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杨少兵: 作品数：17 被引量：36H指数：3; 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金博士科研启动基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基基因重组腺病毒镇痛疫苗的构建被引量：1: 2007年; 目的构建携带N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基（NR2B）基因的重组腺病毒镇痛疫苗。方法以携带NR2B基因的腺病毒穿梭质粒pDC515-NR2B和腺病毒骨架质粒pBHGfrt（del）E1，3FLP共转染腺病毒包装细胞293细胞，连续观察细胞的形态学。取形成病毒空斑的293细胞，分别采用PCR、RT-PCR及Western blotting的方法从基因水平、转录水平和蛋白水平对病毒空斑筛选和鉴定，对鉴定正确的病毒空斑进行扩增和纯化。结果转染后12d可观察到细胞病变效应，15d后形成病毒空斑。NR2B基因不仅正确插入重组腺病毒载体，而且可在293细胞正确表达NR2B蛋白。鉴定正确的病毒空斑命名为NR2B基因重组腺病毒5型镇痛疫苗，滴度为5×10^11VP／ml，纯度100％。结论成功地构建了NR2B基因重组腺病毒镇痛疫苗，可用于疫苗镇痛的研究。; 王公明陈建平杨少兵田学愎高峰杨辉安珂田玉科; 关键词：受体腺病毒科疫苗镇痛

大鼠源性重组天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3基因构建及其对细胞的促凋亡效应被引量：3: 2009年; 目的探讨大鼠源性重组天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）基因对细胞的促凋亡作用。方法通过重组PCR的方法获得大小亚基顺序颠倒的大鼠重组caspase-3基因，构建真核表达载体，分别转染人胚肾293T细胞和大鼠永生化神经干细胞后观察细胞形态学变化，通过Annexin V-PI双染、流式细胞术、MTr法来检测其促细胞凋亡作用。结果转染后，细胞出现明显的核碎裂，死亡；MTTr法检测发现细胞增殖明显被抑制（抑制率为（48．35±0．16）％和（44．61±0．15）％（P〈0．05）；Annexin V-PI共染色流式细胞术检测两种细胞的凋亡率分别为（30．7±1．5）％和（16．0±1．0）％，较对照组细胞有显著的增加（P〈0．05）。结论大鼠源性重组caspase-3基因可在转染的人和大鼠细胞中表达，并诱导细胞发生凋亡，不仅可有效用于体内实验研究，且能用于诱导神经细胞凋亡。; 陈莎莎曹菲高峰许爱军田学愎肖兴鹏杨少兵田玉科; 关键词：CASPASE-3 凋亡

曲马多与地佐辛联合舒芬太尼用于开胸术后静脉自控镇痛比较被引量：7: 2016年; 目的探讨曲马多对比地佐辛配伍舒芬太尼用于胸外科开胸手术后患者静脉自控镇痛的有效性和安全性。方法选择择期全身麻醉下开胸手术患者292例,随机分为2组,各146例:SQ组,舒芬太尼100μg+曲马多600 mg+0.9%氯化钠溶液至150 m L;SD组,舒芬太尼100μg+地佐辛25 mg+0.9%氯化钠溶液至150 m L。分别于术后0,4,24,48 h记录疼痛视觉模拟评分(VAS)、镇静评分,统计镇痛泵有效按压次数,并观察术后呼吸抑制、恶心、呕吐、腹胀、尿潴留、皮肤瘙痒、眩晕等并发症的发生情况。结果两组患者术后各时间点静息VAS评分差异无统计学意义,SQ组在术后4和24 h运动VAS评分均明显低于SD组,48 h镇痛泵按压次数也明显少于SD组。两组镇静评分及不良反应发生率之间差异无统计学意义。结论曲马多联合舒芬太尼用于开胸患者术后镇痛较地佐辛联合舒芬太尼能明显减轻患者术后运动痛,同时不增加不良反应发生率。; 胡柳迟晓慧张咸伟杨少兵; 关键词：曲马多地佐辛舒芬太尼

低氧／复氧后星形胶质细胞对永生化神经前体细胞增殖与分化的影响: 2008年; 目的探讨低氧／复氧后星形胶质细胞对永生化神经前体细胞增殖与分化的影响。方法24h内新生SD大鼠，断头处死，分离、培养和传代星形胶质细胞，取本室构建的永生化神经前体细胞，根据培养条件的不同分为3组，每组24孔，对照组永生化神经前体细胞在正常培养条件下培养（O217％．CO25％-N278％）；共培养组取第三代星形胶质细胞孵育24h后接种永生化神经前体细胞，培养条件同对照组；低氧／复氧后共培养组取第三代星形胶质细胞，先置入低氧培养箱（O22％．CO25％．N293％）中孵育12h后，恢复正常培养条件12h，再接种永生化神经前体细胞。3组以相同密度接种永生化神经前体细胞（1×10^4／cm^2），隔天半量置换培养基，培养时间为6d。共培养6d后每组取6孔，采用免疫荧光细胞化学法，观察共培养后永生化神经前体细胞的增殖与分化情况，计算其增殖倍数、神经元阳性率和星形胶质细胞阳性率。结果与对照组和共培养组相比，低氧／复氧后共培养组永生化神经前体细胞增殖倍数升高（P〈0．05），神经元阳性率和星形胶质细胞阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论低氧／复氧后星形胶质细胞可促进永生化神经前体细胞增殖，但对其分化无影响。; 杨少兵田玉科高峰田学愎杨辉; 关键词：星形细胞细胞低氧

丙泊酚麻醉下大鼠反复腰椎穿刺鞘内给药的可行性研究被引量：3: 2009年; 目的:探讨丙泊酚麻醉下大鼠腰椎水平反复穿刺鞘内给药的可行性,为大鼠鞘内多次给药提供一种新方法。方法:成年雄性SD大鼠(250～300g)24只,随机分为正常组、丙泊酚组、腰椎穿刺组和腰椎穿刺并给生理盐水组,每组6只。采用丙泊酚(50mg/kg)麻醉大鼠后,用50μl微量进样器于腰5～6间隙行经皮腰椎穿刺,以大鼠后肢出现颤动或鼠尾侧向摆动为穿刺成功的标志。实验中测定大鼠热甩尾潜伏期、免疫荧光法检测脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞变化。结果:丙泊酚组、腰椎穿刺组及腰椎穿刺并给生理盐水组大鼠热甩尾潜伏期与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05),且其脊髓的星形胶质细胞和小胶质细胞活化情况较正常对照组亦无统计学改变(P>0.05)。结论:丙泊酚麻醉下大鼠反复腰椎穿刺鞘内给药法安全有效,可用于需多次鞘内给药,并在给药后立刻检测大鼠疼痛行为学指标的实验。; 刘希江曹菲陈莎莎罗婷肖兴鹏杨少兵王萍田学愎许爱军高峰杨辉田玉科; 关键词：鞘内给药丙泊酚星形胶质细胞小胶质细胞

携带磷脂酰肌醇激酶-3beta基因小干涉RNA的35型腺病毒载体的构建: 2011年; 目的构建磷脂酰肌醇激酶-3beta（P13Kcb）基因小干涉RNA（siRNA）的重组35型腺病毒载体（Ad5／F35）。方法在P13KebmRNA序列中选择1个特异性靶序列，体外合成对应发卡样DNA片段，经退火后，将其定向克隆入siRNA载体pDC316-EGFP—U6，获得重组质粒pDC316-P13KcbsiRNA—EGFP。骨架质粒pBHG—fiber5／35和穿梭质粒pDC316-P13KcbsiRNA—EGFP共转染293细胞，同源重组产生Ad5／F35．P13Kcb—siRNA。经聚合酶链反应（PCR）鉴定目的基因的表达。结果PCR表明Ad5／F35-P13Keb—siRNA质粒构建正确。结论获得的Ad5／F35-P13Keb—siRNA司以用于转基因疼痛治疗的实验研究。; 戴少军杨少兵刘成李荣春项红兵; 关键词：小干涉RNA 腺病毒科

rAd5／NR2B镇痛疫苗对神经病理性痛大鼠认知功能的影响被引量：1: 2010年; 目的评价N-甲基-D天冬氨酸受体2B亚基（NR2B）基因重组腺病毒（rAd5／NR2B）对神经病理性痛大鼠认知功能的影响。方法雌性SD大鼠40只，体重180～200g，随机分为4组（n=10）：对照组（C组）、rAd5／NR2B镇痛免疫组（rAd5／NR2B组）、神经病理性痛组（SP组）和rAd5／NR2B镇痛疫苗＋神经病理性痛组（rAd5／NR2B＋SP组）。C组和rAd5／NR2B组分别胃内灌注生理盐水0．1ml和rAd5／NR2B镇痛疫苗1×10^8 PFU，2周后重复灌注。SP组制备神经病理性痛模型，1周后腹腔注射生理盐水0．1ml。rAd5／NR2B＋SP组胃内灌注rAd5／NR2B镇痛疫苗1×10^8 PFU，2周后重复灌注，再1周后制备神经病理性痛模型。测定大鼠机械缩爪阈值（MWT）。行Morris水迷宫实验测定大鼠认知功能，记录潜伏期和游泳速度。采用免疫组织化学法检测大鼠海马NR2B的表达水平。结果（1）与C组比较，rAd5／NR2B组MWT差异无统计学意义（P〉0．05），SP组和rAd5／NR2B＋sP组MWT降低（P〈0．05）；与SP组比较，rAd5／NR2B＋SP组MWT升高（P〈0．05）。（2）各组游泳速度比较差异无统计学意义（P〉0．05）；与C组比较，rAd5／NR2B组潜伏期差异无统计学意义（P〉0．05），SP组和rAd5／NR2B＋SP组潜伏期延长（P〈0．05）；与SP组比较，rAd5／NR2B＋SP组潜伏期差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）与C组比较，rAd5／NR2B组和rAd5／NR2B＋SP组海马NR2B表达差异无统计学意义（P〉0．05），SP组海马NR2B表达上调（P〈0．05）；与SP组比较，rAd5／NR2B＋SP组海马NR2B表达下调（P〈0．05）。结论rAd5／NR2B疼痛疫苗对神经病理性痛大鼠认知功能无明显影响。; 杨少兵王公明杨辉高峰田学愎刘希江罗婷田玉科; 关键词：腺病毒科神经痛

NR2B多肽疫苗对神经病理性痛大鼠的镇痛效应被引量：2: 2008年; 目的评价NR2B多肽疫苗对神经病理性痛大鼠的镇痛效应。方法成年雌性SD大鼠，体重180～200g，制备保留性神经损伤（SNI）模型，7d后选取SNI模型制备成功的大鼠18只，随机分为3组（n=6），NR2B组沿背部两侧皮下多点注射NR2B多肽疫苗50μl（含NR2B100μg）3次，每隔2周注射1次；PBS组和KLH组分别给予PBS50μl和匙孔虫戚血蓝蛋白100μg，均用弗氏佐剂稀释至100μl。分别于制备SNI前1d（基础值）、第1次免疫前1d及第3次免疫后14d时测定机械痛阈；分别于制备SNI前1d及第3次免疫后14d时取血清和脑脊液，测定NR2B抗体滴度，然后处死大鼠，取L3-5，脊髓组织，其中3只采用免疫组化法测定脊髓背角胶质纤维酸性蛋白表达水平，反映星形胶质细胞激活程度；另外3只采用Western blotting法测定脊髓背角NR2B蛋白表达水平。结果NR2B组第3次免疫后14d时血清及脑脊液中均可检测到NR2B抗体，而SNI前1d时未检测到NR2B抗体，PBS组及KLH组各时点均未检测到NR2B抗体。与基础值比较，各组机械痛阈均降低（P〈0．05）；与PBS组和KLH组比较，NR2B组第3次免疫后机械痛阈升高，脊髓背角星形胶质细胞激活程度降低，NR2B蛋白表达下调（P〈0．05）。结论NR2B多肽疫苗对神经病理性痛大鼠具有镇痛作用，其机制与进入脊髓的NR2B抗体下调了NR2B蛋白表达有关。; 冯颢王公明王红陈建平杨少兵许爱军曹菲田玉科; 关键词：N-甲基-D-天冬氨酸神经痛

大鼠蛛网膜下腔移植超顺磁性氧化铁纳米离子标记永生化神经前体细胞后的磁共振成像追踪被引量：2: 2006年; 目的观察大鼠蛛网膜下腔移植超顺磁性氧化铁纳米粒子(SPIO)标记永生化神经前体细胞后的磁共振成像追踪。方法用SPIO-多聚赖氨酸复合物(SPIO-PLL)标记永生化神经前体细胞,采用普鲁士蓝染色鉴定SPIO-PLL标记永生化神经前体细胞的效率,采用MTT法检测标记前后细胞活力,用免疫细胞化学法对标记后1周的细胞进行抗巢蛋白、微管相关蛋白和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色,检测标记细胞的分化能力。蛛网膜下腔置管成功的SD大鼠10只,随机分为2组(n= 5),标记细胞组和未标记细胞组,蛛网膜下腔分别移植标记后2 d的永生化神经前体细胞和未标记细胞,移植后30 min及移植后1周用MRI对蛛网膜下腔的细胞进行活体追踪,用组织切片进行普鲁士蓝染色和抗猿肾病毒40大T抗原染色。结果SPIO可以高效率地标记永生化神经前体细胞,普鲁士蓝染色显示SPIO-PLL标记永生化神经前体细胞质内出现细小的天蓝色铁颗粒,SPIO-PLL标记对永生化神经前体细胞的活力没有明显的影响,标记后1周,抗巢蛋白、微管相关蛋白染色阳性,GFAP染色阴性。标记细胞组移植后30 min及移植后1周MRI活体检查发现标记细胞在磁共振成像上呈明显的低信号改变,脊髓组织学切片结果普鲁士蓝、抗猿肾病毒40大T抗原染色阳性；未标记细胞组磁共振成像上无明显低信号改变。结论利用MRI技术可以对蛛网膜下腔移植后的标记细胞进行活体追踪。; 田学愎田玉科李祥徐颖高峰杨少兵; 关键词：干细胞移植磁共振成像蛛网膜下腔

下调TPH2重组慢病毒载体的构建及鉴定被引量：4: 2012年; 目的构建色氨酸羟化酶（TPH）-2基因小干涉RNA的重组慢病毒载体。方法在TPH-2mRNA序列中选择1个特异性靶序列，体外合成对应发卡样DNA片段，经退火后，将其定向克隆入siRNA载体，获得重组质粒pU6-MCS—CMV—rrPH2-shRNA，后者与慢病毒试剂共转染293细胞，同源重组产生Lentivirus—TPH2-siRNA。经聚合酶链反应（PCR）鉴定目的基因的表达并测定病毒滴度。结果PCR表明Lentivirus—TPH2-siRNA构建正确，病毒滴度为3×10^8TU／ml。结论获得的Lentivirus—TPH2-siRNA可以用于转基因瘙痒治疗的实验研究。; 戴少军杨少兵刘成李荣春项红兵; 关键词：色氨酸羟化酶小干涉RNA 慢病毒

杨少兵

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