启动子的活性和特异性,观察该基因对大鼠体内肺癌生长的抑制功能。方法:酶切回收SURV启动子、CMV启动子;PCR扩增HSV1-TK基因;将上述片段与含有报告基因荧光素酶基因(Luciferase,Luc)的载体pGL3-Basic的多克隆位点连接,分别构建成为SURV、CMV启动子调控的HSV1-TK、Luc真核表达载体(pSURV-TK、pCMV-TK,pSURV-Luc、pCMV-Luc),用脂质体法将表达载体转染A549细胞系,蛋白质印迹法检测TK基因的表达,更昔洛韦细胞毒实验观察TK蛋白的酶活性,肿瘤生长抑制实验证实pSURV-TK的抑瘤功能。结果:成功地将SURV基因启动子、CMV启动子,HSV1-TK克隆到报告基因载体pGL3的多克隆位点,酶切鉴定和DNA序列分析无误,蛋白质印迹证实pSURV-TK在肺癌细胞A549中可特异性表达出TK蛋白,更昔洛韦细胞毒实验表明表达的TK蛋白具有酶活性,并可有效抑制体内肺癌的生长。结论:SURV启动子调控的TK基因治疗载体,可特异性调控TK基因在A594肺癌细胞的表达并抑制肺癌细胞的生长,为应用自杀基因治疗肺癌提供了新的途径。
- 郁震王炜煜曹利民
- 关键词：肺癌生存素启动子
- 靶向去唾液酸糖蛋白受体多功能分子的构建及抗肝癌效应被引量：1
- 2011年
- 目的构建具有靶向去唾液酸糖蛋白受体、溶酶体逃逸、DNA结合的多功能融合蛋白，并对表达产物进行功能鉴定。方法合成编码Melittin的两条寡核苷酸单链（GenBank：X02007），退火形成寡核苷酸双链；双酶切含抗去唾液酸糖蛋白单链抗体（ASGPRseFv）c1基因的载体C1／plT2，0．7％低融点琼脂糖凝胶回收C1；以pSW50．Gal4为模板，通过聚合酶链反应（PCR）扩增Gal4基因；采用分子克隆技术将其定向克隆至载体pGC4C26H中，获得重组质粒C1MG／pGC4C26H；双酶切载体C1MG／pGCAC26H，胶回收片段C1MG定向克隆至载体pET-32c中，将含C1MG／pET-32c的B121单菌落1：100接种至1000mlLB肉汤培养基中培养，并通过IPTG诱导表达。表达产物用Ni“螯合柱亲和纯化，免疫印迹技术（Western blot）和免疫组织化学分析重组蛋白C1MG的抗原结合能力，溶血实验分析C1MG的生物学活性，肿瘤细胞生长抑制实验分析C1MG的DNA结合能力。结果成功构建原核表达质粒C1MG!pET．32e，并经测序证实：在大肠杆菌BL21中有效表达重组融合蛋白C1MG；表达产物以包涵体形式存在；纯化的C1MG大小为64．1kDa，浓度为0．6g／L；Westernblot结果说明C1MG能有效识别重组ASGPR，免疫组织化学结果证实C1MG能结合到鼠肝细胞表面；溶血实验显示C1MG具有裂解红细胞膜功能；肿瘤细胞生长抑制实验证实C1MG将pEBAF／tk-GAL4rec质粒有效地导入表达ASGPR的细胞中并表达TK基因，氯喹对肿瘤细胞生长抑制无明显影响。结论在大肠杆菌中成功表达和纯化得到单链抗体一蜂毒肽一酵母转录因子（C1MG）的融合蛋白，该融合蛋白至少具有以下功能：ASGPR靶向识别能力、溶酶体膜裂解功能、以及DNA特异性结合功能，提示对肝癌的靶向治疗有潜在的应用价值。
- 王炜煜曹利民罗剑曾建平徐立宁易继林董家鸿
- 关键词：基因治疗融合蛋白
