龚方华
- 作品数：6 被引量：4H指数：2
- 供职机构：郑州大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Peroxiredoxin1在鞭毛/纤毛解聚及食管癌发生发展中的作用
- 食管癌是最常见的恶性肿瘤之一，在所有恶性肿瘤中其死亡率排在第六位。食管癌主要有两种组织学类型:食管鳞状细胞癌和腺癌。在西方国家食管癌主要是以腺癌为主，我国及其它亚洲国家主要是食管鳞癌。虽然在基础研究和临床方面对食管鳞癌都...
- 龚方华
- 关键词：食管鳞癌杜氏盐藻
- 文献传递
- 杜氏盐藻糖原合成酶激酶3cDNA片段的克隆及其在鞭毛再生中的功能
- 2013年
- 目的:克隆杜氏盐藻糖原合成酶激酶3(GSK3)基因序列并探讨它在鞭毛再生中的作用。方法:根据杜氏盐藻转录组测序得到的GSK3的2个片段设计上下游引物,提取盐藻总RNA进行RT-PCR,以此为模板扩增2个片段之间的序列。采用3'RACE方法扩增杜氏盐藻GSK3基因3'端序列,通过杜氏盐藻消减杂交模板扩增得到5'端序列。采用pH休克法去除杜氏盐藻鞭毛,通过实时荧光定量PCR观察鞭毛再生过程中GSK3基因在转录水平上的变化。结果:获得一段长为2116bp的GSK3 cDNA片段,其中包含737bp的3'UTR和1158bp的开放阅读框。实时荧光定量PCR结果表明,GSK3的mRNA转录水平在鞭毛再生过程中明显升高。结论:杜氏盐藻GSK3基因与鞭毛再生密切相关。
- 毛丽红李庆华韩康王瑞莉龚方华薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻糖原合成酶激酶3
- 杜氏盐藻鞭毛内运输蛋白88在鞭毛组装过程中的功能分析及其原核表达
- 2013年
- 目的:克隆杜氏盐藻鞭毛内运输蛋白(IFT)88的cDNA全长并分析其部分功能。方法:根据盐藻转录组测序片段,分别设计其3'端内、外侧引物及5'端内、外侧引物,PCR扩增其全长。提取盐藻再生过程中不同时间段的总RNA,逆转录后进行实时荧光定量PCR,检测IFT88 mRNA的表达情况。随后利用ORF finder预测并扩增其开放阅读框,连接到pET28a载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),并在1mmol/LIPTG、37℃的条件下诱导4h,提取总蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测IFT88蛋白表达情况。结果:克隆拼接后共得到开放阅读框2400bp,编码799个氨基酸。BLAST显示该氨基酸序列与多个物种的IFT88有较高同源性。SDS-PAGE结果显示,与未诱导组相比,诱导组在90000左右有一条明显的条带。在鞭毛再生过程中,杜氏盐藻IFT88 mRNA的表达量在去鞭毛后30min左右时最高,随后快速下降。结论:扩增得到杜氏盐藻IFT88 cDNA序列且IFT88可能参与盐藻鞭毛组装。
- 韩康石科毛丽红李庆华龚方华蒋海丽薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻
- 蛋白酶体激活因子PA28α对Eca109和EC9706细胞细胞周期和凋亡的影响
- 2014年
- 目的:探讨蛋白酶体激活因子PA28α对食管鳞癌细胞周期和凋亡的影响。方法:扩增PA28α的cDNA全长序列并连接到pCMV-Myc上,构建真核表达载体pCMV-Myc-PA28α,脂质体法转染食管鳞癌细胞系Eca109和EC9706,荧光显微镜观察PA28α蛋白在细胞中的定位;Western blot法鉴定重组载体的表达;流式细胞仪检测PA28α在食管鳞癌EC9706细胞中过表达对其细胞周期和凋亡的影响。结果:转染了重组载体pCMV-Myc-PA28α的食管鳞癌Eca109和EC9706细胞中PA28α蛋白主要存在于细胞质。与空载体转染组(0.342±0.007)相比,pCMV-Myc-PA28α转染组(1.073±0.040)EC9706细胞中有较高的PA28α蛋白表达(F=984.411,P<0.001)。与空载体转染组(37.642±1.000)相比,pCMV-Myc-PA28α转染组(39.258±0.154)EC9706细胞处于S期细胞比例明显增高(F=24.592,P<0.001)。pCMV-Myc-PA28α转染组EC9706细胞的凋亡率(14.463%±0.634%)明显低于空载体转染组(43.893%±0.473%),差异有统计学意义(F=1 448.569,P<0.001)。结论:PA28α与食管鳞癌的凋亡有密切关系,可能成为治疗食管鳞癌的一个有效靶点。
- 蒋海丽张彦婷石科韩康王瑞莉龚方华王静薛乐勋关方霞
- 关键词：食管鳞癌细胞细胞周期细胞凋亡
- DZNep对Eca109细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨DZNep处理食管鳞状细胞癌Eca109细胞后对其增殖、凋亡及迁移能力的影响。方法:DZNep处理Eca109细胞48 h,以DMSO处理48 h的Eca109细胞作为对照。采用EdU荧光显微镜法检测细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell小室检测细胞迁移数。结果:DZNep处理后的Eca109细胞增殖率为(34.60±4.45)%,低于对照组的(42.37±4.64)%(t=3.625,P=0.002);其细胞凋亡率为(16.27±3.70)%,高于对照组的(7.38±0.77)%(t=7.061,P<0.001);迁移到下室的细胞数为(179±38)个,较对照组的(494±99)个少(t=8.912,P<0.001)。结论:DZNep能够抑制Eca109细胞的增殖和迁移,促进其凋亡。
- 王瑞莉李庆华张彦婷毛丽红蒋海丽龚方华王静薛乐勋关方霞
- 关键词：ECA109细胞增殖凋亡迁移
- 杜氏盐藻过氧化物酶1酵母双杂交诱饵质粒的构建
- 2014年
- 目的:构建杜氏盐藻过氧化物酶1(DsPrdx1)的酵母双杂交诱饵质粒并检测其对酵母细胞有无自激活及毒害作用。方法:PCR扩增DsPrdx1的开放阅读框,将扩增出的基因片段插入酵母表达质粒pGBKT7中构建诱饵质粒。经酶切鉴定正确后,用PEG/LiAc法将构建的诱饵质粒分别转化到酵母菌株Y187和AH109中,检测诱饵蛋白对酵母菌有无自激活和毒性作用。结果与结论:构建的酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7-Prdx1对Y187和AH109既无自激活又无毒害作用,可用于酵母双杂交系统。
- 王静龚方华张彦婷王瑞莉薛乐勋关方霞
- 关键词：杜氏盐藻酵母双杂交
