谢彦博
- 作品数：16 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中山医科大学更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 3′-末端标记法制备乙型肝炎病毒(HBV)直接重复序列(DR)的生物素化的寡核苷酸探针被引量：1
- 1989年
- 本文首次报告用3’—末端核苷酸转移酶将生物素—11—dUTP标记到人工合成的21寡核苷酸上,该d(NMP)_(21)与HBV DNA长链缺口区附近的序列互补,并含HBV DNA的直接重复序列(Direct Repeat)。本文对其标记条件、检出方法进行观察比较,找出合适的条件,制成的生物素化d(NMP)_(21)探针可与标准的HBVDNA进行杂交,检测敏感度为25pg。用这种探针可以从乙型肝炎病人血清中检出HBV DNA。
- 徐林谢彦博
- 关键词：乙肝病毒寡核苷酸探针
- SDS-PAGE不同银染色敏感性比较
- 1990年
- 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是分析蛋白质等生物大分子的常用手段。作者对SDS-PAGE氨银染色和铬银染色两者的敏感性进行了比较,结果显示氨银染色敏感性为铬银染色的50倍。建议分析微量蛋白时使用氨银染色。
- 周乙华邱荣国谢彦博
- 关键词：银染色敏感性
- 重组HBsAg的纯化及动物免疫原性研究被引量：2
- 1990年
- 用乙型肝炎病毒(HBV)DNA转染工程细胞株MT-5,收获培养上清液,经超过滤浓缩、PEG沉淀和3次超速离心,得到纯化的HBsAg。经SDS-PAGE银染色后,纯化的HBsAg显示两条多肽,分子量分别为23k和27k,与血源HBsAg的多肽成分相同,为HBsAg的两条特异性多肽。经PAGE银染色结果显示,纯化的HBsAg中杂蛋白含量符合疫苗制备要求。用上述方法提纯HBsAg,回收率可达44.1％以上。 将纯化的HBsAg吸附于氢氧化铝佐剂,免疫Balb/c小鼠,并与血源HBsAg对照,抗体半数阳转剂量(ED50)分别为0.501μg和0.832μg,说明基因工程HBsAg的免疫原性似优于血源HBsAg。
- 周乙华谢彦博
- 关键词：乙型肝炎HBSAG纯化免疫原性
- 用重组HBsAg和HRP-SPA检测抗-HBs的研究
- 1990年
- 用高度纯化的哺乳动物细胞分泌的重组HBsAg和HRP-SPA检测血清抗-HBs,其特异性和敏感性与国产抗-HBs RIA药盒相似。用本法和RIA法平行检测71例血清标本,两者符合率达98.6％。认为用重组HBsAg和HRP-SPA检测抗-HBs是一种简单实用的方法。
- 周乙华谢彦博
- 关键词：乙型肝炎表面抗体
- 生物素标记HBV-DNA探针的临床应用
- 1989年
- 本文报告用自制的生物素HBV-DNA探针进行斑点杂交检测HBV感染患者血清中的HBV-DNA,并与同位素探针相比较。用生物素探针测定HBV-DNA之阳性率在HBsAg和HBeAg同时阳性者中为84.2%,HBsAg和抗-HBe同时阳性者中为23.5％,单纯HBsAg阳性者中为18.6％结果表明生物素HBV-DNA探针其特异性、敏感性和重复性与同位素探针相似,且生物素探针有效时间长,稳定性好。
- 陈青谢彦博郑锡澄彭文伟
- 关键词：生物素探针HBV-DNA
- 基因工程乙肝疫苗的研制——II.MT-5细胞中重组DNA的分析
- 1989年
- 采用Biotin-11-dUTP标记乙型肝炎病毒的DNA。利用这种生物素探针对MT-5细胞中的重组DNA进行分析。DNA杂交结果不但确证重组的HBsAg基因转化进入细胞中,而且揭示重组DNA是以游离状态存在,似乎没有整合和重排现象;重组DNA的量在不同亚细胞株中有所不同,HBsAg的表达量与重组DNA拷贝数有正相关关系。
- 邱荣国谢彦博彭文伟
- 关键词：基因工程疫苗生物素探针DNA杂交
- 乙型肝炎病毒前S和S基因在哺乳动物细胞中的表达
- 1989年
- 近些年来不少学者已在哺乳动物细胞中表达了HBV DNA,单纯S基因的表达也已趋向成熟,含前S基因的全S基因的表达也越来越多。本文就乙型肝炎病毒前S和S基因在哺乳动物细胞中的表达作了介绍。
- 周乙华谢彦博
- 关键词：乙肝病毒基因表达哺乳动物细胞
- 基因工程乙肝疫苗的研制——Ⅲ.MT-5细胞的HBsAg纯化与鉴定
- 1990年
- 采用超过滤、PEG沉淀和超速离心综合步骤对MT-5细胞培养上清中的HBsAg进行纯化。所得纯化HBsAg经SDS-PAGE银染色结果显示两条多肽,分子量分别为23k和27k,与血源HBsAg的多肽成分相同,为重组HBsAg的两条特异性多肽,且在凝胶中无其它杂蛋白带存在,纯度高。经PAGE银染色结果证实纯HBsAg中的杂蛋白含量符合疫苗生产的要求。经此综合方法提纯的HBsAg回收率可达44.1％以上。
- 周乙华谢彦博邱荣国
- 关键词：乙型肝炎疫苗基因工程
- 基因工程乙肝疫苗的制备及动物免疫原性研究
- 1990年
- 乙型病毒性肝炎(简称乙肝)是目前严重威胁我国劳动人民身体健康的传染性疾病,由于缺乏对乙肝病毒特异的病原治疗,所以用疫苗预防的意义更加重要。尽管已经有血源乙肝疫苗,但血源疫苗费用昂贵、来源紧张,且有潜在的危险,因此迫切需要用基因工程手段制备乙肝疫苗。我们前一阶段工作已经建立了能够表达HBsAg的工程细胞株MT-5细胞,
- 周乙华谢彦博邱荣国
- 关键词：乙肝疫苗免疫原性研究疫苗预防工程细胞株乙型病毒性肝炎病原治疗
- MT-5细胞表达HBsAg的进一步研究被引量：3
- 1989年
- 进一步观察了基因工程转化细胞株MT-5中HBsAg的表达,结果表明,HBsAg的表达分泌稳定,培养48小时收获,产率最佳;培养基中的小牛血清以10％为最适,通过建立多个单细胞亚克隆株证明,MT-5细胞中HBsAg的表达存在不均一性,亚株的HBsAg表达不受糖皮质激素的诱导,但受Cd^(2+)和Zn^(2+)的诱导,且细胞能够耐受较高浓度的ZnCl_2,Cd^(2+)和Zn^(2+)的最佳诱导浓度分别为1μM和100μM,最高诱导效率为350％,最高诱导产量达2.5mg/l。 MT-5培养上清中的HBsAg经亲和层析初步纯化后,SDS-PAGE呈现两条特异性多肽,分子量为23k和27k,它们代表HBsAg的主要多肽及其糖基化产品,DNA杂交结果不但确证重组S基因存在于MT-5细胞中,而且揭示重组DNA以游离体状态存在,似乎不进行整合和重排,不同亚系细胞中重组DNA的拷贝数估算为11～27个/细胞,拷贝数与HBsAg表达量有正相关关系。
- 邱荣国谢彦博卢文筠
- 关键词：乙肝病毒表面抗原
