王瑞莉
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
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- DZNep对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响
- 3-deazaneplanocinA(DZNep)是一种组蛋白甲基化酶抑制剂，且已被应用于抗肿瘤、抗寄生虫、抗病毒、抗关节炎以及免疫抑制活性等药理作用[1-3]。据报道，DZNep可使肿瘤中沉默的抑癌基因再活化，从而抑制...
- 王瑞莉
- 关键词：食管鳞癌分子靶向药物凋亡机制
- 文献传递
- 杜氏盐藻过氧化物酶1酵母双杂交诱饵质粒的构建
- 2014年
- 目的:构建杜氏盐藻过氧化物酶1(DsPrdx1)的酵母双杂交诱饵质粒并检测其对酵母细胞有无自激活及毒害作用。方法:PCR扩增DsPrdx1的开放阅读框,将扩增出的基因片段插入酵母表达质粒pGBKT7中构建诱饵质粒。经酶切鉴定正确后,用PEG/LiAc法将构建的诱饵质粒分别转化到酵母菌株Y187和AH109中,检测诱饵蛋白对酵母菌有无自激活和毒性作用。结果与结论:构建的酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7-Prdx1对Y187和AH109既无自激活又无毒害作用,可用于酵母双杂交系统。
- 王静龚方华张彦婷王瑞莉薛乐勋关方霞
- 关键词：杜氏盐藻酵母双杂交
- 与杜氏盐藻驱动蛋白Ⅱ动力亚基C端相互作用的新蛋白的酵母双杂交筛选
- 2013年
- 目的:用酵母双杂交的方法筛选与杜氏盐藻驱动蛋白Ⅱ动力亚基(FLA8)C端相互作用的蛋白。方法:设计特异性引物(上下游分别引入EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点),扩增FLA8C端(433个氨基酸)cDNA,与穿梭载体pGBKT7连接以构建诱饵表达载体,然后转化酵母菌株Y187和AH109,Westernblot法检测诱饵蛋白在转化酵母菌株内的表达。通过自激活实验和毒性实验检测诱饵表达载体是否适合利用酵母双杂交的方法筛选相互作用蛋白。转化诱饵质粒的酵母菌株Y187与AH109(文库菌)杂交,待三叶形合子形成后用营养缺陷型培养基和α-半乳糖苷酶活性实验筛选阳性克隆,并对阳性克隆进行测序。结果:成功构建了pGBKT7-FLA8-C双杂交诱饵载体;经检测该载体的表达产物对Y187和AH109均无自激活和毒性作用,可用于酵母双杂交实验;杂交后筛选得到2个阳性克隆,测序结果显示为鞭毛结合蛋白107(FAP107)和含蛋白结合结构域的预测蛋白。结论:成功筛选得到了与杜氏盐藻驱动蛋白Ⅱ动力亚基C端相互作用的蛋白,分别为FAP107和预测蛋白。
- 李靓崔柳青王瑞莉毛丽红韩康柴丹丹薛乐勋
- 关键词：酵母双杂交杜氏盐藻
- 杜氏盐藻糖原合成酶激酶3cDNA片段的克隆及其在鞭毛再生中的功能
- 2013年
- 目的:克隆杜氏盐藻糖原合成酶激酶3(GSK3)基因序列并探讨它在鞭毛再生中的作用。方法:根据杜氏盐藻转录组测序得到的GSK3的2个片段设计上下游引物,提取盐藻总RNA进行RT-PCR,以此为模板扩增2个片段之间的序列。采用3'RACE方法扩增杜氏盐藻GSK3基因3'端序列,通过杜氏盐藻消减杂交模板扩增得到5'端序列。采用pH休克法去除杜氏盐藻鞭毛,通过实时荧光定量PCR观察鞭毛再生过程中GSK3基因在转录水平上的变化。结果:获得一段长为2116bp的GSK3 cDNA片段,其中包含737bp的3'UTR和1158bp的开放阅读框。实时荧光定量PCR结果表明,GSK3的mRNA转录水平在鞭毛再生过程中明显升高。结论:杜氏盐藻GSK3基因与鞭毛再生密切相关。
- 毛丽红李庆华韩康王瑞莉龚方华薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻糖原合成酶激酶3
- 蛋白酶体激活因子PA28α对Eca109和EC9706细胞细胞周期和凋亡的影响
- 2014年
- 目的:探讨蛋白酶体激活因子PA28α对食管鳞癌细胞周期和凋亡的影响。方法:扩增PA28α的cDNA全长序列并连接到pCMV-Myc上,构建真核表达载体pCMV-Myc-PA28α,脂质体法转染食管鳞癌细胞系Eca109和EC9706,荧光显微镜观察PA28α蛋白在细胞中的定位;Western blot法鉴定重组载体的表达;流式细胞仪检测PA28α在食管鳞癌EC9706细胞中过表达对其细胞周期和凋亡的影响。结果:转染了重组载体pCMV-Myc-PA28α的食管鳞癌Eca109和EC9706细胞中PA28α蛋白主要存在于细胞质。与空载体转染组(0.342±0.007)相比,pCMV-Myc-PA28α转染组(1.073±0.040)EC9706细胞中有较高的PA28α蛋白表达(F=984.411,P<0.001)。与空载体转染组(37.642±1.000)相比,pCMV-Myc-PA28α转染组(39.258±0.154)EC9706细胞处于S期细胞比例明显增高(F=24.592,P<0.001)。pCMV-Myc-PA28α转染组EC9706细胞的凋亡率(14.463%±0.634%)明显低于空载体转染组(43.893%±0.473%),差异有统计学意义(F=1 448.569,P<0.001)。结论:PA28α与食管鳞癌的凋亡有密切关系,可能成为治疗食管鳞癌的一个有效靶点。
- 蒋海丽张彦婷石科韩康王瑞莉龚方华王静薛乐勋关方霞
- 关键词：食管鳞癌细胞细胞周期细胞凋亡
- DZNep对Eca109细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨DZNep处理食管鳞状细胞癌Eca109细胞后对其增殖、凋亡及迁移能力的影响。方法:DZNep处理Eca109细胞48 h,以DMSO处理48 h的Eca109细胞作为对照。采用EdU荧光显微镜法检测细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell小室检测细胞迁移数。结果:DZNep处理后的Eca109细胞增殖率为(34.60±4.45)%,低于对照组的(42.37±4.64)%(t=3.625,P=0.002);其细胞凋亡率为(16.27±3.70)%,高于对照组的(7.38±0.77)%(t=7.061,P<0.001);迁移到下室的细胞数为(179±38)个,较对照组的(494±99)个少(t=8.912,P<0.001)。结论:DZNep能够抑制Eca109细胞的增殖和迁移,促进其凋亡。
- 王瑞莉李庆华张彦婷毛丽红蒋海丽龚方华王静薛乐勋关方霞
- 关键词：ECA109细胞增殖凋亡迁移
