杨云庆
- 作品数：51 被引量：318H指数：13
- 供职机构：云南农业大学更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家科技重大专项昆明市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生哲学宗教更多>>
- 小反刍兽疫病毒竞争ELISA检测试剂盒生产工艺研究被引量：2
- 2014年
- 为研究小反刍兽疫病毒(PPRV)竞争ELISA试剂盒的生产工艺,本试验利用昆虫细胞表达的PPRV核蛋白及其单克隆抗体,建立一种特异性高、敏感性强的PPRV竞争ELISA检测方法,并对该方法的各个步骤进行优化,确定该方法的最适条件,从而确定竞争ELISA的操作程序。并用该方法与OIE推荐的PPRV rC-ELISA抗体检测试剂盒同时检测来自西藏、内蒙古共977份临床羊、牛血清样本,结果显示特异性、敏感性、符合率分别达99.89%、93.82%、99.38%。本研究建立的PPRV竞争ELISA方法为该病毒检测试剂盒的研制奠定技术基础,为小反刍兽疫的防控提供科学依据。
- 刘晓慧杨云庆叶玲玲祝贺吕建强赵文华颜红尹尚莲花群义杨仕标张光培周晓黎董俊艾军
- 关键词：小反刍兽疫病毒N蛋白单克隆抗体竞争ELISA
- 主要动物蚊媒病的流行概况及传入我国的风险分析被引量：3
- 2016年
- 蚊是传播乙型脑炎病毒、赤羽病病毒、西尼罗病毒、水泡性口炎病毒、基孔肯雅热病毒、东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、裂谷热病毒等动物虫媒病毒的生物媒介。动物蚊媒病对畜牧业发展构成了严重威胁,造成巨大的经济损失。本文整理汇总了主要动物蚊媒病的流行状况及其相关传播媒介蚊科的种类,并对未传入我国潜在的动物蚊媒病进行了风险分析,为我国动物蚊媒病的进一步研究和预防控制提供理论依据。
- 刘建利花群俊杨云庆叶奕优杨俊兴
- 关键词：风险分析
- 水泡性口炎病毒核蛋白基因的克隆和序列分析被引量：5
- 2004年
- 目的 对水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因进行PCR扩增、克隆和序列分析。方法 将水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因片段克隆至pMD18 T载体中 ,构建N基因重组质粒载体。进行PCR及限制性内切酶分析 ,筛选获得N基因插入的阳性克隆。经核苷酸序列分析 ,并与Genbank中的VSV编码核衣壳蛋白N基因序列进行比较。结果 该序列与VSVNewJersey型的 0 9/ 82 HD B株同源性最高 ,核苷酸和推测氨基酸的同源性分别为 98.9%和 98.8% ,有 13个核苷酸差异 ,伴有 5个氨基酸改变 ,第 72位的酪氨酸变为组氨酸 ,第 89位的缬氨酸变为异亮氨酸 ,第 183位的天冬氨酸变为天冬酰胺 ,第 2 0 5位的苯丙氨酸变为亮氨酸 ,第 4 18位的丙氨酸变为缬氨酸 ;与In diana型各株的同源性较低 ,与Glasgow株相比 ,核苷酸和氨基酸的同源性分别为 6 7.9%和 71.6 %。结论 已成功地克隆了水泡性口炎病毒N基因 。
- 花群义徐自忠金宁一杨云庆董俊杨晶焰周晓黎
- 关键词：水泡性口炎病毒核蛋白基因克隆免疫血清学分子生物学
- 非洲猪瘟病毒PCR检测方法的建立被引量：20
- 2009年
- 根据GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白基因vp73的序列,设计一对特异性检测引物,扩增片段251 bp,建立了检测ASFV的PCR方法。与OIE推荐使用的2组PCR引物进行比对试验,结果表明,3组引物的检测特异性相当,但本研究设计的引物灵敏度至少高出100倍。表明所建立的PCR方法能敏感、快速地检测非洲猪瘟病毒。
- 曾少灵花群义张彩虹曹琛福秦智锋阮周曦杨俊兴卢体康吕建强孙洁陈兵林庆燕杨云庆
- 关键词：非洲猪瘟病毒聚合酶链反应
- 实时荧光定量RT-PCR检测猪水疱病病毒的研究被引量：3
- 2006年
- 按照猪水疱病病毒结构蛋白VP1基因序列,设计合成引物和探针,经各反应条件的优化,建立了实时荧光定量RT-PCR技术,对猪水疱病病毒进行了特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,实时荧光TaqManRT-PCR可检测到每个反应相当于1×102拷贝病毒RNA;与FMDV、VSV等其他水疱性病毒不发生交叉反应;制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽,相关系数为0.993;与常规的RT-PCR比较,该方法具有快速、特异、敏感、重复性好、可同时检测大量样品等优点。
- 钟金栋花群义肖荣海夏雪山杨云庆周晓黎董俊邓祖洪
- 关键词：猪水疱病病毒聚合酶链反应
- 蓝舌病、口蹄疫、小反刍兽疫和水泡性口炎多重PCR检测方法的建立被引量：5
- 2015年
- 为建立一种检测并鉴别蓝舌病病毒、口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒和水泡性口炎病毒感染的方法,针对蓝舌病病毒NS3基因、口蹄疫病毒3D基因、小反刍兽疫病毒N基因和水泡性口炎病毒N基因序列设计引物,优化反应体系和扩增条件,建立了一种同时检测4种病毒的多重PCR方法。对建立的多重PCR检测方法的特异性及敏感性进行检验,结果表明建立的多重PCR检测方法敏感性强、特异性良好,对4种病毒的最低检出限分别为PPRV 103 copies/μL、BTV 103 copies/μL、VSV 103 copies/μL和FMDV 102 copies/μL。本方法的建立对临床感染蓝舌病等4种病毒的病畜进行快速检测具有十分重要的意义。
- 秦敏邹丰才杨云庆祝贺聂福平王煜杨俊叶玲玲周晓黎艾军
- 关键词：蓝舌病口蹄疫小反刍兽疫水泡性口炎多重PCR
- 蓝舌病灭活苗免疫与自然感染的鉴别诊断研究
- 周晓黎艾军杨云庆叶玲玲张光培祝贺董俊尹尚莲
- 蓝舌病主要侵害绵羊等反刍动物,是世界动物卫生组织(OIE)需通报的动物疫病,中国规定为一类动物传染病.2008年,欧洲流行的蓝舌病病毒8型,给当地反刍动物的健康造成极大危害.欧洲国家采取了疫苗免疫的方式进行防控.为此,课...
- 关键词：
- 关键词：蓝舌病动物疫病疫苗免疫动物传染病
- 非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法的建立被引量：18
- 2010年
- 依据非洲猪瘟病毒(ASFV)的vp73基因保守序列,设计了特异性引物与TaqMan探针,扩增片段69bp,建立了ASFV实时荧光PCR检测方法。与OIE推荐用于检测ASFV的实时荧光PCR和普通PCR方法进行比对,结果显示,本文建立的方法与OIE两种检测方法的特异性相当,灵敏度与OIE荧光PCR方法相当,但比普通PCR方法高出至少10倍。标准定量曲线显示,本文方法最低检测限可达10 copies/μL病毒DNA(相关系数为0.993046)。重复性试验的批内CV值为0.61%～1.14%,批间CV值为1.37%～3.14%,表明本文方法的重复性和稳定性良好。可见,本文建立的基于vp73基因的ASFV实时荧光PCR检测方法具备快速、准确、灵敏的特点,将为检验检疫部门防御ASFV传入我国提供更多技术支持。
- 曾少灵花群义杨俊兴张彩虹孙洁阮周曦吕建强曹琛福秦智锋陈兵陈书琨杨云庆
- 关键词：非洲猪瘟病毒实时荧光PCR
- 非洲马瘟检疫技术研究
- 徐自忠花群义周晓黎董俊杨建明杨云庆秦智锋吕建强
- 该课题研究已按照合同规定的研究内容和考核指标，完成了项目的主要研究任务，达到了预期目标：1、成功构建了AHSV VP7蛋白和NS3非结构蛋白克隆载体及表达载体并进行了高效表达。本研究用合成的AHSV VP7基因为研究对象...
- 关键词：
- 关键词：马瘟基因检疫
- 水泡性口炎病毒核蛋白基因的表达及初步应用被引量：10
- 2004年
- 将水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因片段克隆至pMD18 T克隆载体质粒中 ,构建N基因克隆重组质粒 ,进行核苷酸序列分析。然后亚克隆插入pBAD ThioTOPO表达载体 ,经PCR限制性内切酶分析、测序鉴定 ,筛选获得N基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆 ,成功构建了水泡性口炎病毒N基因重组表达载体。经L Arabinose诱导表达 ,可稳定、高效地表达N蛋白抗原。SDS PAGE、Westernblotting及间接ELISA试验结果表明 ,表达蛋白为融合蛋白 ,质量约 6 3 5kD ,其表达产量约占菌体总蛋白的 16 % ,相当于 92mg L。融合蛋白中含有水泡性口炎病毒群特异性的核蛋白抗原 ,应用表达的VSV核蛋白抗原建立了酶联免疫吸附试验 ,通过对 186份山羊、豚鼠实验动物人工感染VSV的血清样品和参考血清样品的检测 ,并与微量血清中和试验进行了比较 ,结果表明 :以表达的VSV核蛋白为包被抗原的酶联免疫吸附试验是一种特异性强、敏感性高、快速、简单、安全的检测方法 ,抗原制备成本低。
- 花群义金宁一徐自忠杨云庆董俊杨晶焰周晓黎
- 关键词：水泡性口炎病毒核蛋白基因克隆
