- 利用微量量热技术研究地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶基因在大肠杆菌中的表达
- 本研究主要是将地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶高产菌株中的碱性蛋白酶基因克隆到不同的载体上,分别为pBE2和pET28a.碱性蛋白酶基因序列包括上游调控序列、信号肽、前导肽、成熟酶和下游调控序列等,根据不同组合得到四个不同的片段,...
- 李美菊陈向东刘义徐婧沈萍
- 关键词：克隆大肠杆菌地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶基因
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- 枯草芽孢杆菌重组菌株的DNA释放及其表达产物分泌的研究
- 首次采用灵敏、快速、准确的荧光定量PCR技术对枯草芽孢杆菌重组菌株 DB104／pAPR8-1(含有地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶基因aprE的重组质粒)培养过程中释放碱性蛋白酶基因的规律进行了研究。结果表明,在对数生长的初期,...
- 李美菊王小娟张扬陈向东沈萍
- 关键词：枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶荧光定量PCR技术
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- 地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
- 本研究主要通过对地衣芽孢杆菌C6菌株的诱变,获得—碱性蛋白酶高产菌株L106,并进行PCR检测,得到其全基因片段,利用大肠杆菌表达系统进行表达.
- 李美菊陈向东杨明唐兵沈萍
- 关键词：地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶基因克隆大肠杆菌
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- 地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶基因在大肠杆菌中的表达及其微量热分析
- 本文利用PCR的方法克隆得到地衣芽孢杆菌C6的碱姓蛋白酶基因106-1(全基因)及其缺失不同调控区域的DNA片段106-2(缺失该基因的上游调控区)、106-3(缺失该基因的上游调控区)、106-4(缺失该基因的上、下游...
- 李美菊陈向东刘义刘国生徐婧沈萍
- 关键词：调控区
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- aprE基因表达的分子生物学和微量热法分析被引量：7
- 2005年
- 利用分子生物学方法(SDS-PAGE和酶活检测法)未检测到所克隆的aprE基因在大肠杆菌中的表达产物(碱性蛋白酶),而微量热法检测结果发现:重组菌株的生长代谢产热曲线之间存在明显的差异.根据这些差异,分析了该基因的上、下游调控序列对该基因在大肠杆菌中表达的重要作用,从而进一步对该基因进行了亚克隆,得到了生物学方法可检测到的表达产物.由此推测,微量热技术有可能为检测外源基因表达及其调控,以及为指导进一步基因工程操作提供一种新的快速灵敏的技术和方法.
- 李美菊陈向东刘国生杨洋王小娟耿晶梅运军刘义沈萍王金晶
- 关键词：基因表达分子生物学方法外源基因表达微量热法碱性蛋白酶检测法
- 不同培养时期的大肠杆菌和枯草芽孢杆菌间发生的跨属自然遗传转化被引量：1
- 2007年
- 携带穿梭质粒的大肠杆菌与作为受体的枯草芽孢杆菌分别培养至不同生长阶段混合均匀后静置40min,涂布选择性平板,37℃培养30h后得到一定数目的转化子,DNaseⅠ敏感实验证实质粒是通过自然遗传转化而非其它形式发生转移。实验发现大肠杆菌可以在特定生长时期向胞外分泌DNA,并且在对数期具有最高的提供质粒的能力,而生长后期的细胞因为体系中DNase量的增加转化频率下降。进一步的研究发现枯草芽孢杆菌在营养丰富的LB培养基中也具有与基本培养基中相当的转化能力,并且在对数生长前期具有较高的转化频率。
- 王小娟李美菊陈向东谢志雄沈萍
- 关键词：穿梭质粒大肠杆菌枯草芽孢杆菌
- 细菌菌株之间水平基因转移的研究
- 最近研究结果表明,水平基因转移是古生菌和细菌进化中主要和持续的动力之一。本课题以大肠杆菌HB101或HB101/pBE2/106-1和枯草杆菌菌株DB104或DB104/pBE2/106-1为研究对象,利用大肠杆菌和枯草...
- 王小娟李美菊沈萍陈向东
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- 细菌菌株之间的水平基因转移
- 最近研究结果表明,水平基因转移是古生菌和细菌进化中主要和持续的动力之一。本课题以大肠杆菌菌株HB101或HB101／pBE2／106-1和枯草杆菌菌株DB104或 DB104／pBE2／106-1为研究对象,利用大肠杆菌...
- 王小娟陈向东李美菊张扬沈萍
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- 枯草芽孢杆菌培养液中DNA和DNase的检测及其分泌规律的研究
- 据报道枯草芽孢杆菌在培养的一定时期可以向周围环境中主动分泌DNA,我们通过在LB培养基中连续培养枯草芽孢杆菌菌株DB104／pAPR8-1(该菌株中质粒含有地衣芽孢杆菌C6的碱性蛋白酶基因),收集培养液上清,用细菌过滤器...
- 李美菊陈向东王小娟耿晶梅运军王金晶张扬沈萍
- 关键词：枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶分泌荧光定量PCR
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- 跨属细菌间细胞接触自然遗传转化
- 将含有大肠杆菌一枯草芽孢杆菌穿梭质粒的大肠杆菌与作为受体的枯草芽孢杆菌分别培养至不同生长阶段,混合均匀后静置,经平板筛选、DNaseI敏感实验、质粒检测,发现不同属的G+和G-菌之间发生了质粒的自然遗传转化。实验中发现通...
- 王小娟李美菊陈向东沈萍
- 关键词：穿梭质粒大肠杆菌枯草芽孢杆菌
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