曹锐 作品数:15 被引量:27 H指数:3 供职机构: 湖南师范大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 湖南省自然科学基金 国家重大基础研究前期研究专项 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 天文地球 医药卫生 更多>>
大鼠海马细胞质膜的蛋白质组学研究 海马(hippocampus)是大脑颞叶内侧的重要脑结构,是哺乳动物学习和记忆的重要结构区。本研究从大鼠海马细胞质膜的富集,膜蛋白的分离鉴定等方面进行了蛋白质组学研究,建立了细胞质膜的生物素亲和纯化方法,该方法用包裹了链... 陈平 李选文 孙亚兰 熊继先 李水明 王美迟 曹锐 谢锦云 梁宋平文献传递 鼠肝质膜蛋白质组研究的方法评估 被引量:1 2007年 细胞质膜是细胞中重要的细胞器,在肝功能的发挥中具有非常重要的作用.使用蔗糖密度梯度离心纯化细胞质膜,通过电子显微镜观察和免疫印迹法检验膜的纯度.结果显示,与组织匀浆成分相比,质膜富集了20倍,线粒体的污染减少了约50%.提取的蛋白质用二/一维凝胶电泳(2DE/1DE)分离、胰酶酶解、电喷雾四极杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF)和基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF)鉴定,或者提取的蛋白质直接进行溶液内酶解、液相色谱串联电喷雾离子阱质谱(LC-LTQ)(鸟枪法)鉴定.一共鉴定了547个非冗余蛋白质,其中34%为质膜或质膜相关蛋白质.优化和评估了质膜蛋白质组研究的方法,且对鼠肝质膜蛋白质组进行了系统的分析. 陈平 张丽军 李选文 王细娥 曹锐 刘珍 熊继先 彭霞 魏颖娟 银兴峰 王贤纯 梁宋平关键词:细胞质膜 蛋白质组 鸟枪法 真核细胞质膜蛋白质组学研究动态 真核细胞质膜蛋白质组,是细胞内外物质,能量与信息交流的功能执行者,对其的研究是揭示很多重要的生命现象如配基内化,信号传递,细胞间识别,免疫应答,代谢调节,离子转运,细胞分泌等的最重要切入点。同时细胞质膜蛋白质组研究在新药... 梁宋平 张丽军 柳亦松 曹锐 谢锦云文献传递 不同分化程度的鼻咽癌细胞系质膜差异蛋白质组分析(英文) 被引量:3 2008年 本研究以CNE1和CNE2为材料,采用亚细胞蛋白质组研究方法研究不同分化程度鼻咽癌细胞系的差异蛋白质.首先用Percoll密度梯度离心法获得高纯度质膜,通过双向凝胶电泳分离、PDQuest软件分析后找出在肿瘤细胞中表达变化的蛋白质点,再用基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)进行鉴定,共鉴定到9个具有2倍或2倍以上差异的蛋白质.这些表达差异的蛋白质参与了细胞分化、代谢及细胞信号传导过程.我们对其中5个蛋白质进行了实时定量PCR分析,对其中4个蛋白质的表达进行了免疫印迹验证.本试验为研究不同分化程度的鼻咽癌提供了一种蛋白质组研究方法,并且找到了galectin-1、annexinⅡ等一些可能与分化相关的蛋白质.这些数据对于研究鼻咽癌的生物学特性具有非常重要的意义. 盛婷婷 张丽军 刘晓慧 贾小芳 熊继先 贺权源 曹锐 彭霞 石妮 梁宋平关键词:鼻咽癌 分化 质膜 质谱 蛋白质组 大鼠2/3肝切除72h后再生肝脏质膜比较蛋白质组学研究 被引量:2 2012年 大鼠2/3肝切除模型为研究肝细胞增殖和生理性血管生成提供了一个很好的活体内模型.为了揭示肝再生过程中与肝细胞增殖终止相关及与血管生成启动相关的质膜蛋白质,本研究对大鼠肝2/3部分切除72 h后的肝脏质膜进行了研究:利用两步蔗糖密度梯度离心法对切除组和假手术组的肝脏质膜进行纯化;然后通过双向电泳和质谱技术对肝切除样品进行了比较分析并对几个关键蛋白程序性凋亡相关蛋白-6和丝蛋白-A进行了免疫印迹验证.相对于假手术对照组(Sham组),21种蛋白质在切除后72 h的肝脏中上调,15种蛋白质下调.所鉴定的差异表达蛋白参与了血管生成、细胞分裂增殖和凋亡、细胞分化调控、肝脏组织重新构建、代谢及应急反应.本研究为肝脏再生及其血管生成的研究提供了理论依据. 冯灿 李江林 曹锐 陈平关键词:质膜 肝再生 双向凝胶电泳 蛋白质组学 利用磺基异硫氰酸苯酯化学辅助方法鉴定磷酸化肽修饰位点 被引量:1 2006年 利用MALDI-TOF质谱结合磺基异硫氰酸苯酯(SPITC)化学辅助的从头测序(de novosequencing)方法,将用固相金属离子亲和色谱(immobilized metal affinity chromatography,IMAC)选择性地从混合物中亲和提取的磷酸肽进行磷酸化位点测定,该方法只有肽键断裂产生的带C端的碎片离子系列(y+离子系列)出现在质谱图中,图谱背景清晰,信噪比高,单纯的y+片段离子系列使得谱图解析变得非常容易,对于多磷酸化肽的磷酸化位点,不需借助于任何软件,只需简单地计算两峰之间的分子量之差即可确定. 陈平 李水明 刘宇 刘中华 熊继先 孙亚兰 曹锐 梁宋平关键词:磷酸化位点 从头测序 质谱 多维色谱-串联质谱联用技术分离和鉴定小鼠肝脏质膜蛋白质 被引量:13 2005年 采用自动在线纳流多维液相色谱 串联质谱联用的方法分离和鉴定蔗糖密度梯度离心法分离和富集的小鼠肝脏质膜蛋白质 .以强阳离子交换柱为第一相 ,反相柱为第二相 ,在两相之间连接一预柱脱盐和浓缩肽段 .用含去污剂的溶剂提取细胞质膜中的蛋白质 ,获得的质膜蛋白质经酶解和适当的酸化后通过离子交换柱吸附 ,分别用 10个不同浓度的乙酸铵盐溶液进行分段洗脱 .洗脱物经预柱脱盐和浓缩后进入毛细管反相柱进行反相分离 ,分离后的肽段直接进入质谱仪离子源进行一级和二级质谱分析 .质谱仪采得的数据经计算机处理后用Mascot软件进行蛋白质数据库搜寻 ,共鉴定出 12 6种蛋白质 ,其中 4 1种为膜蛋白 ,包括与膜相关的蛋白质和具有多个跨膜区的整合膜蛋白 ,为建立质膜蛋白质组学研究的适宜方法和质膜蛋白质数据库提供了有价值的基础性研究资料 . 曹锐 张丽军 聂松 王贤纯 梁宋平关键词:串联质谱 质膜 蛋白质组学 细胞质膜蛋白质组学研究方法与应用 细胞质胰蛋白质组由于其在执行细胞生物学功能上的重要性,特别是在药理学,药物学研究上高度相关性,日益引起研究者关注。质膜蛋白组学研究研究也是揭示很多重要生命现象机制如信号传递,能量转换,配基内化,离子转移以及免疫反应等的重... 梁宋平 张丽军 柳亦松 曹锐 谢锦云文献传递 大鼠海马细胞质膜的分离及其蛋白质组学分析 被引量:6 2006年 运用差速离心和连续蔗糖密度梯度离心的方法分离纯化成年大鼠海马组织细胞质膜并用Western印迹对质膜样品进行检测.结果表明,在蔗糖密度梯度离心介质中,膜片主要集中于蔗糖浓度为32%~42%的区段(密度约1.13~1.18),其次是20%~25%(密度约1.08~1.10)的区段.39%(密度约1.17)层面上质膜浓度和纯度最高.一维SDSPAGE分离和CapLCMSMS分析后,通过数据库搜寻从大鼠海马组织细胞质膜样品中共鉴定出135种蛋白质,其中质膜蛋白和与膜相关的蛋白质共70种(占51.9%),主要包括Na+K+ATPase、谷氨酸天冬氨酸转运蛋白(glutamateaspartatetransporter)、亲脂素(lipophilin)、GLAST1a等.为研究海马组织细胞的功能和大鼠海马组织细胞质膜蛋白质数据库的建立积累了有价值的资料. 周铁杨 周健 曹锐 沈建英 陈平 王贤纯关键词:质膜 蛋白质组学 海马 电泳 磺基异硫氰酸苯酯化学辅助MALDI-TOF-PSD de novo测序方法对SDS-PAGE分离的蛋白质进行鉴定 二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)技术对膜蛋白质组分离有其局限性,本实验采用一维SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离质膜蛋白质,利用MALDI-TOF质谱源后衰变(PSD)技术结合化学辅助磺基异硫氰酸苯酯(SPITC)de n... 陈平 李选文 曹锐 孙亚兰 谢锦云 梁宋平文献传递