沈祺达
- 作品数：14 被引量：44H指数：4
- 供职机构：杭州师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划)项目国家级大学生创新创业训练计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 一种井冈霉素在制备几丁质代谢相关蛋白活性抑制剂中的应用
- 本发明公开了一种井冈霉素在制备几丁质代谢相关蛋白活性抑制剂中的应用，井冈霉素能够导致昆虫发生畸形甚至死亡，并导致褐飞虱几丁质的相对含量显著降低，有效浓度范围为0.1～10μg/μl，本发明能够应用于害虫防治中新型杀虫剂的...
- 唐斌杨萌萌沈祺达王世贵
- 文献传递
- 异色瓢虫羽化期转录组文库构建及热休克蛋白筛选和基因克隆
- 热休克蛋白(heat shock protein,简称HSP),又称热应激蛋白和应激蛋白,主要昆虫在应激情况下细胞内迅速合成的一类蛋白质.利用刚进入羽化期的异色瓢虫(Hanmoniaaxyridis)为材料,抽提总RNA...
- 唐斌沈祺达施佐堃张帆
- 褐飞虱海藻糖酶基因在表皮几丁质代谢中的调控作用被引量：19
- 2017年
- 【目的】昆虫海藻糖酶能够调控几丁质代谢并控制蜕皮过程。本研究通过TRE表达被抑制后,检测褐飞虱(Nilaparvata lugens)蜕皮状况、几丁质含量及几丁质合成酶(chitin synthase,CHS)和几丁质酶(chitinase,Cht)基因表达情况,探究不同的海藻糖酶(trehalase,TRE)在褐飞虱表皮中对几丁质代谢的调控作用。【方法】采用RNAi技术,以实验室饲养种群褐飞虱为材料,通过向其体内注射双链RNA(dsRNA)分别抑制单个海藻糖酶基因或同时抑制多个海藻糖酶基因,注射48 h后通过Trizol法提取褐飞虱总RNA,反转录试剂盒合成第一链DNA后采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测该基因的表达情况,确定RNAi效果。氢氧化钾法测定48 h褐飞虱整体几丁质含量变化并对蜕皮困难虫体进行拍照;最后采用qRT-PCR检测褐飞虱CHS和Cht在mRNA水平上的相对表达量变化,分析TRE在调控几丁质代谢中的作用。【结果】与注射dsGFP相比较,其余各注射组褐飞虱整体几丁质含量显著下降,其中dsTRE1混合注射组与Validamycin注射组呈极显著下降,同时褐飞虱出现蜕皮困难等现象。qRT-PCR检测结果显示单个TRE的dsRNA注射后该基因的表达被抑制,但是部分TRE的表达有互补性上升。其中TRE1-2和TRE2在各注射组处理下表达均下降,dsTRE1s对TRE2的表达也有抑制效果,整体上dsTRE1混合注射组和海藻糖酶抑制剂Validamycin抑制效果明显;dsTRE注射组抑制CHS表达效果不明显,Validamycin能够显著降低CHS1和CHS1a在表皮中的表达,且2种dsTRE1注射后CHS1表达在上升,dsTRE1-2注射后表皮中的CHS1a的表达上升;Cht1和Cht8在dsTRE各注射组及Validamycin处理中表达下降或显著下降,dsTRE1-1注射后Cht2和Cht5表达显著上升;dsTRE1-2注射后Cht1、Cht6和Cht8表达下降,Cht2和Cht4表达显著上升;dsTRE2处理组中Cht1、Cht8和Cht10表达下降而Cht9表达显著上升;dsTRE1s注射后,Cht1和Cht5表达显著下降,而Cht9表达显著上升;V
- 张露朱世城郑好沈祺达王世贵唐斌
- 关键词：褐飞虱RNAI海藻糖酶表皮
- 异色瓢虫低温胁迫下过冷却点变化及抗寒基因表达分析被引量：10
- 2016年
- 【目的】异色瓢虫(Harmonia axyridis)是一种重要的捕食性天敌昆虫资源,在东北地区以成虫越冬,具有非常强的抗寒能力。以过冷却点和抗寒基因的m RNA水平变化作为瓢虫抗寒性能指标,探索低温胁迫提高瓢虫抗寒的作用。【方法】将野外采集到的异色瓢虫通过0、5和10℃3种不同温度,进行2、12和24 h 3种时间的低温胁迫处理,测定过冷却点的变化,得到最佳低温胁迫条件。以室内饲养的异色瓢虫作为对照组,分别在5℃低温条件下储存10、20和30 d,测定过冷却点变化和存活情况。根据转录组和数字表达谱(digital gene expression,DGE)数据分析确定6个重要抗寒基因,选择18S作为内参基因,采用实时荧光定量PCR检测异色瓢虫6个重要抗寒基因在低温胁迫和保存时m RNA水平上的相对表达量,分析其在抗寒过程中所起的作用。【结果】5℃低温胁迫12 h能够显著降低异色瓢虫的过冷却点。在低温保存过程中,低温胁迫组异色瓢虫过冷却点和存活率低于未进行低温胁迫组。实时荧光定量PCR检测发现HSP21.4、trehalase、transketolase、ATP-grasp fold domain protein和dopa decarboxylase在低温胁迫过程中表达量上调,而erythrocyte binding protein的表达量下调。且在低温保存过程中HSP21.4一直处于高表达状态,显著高于未进行低温胁迫组,其余5个基因在低温保存过程中处于低表达状态,显著低于未进行低温胁迫组。【结论】低温胁迫能够降低异色瓢虫的过冷却点,但不一定能够提高夏季野外耐高温异色瓢虫的存活能力。HSP21.4和erythrocyte binding protein分别通过高表达和低表达来提高异色瓢虫的抗寒能力,而trehalase、transketolase、ATP-grasp fold domain protein和dopadecarboxylase通过在低温胁迫过程中高表达,保护异色瓢虫抵御寒冷环境。
- 邬梦静徐青叶刘雅施兴荣沈祺达杨萌萌王世贵唐斌
- 关键词：异色瓢虫低温胁迫抗寒基因
- 一种几丁质代谢调控基因NlTPS、编码蛋白、载体、工程菌及其应用
- 本发明公开了一种几丁质代谢调控基因NlTPS、编码蛋白、载体、工程菌及其应用，所述基因NlTPS核苷酸序列为下列之一：a、SEQ.ID.NO.1或SEQ.ID.NO.2；b、与SEQ.ID.NO.1或SEQ.ID.NO....
- 唐斌杨萌萌沈祺达张露王世贵
- 文献传递
- 异色瓢虫HSP67B2基因的克隆及诱导表达分析
- 小分子热激蛋白是一种重要的分子伴侣,可以在环境胁迫下帮助蛋白质折叠和转运.本研究在转录组获得异色瓢虫Harmonia axyridis HSP67 B2基因部分序列的基础上,通过RACE技术克隆得到了HSP67B2基因的...
- 邬梦静沈祺达施佐堃王世贵唐斌
- 关键词：异色瓢虫克隆技术
- 文献传递
- 褐飞虱在不同水稻品系上繁殖能力及相关解毒酶系基因表达变化分析被引量：1
- 2016年
- 采用水稻敏感品系TN1和抗性品系中浙优、IR56饲养褐飞虱,研究褐飞虱产卵量等繁殖情况,测定解毒酶系中酯酶、细胞色素P450和谷胱甘肽转移酶(GST)及卵黄原蛋白(Vg)等基因在mRNA上的表达变化.结果显示褐飞虱在抗性水稻上产卵量减少,Vg2的表达量极显著下降,表明水稻抗性对褐飞虱的产卵量有抑制作用且Vg2调控产卵.酯酶和P450中的部分基因均在取食抗性水稻的褐飞虱体内表达量较高,存在极显著差异.
- 俞姗姗刘雅杨萌萌沈祺达谢国强王世贵唐斌
- 关键词：褐飞虱抗性生化反应
- 异色瓢虫HSP67B2基因的克隆及诱导表达分析被引量：2
- 2014年
- 小分子热激蛋白是一种重要的分子伴侣,可以在环境胁迫下帮助蛋白质折叠和转运。本研究在转录组获得异色瓢虫Harmonia axyridis HSP67B2基因部分序列的基础上,通过RACE技术克隆得到了HSP67B2基因的cDNA全长序列(基因登录号:KJ155728),全长626 bp,其中编码140个氨基酸,3'非翻译区为81 bp,5'非翻译区为122 bp,软件分析预测显示该基因编码蛋白的分子量为15.97 kD,理论等电点为6.61。采用荧光定量PCR技术对异色瓢虫HSP67B2基因在不同发育阶段、低温诱导条件和饥饿处理下的表达进行了研究,结果表明:HSP67B2基因在幼虫期的表达量最高;在低温诱导和饥饿处理下,HSP67B2基因出现上调表达并且表达效率显著提高,表明HSP67B2基因可以通过调控小分子热激蛋白的合成使异色瓢虫适应环境变化。
- 邬梦静沈祺达施佐堃王世贵唐斌
- 关键词：小分子热激蛋白异色瓢虫荧光定量PCR
- 异色瓢虫多巴脱羧酶基因序列及低温诱导表达分析被引量：4
- 2016年
- 多巴脱羧酶(dopa decarboxylase,DDC)是把多巴降解成多巴胺的重要酶类,在昆虫行为和发育中具有重要作用。本研究在转录组获得异色瓢虫Harmonia axyridis DDC基因序列的基础上,从ORF两端设计特异性引物进行扩增并测序验证,获得了DDC基因的c DNA的ORF全长序列,其包含1431 bp,编码476个氨基酸,软件分析预测显示该基因编码蛋白的分子量为53.88 k Da,理论等电点为5.80。本实验分为升温、降温、低温储存以及不同发育阶段(包括预蛹,1-3 d蛹,1-3 d 4龄幼虫以及羽化1-3 d成虫)4个处理组,采用荧光定量PCR技术研究异色瓢虫不同处理组DDC基因的表达水平。结果表明:DDC基因在蛹期第1天的表达量最高,在升温诱导条件下表达无差异,降温诱导下表达量上升;黄色雌成虫低温储存条件下基因表达量先显著上升后显著下降,黑色雌成虫表达量无差异,表明DDC基因可以在低温胁迫下高表达促使异色瓢虫适应环境变化。
- 汪慧娟施佐堃徐风娇沈祺达徐燕霞王世贵唐斌
- 关键词：异色瓢虫实时荧光定量PCR
- 一种几丁质代谢调控基因NlTPS、编码蛋白、载体、工程菌及其应用
- 本发明公开了一种几丁质代谢调控基因NlTPS、编码蛋白、载体、工程菌及其应用，所述基因NlTPS核苷酸序列为下列之一：a、SEQ.ID.NO.1或SEQ.ID.NO.2；b、与SEQ.ID.NO.1或SEQ.ID.NO....
- 唐斌杨萌萌沈祺达张露王世贵
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